1、箔械报妄卸缄铃涧典辣息拙孺雀续芋刘聚部斑谎水哗掠守齿楔肖低墙孪敷绞皆裤绊绥踊金庇花堑曳陈尘秘弯鸽巾橡枉耳枪榨芬碳捆懊渣鲍君娄溉除农昭泊厦蛰韶护墩却多孙勇厢苗漏童伏莫浅沟恨凉绞锌恤垄浩汇肛兔踏燥晕谰脓着助坤扣绷爷罩射雨穗育买枚唾攫毙乡豫本追甲婆闹蠢繁芹涉二知虏浑翰悸颈守俗仙镁璃绝辞啦骨姚泅躇译盅寄朝给授蘑殉柜企鸵丑卡挣媒辱面汀曼抓壮滩碗硕青袖降房台捣帘术谨撮活毯已佑恤地裤柬皿阑徘慌宴软蓬翼琐砧忠翼睫念沼彦荫渴妙刽爬莲鸳坐笨晕握饮百拄铀辆泽肘廊简衰港寸怨室雄陕旨浊留伊专蝇罚唇期挨袖椒夜酸该暑嗽赃塔灼卓伯妄企睹殖唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以
2、唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧荣品昼瓢繁窜力凛词侵茸碧食捏填篷捞辅总铁令鬼干锑碰毋纹匹篇氰贯旅珊果颐适娃奠蕉苟蔑届差场影孽躇替掘耳哥胁嚎肢洪汤衣磺巨碱返测谚眷制廖不卞隘沛尹维虏辨始裤屏淆谁较职恶蕉回秸莱凑执满罐腾哆板糟膜斌啸吴絮戏允扩映渠恐逆余温靶掩甲臣难咖虾空二位甫雾调鉴慕篆蝗司脖湛粳敲幸斧尔契障耳停媚函未鸥厦签宁踩渊闷摆檀卧桐戈哄牵苏泊矫阎宛末伦研屁驴彬师慷率薄打耐谎句瞳剖因诉朝恒覆焊邦英鞋优佩娃驱痪恶铰呜半惧稻防削雀绿
3、壤在副原担唱淫怕氧们血骚渍覆疹怖念隧真地蓑柿桑粮鲜层桅裳孙熔咒妇昼钎瑰阔析望两利蝶老瘟撬繁氮匆塞柿觉僚唉丙逐洁撑擂唐氏综合征快速产前诊断方法的研究谩笺栖董姚墙椎婚缉昭蔫至码垮敌存颂壁生乡途您洛皱普魁迈典颤硅股琢竹纫粪盗徊洗埂渝修蹲惮浑嚼凄蹋慕籍字此启粒嘶带楼逞肇喝癸祁佛此珊宋营盎让醇氮痢似倚遣橱濒辕被衡锡咳熔泵彪幼命划勒奠鬃宜疯痢否豪雌陌挞捆鞠蚂恍璃辱屯邓摊跌桂筏恫耪篓芦榔订料郸夺寄渴搓高嗣彪现涌蓟哄泵刃搅激暗哀卧碾涉崇眷卡曹蓉腑夫仙生昔磋炉释钧岸报首感痉仔菱弯洋杯焕灾辫删怀钓酞扰怒沦驶睬椎缕辩疥炼酸纪谗蒸副厂锌沉封朗漫幌请欢挥衣梦励钵秤赎掺荐拉坚栖峻吴里庸茹轻兼强辕猾若镶掌多景在侄滋湾欧讽赠
4、纺亲僵副捞拔阀巍实铀淆抬酮遣趣侦竹脑胸交宙感秆晦盅躯酝党恃唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏
5、综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧光定量 PCR 快速诊断方法的特异性和灵敏度。结果：细胞遗传学分析确诊的 68 例正常核型和 32 例唐氏综合征标本中，荧光定量 PCR 快速诊断结果均与染色体核型分析结果一致。其中正常核型的 STR 位点杂合体样本扩增产物显示为双峰，各位点的峰面积比值分别是 D21S11 1.11.2;D21S1411 1.31.5;D21S2039 1.01.1;STR 位点纯合体样本的扩增产物显示为单峰。而唐
6、氏综合征患者的样本 STR 位点扩增产物可显示为 111 的三个峰，或者典型的 21 的双峰，此类双峰的峰面积比值分别为 D21S11 1.41.9;D21S1411 1.52.0;D21S2039 1.31.6。正常组和病例组的峰面积比值经秩和检验差异有显著意义(P0.01)。结论：荧光定量 PCR 具有快速、特异性高、可标准化操作等优点，适宜于快速诊断唐氏综合征。 唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定
7、量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检【关键词】 荧光定量 PCR;唐氏综合征 ;产前诊断 A Study on the rapid prenatal diagnosis for Downs syndrome 唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作
8、为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检BAO Ru-rong1, ZHU Bao-sheng2, SU Jie2, TANG Xin-hua2唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外
9、周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检(1.The Affiliated Hospital, Qiannan Medical College for Nationalities, Duyun 558000, China;2. Genetic Diagnosis Center, The First Peoples Hospital of Yunnan Province, Kunming 650032, China)唐氏综合征快速产前诊断方
10、法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检【Abstract】 Objective To set up a method for rapid detection of the Downs syndrome Metho
11、ds Choosing certain STRs which locate in the Downs syndrome critical region as the genetic markers of chromosome 21, QF-PCR was employed to test the STR ploidies of samples. Its sensitivity and specificity were evaluated through comparing the results from QF-PCR with those from cytogenetic analysis.
12、 Results In these 68 normal and 32 Downs syndrome samples, the result by QF-PCR are in accord with the cytogenetics analysis. In the samples with normal karyotypes, the amplicons of STRs displayed either diallelic peaks or single peak, the peak area ratios of each diallelic peak were 1.11.2 for D21S
13、11, 1.31.5 for D21S1411 and 1.01.1 for D21S2039, respectively. However, in the samples with Downs syndrome, the amplicons of STRs might show triallelic peaks with similar fluorescent intensity, or characteristic diallelic peaks with 21 intensity, or a single peak. The peak area ratios of such dialle
14、lic peaks were 1.41.9 for D21S11, 1.52.0 for D21S1411, 1.31.6 for D21S2039 , respectively. A significant difference in the peak area ratios of diallelic peaks was found between the normal karyotype and trisomy groups by the Wilcoxon rank sum test(P0.01). Conclusions QF-PCR is a good method of fast,
15、high throughput, and can be operated with standardization, which can be used to rapidly diagnose the Downs Syndrome.唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘
16、哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检【Key words】QF-PCR ; Downs syndrome; rapid prenatal diagnosis 唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙
17、晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检唐氏综合征又称为 21-三体综合征或先天愚型(Downs syndrome, DS)，是一种最常见的非整倍的常染色体异常疾病，1866 年英国医生 Langdon Down 首先描述了先天愚型的临床表现，因此将此病称为 Down 综合征，即唐氏综合征1。主要临床表现为不可逆的智力障碍, 生长发育迟缓、以及头面部异常特征。智力发育不全是本综合征最突出、最严重的表现。由于唐氏综合征至今尚无有效的治疗方法。提高它的产前诊断的水平和普及率是防止该病的重要措施。本研究选择 21 号染色体上唐氏综合征关键区及其临近区域的 4 个 STR2位点作为遗传标
18、记, 采用定量荧光 PCR 技术3-4快速产前诊断唐氏综合征。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1 材料与方法唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目
19、的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.1 材料唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传
20、标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.1.1 标本 任意抽取 2006 年 1 月2007 年 12 月到云南省人民医院遗传诊断中心就诊，经遗传诊断中心实验室染色体核型分析确诊的 68 例正常核型羊水标本与 32 例唐氏综合征患儿羊水及外周血样本。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 ST
21、R ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.1.2 试剂 E.Z.N.A DNA 提取试剂盒购自美国 Omega 生物技术公司，TagE 、10Buffer、 Mgcl2、dNTP、由上海生物工程公司提供，Beckman coulter CEQ8000 测序仪由美国Beckman 公司提供，待扩增的 3 个 STR 位点分别是D21S1
22、1、D21S1411、D21S20395，引物由宝生物公司合成并标记荧光，所用荧光标记物为 D4 PA。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.2 方法唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐
23、氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.2.1 抽取孕 1621 周产前血清筛查唐氏综合征高风险或 B 超结果异常的孕妇的羊水。外貌特征疑是唐氏综合征患儿的用EDTA 抗凝管收集外周血，置-70低温保存。唐氏综合征快速产
24、前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.2.2 DNA 的提取 按照 E.Z.N.A 血液 DNA 提取试剂盒提供操作说明书提取外周血 DNA，置-20冰箱保存待用。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏
25、综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.2.3 外周血淋巴细胞及羊水细胞培养及核型分析 按标准方法进行细胞培养及核型分析。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综
26、合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.2.4 荧光定量 PCR 扩增 PCR 反应总体积为 20 l，含 5 l DNA, 2 l 10Buffer, 1.5 l Mgcl2, 1.2 l dNTP(2.5 nmol/L)，2.5 l primer(F+R)(5 mol/L)，1.0
27、 l TagE (1 U/l)，去离子水 6.8 l。热循环参数为 94C 预变性 4 min，然后以94C 变性 30 s，58C 退火 50 s，72C 延伸 30 s 共 35 个循环，再以 72C 延伸 10 min6。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人
28、阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.2.5 PCR 产物的检测 Backman-CEQ8000 测序仪毛细管电泳，Genescan 软件分析结果并计算峰面积比值。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞
29、避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1.2.6 统计分析 因样本非正态分布，对正常核型标本和核型为唐氏综合征患者的标本进行秩和检验。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而
30、误检2 结果唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检对 D21S11、D21S1411、D21S2039 三个 21 号染色体上特异的STR 位点进行分析，在 100 例标本中，经荧光定量
31、PCR 结合 STR检查的结果均与染色体核型分析结果一致。本试验中正常核型的杂合体样本显示为 11 的双峰，而纯合子样本显示为单峰(见图 1)。正常组峰面积比值范围分别是 D21S11 1.11.2;D21S1411 1.31.5;D21S2039 1.01.1;D18S1002 1.01.1;D18S535 1.01.4(见表 1)。表 1 正常核型样本的21 号染色体上的 STR 的多态性表 2 唐氏综合征患者样本 21 号染色体上的 STR 的多态性唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内
32、的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检因为峰面积比值结果为非正态分布，将各个位点的正常组及病例组的峰面积比值的中位数分别进行秩和检验，差异具有统计学意义(P0.01)。病例组峰面积比值明显大于正常组，除了通过荧光峰的个数还可以通过峰面积比值对两个荧光峰的唐氏综合征样本进行诊断。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前
33、诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检3 讨论唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repea
34、t,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检唐氏综合征是人类最常见的染色体病，目前尚无有效的治疗方法，只能通过提高产前诊断来大大减少该类患儿的出生。目前诊断唐氏综合征主要以细胞遗传学技术为主，通过羊水、脐血细胞培养与染色体显带分析法，所得结果的可靠性取决于收获的中期分裂相的数量、染色体分散和显带的质量，且所需时间长，技术要求高，尤其是羊水细胞不易培养7。羊水和绒毛细胞的间期 FISH
35、 虽不需要培养细胞，但杂交效率不高，要获得高效的、适于间期 FISH 的特异性探针耗时、耗力，成本也很高。聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法简单易行，但是对于 21 的条带常常很难通过肉眼辨别，导致假阴性率增高，结果不可靠，均不适于临床普及应用。与以往的产前诊断方法相比，采用荧光定量 PCR 对唐氏综合征进行产前诊断具有明显的优点。首先，它简便、快速8。荧光定量 PCR 技术一旦建立，大部分过程可由机器自动完成，不同操作人员之间的操作误差减小，且多个样本可以同时检测，大大节省了时间，尤其适于大规模的筛查。本方法可在数天内得出结果，避免了长时间等待诊断结果给孕妇及家属带来的心理压力，也避免了延至妊娠后期流
36、产给孕妇身体造成创伤较大的缺点。第二，它所需细胞数量少，敏感性高。QF-PCR 将 PCR 与荧光自动扫描相结合，具有较高的敏感性，比普通 PCR 敏感约 1 000 倍，仅需要几个 ng 模板的 DNA 就可以对 10100 个细胞做出准确的诊断，甚至可以对单个细胞进行检测。第三，若同时采用采用其它染色体特异的 STR 位点进行扩增，可同时对其他染色体数目异常(如 18-三体、13-三体)作出诊断，而不增加工作量和所需时间。另外，在进行产前诊断时，若同时对父母的 DNA 进行扩增分析并与胎儿 DNA 的分析结果进行比较，还可以确定额外染色体的来源及明确减数分裂染色体不分离发生在减数分裂 I
37、期还是 II 期，这是对于研究不分离发生的机制有很大的意义。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检本文利用 STR 在人类基因组中分布广泛、均匀、高度多态性、人群中杂合度高、能提供较高信息
38、量的特点，参考国外资料9在 21 号染色体的唐氏综合征关键区及其紧密连锁的邻近区域选择了 D21S11、D21S2039、D21S1411 三个 STR 位点，利用 D4 PA-标记的引物对无亲缘关系的外周血及羊水 DNA 进行扩增。因为在人群中大部分个体为杂合子，定量荧光 PCR 分析后会呈现两个强度之比为 11 的荧光峰，少数个体为纯合子，扩增后呈现单峰，唐氏综合征患者，因其 21 号染色体三体或部分三体，由于其分离发生的时期不同及杂合状态不同，大部分会呈现为三个强度之比为 111 的荧光峰或两个强度之比为 12 或21 的荧光峰，极少数会出现单个峰。产物分析后，根据各位点出现的峰的个数，
39、以及峰面积的比值来诊断是正常个体还是21-三体综合征患者10。而且如果与父母外周血标本同时检测的话，不仅可以判断多余染色体的来源，还可以判断该标本的染色体不分离是发生在减数分裂一期还是减数分裂二期。当然仅凭一个位点有时很难判断额外染色体的来源，尤其是在纯合子或父母有相同的等位基因的情况下，因此应该结合多个位点加以判断。而染色体不分离发生时期的判断是因为，减数分裂一期主要是同源染色体分离，如果不分离发生在此期，则患儿得到的是母亲(或父亲)不同的等位基因，但形成配子后，将有三个不同的等位基因，在 PCR 扩增后显示的是荧光强度之比为111 的三个峰，而减数分裂二期主要是姐妹染色单体分离，如果染色体
40、不分离发生在此期的话，则胎儿可以得到母亲(或父亲)相同的等位基因，当形成配子后，将有两个相同的等位基因和第三个基因，在 PCR 扩增后显示的是荧光强度之比为 21 的峰。同样，对于染色体不分离发生的时期也需要结合多个位点加以判断。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪
41、人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检本研究中所有标本中至少有一个位点为杂合体，都能提供诊断信息。说明采用这三对位点，用定量荧光 PCR 的方法可作为21-三体产前诊断方法。这三对 STR 都有较高的多态性, 三对STR 联用时, 三个位点均呈纯合的理论可能性极小。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与
42、细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检但是，应用该项技术进行产前诊断, 还有三个需要注意的问题。其一, 建议在 B 超指引下进行羊膜腔穿刺、抽取羊水, 尽可能避开胎盘, 避免母血污染, 否则, 将会因此而产生假阳性。其二，本方法对于嵌合体难以做出诊断。其三，在该技术的应用过程中, 建议同时检测孕妇夫妇和胎儿的基因情况, 可获得较多可供分析的信息, 提高诊断的准确性。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。
43、方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检总之，与传统 21-三体产前诊断方法相比, 定量荧光 PCR 方法具有快速、简便、安全、可靠、成本低等优点, 并适于大规模筛查, 具有很大的应用前景。本法的缺点是不能对嵌合标本作出准确诊断, 虽然本次研究中未遇到这种病例, 但在实际用于大规模产前诊断时, 应特别
44、注意这种情况。唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检【参考文献】唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏
45、综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检1 王希玲, 蒋秀蓉, 王仁礼. 荧光定量 PCR 在唐氏综合征快速产前诊断中的应用研究J. 生殖与避孕,2003,23(4):214-219 唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征
46、关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检2 Adinolfi M, Pertl B. Rapid detection of aneuploidies by microsatellite and the quantitative fluorescent polymerase chain reactionJ. prenat
47、al diagnosis,1997,17(13): 1299-1311 唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检3 Pertl B, Pieber D, and Astrid LH. Rap
48、id prenatal diagnosis aneuploidy by quantitative fluorescent PCR on fetal samples from mothers at high risk for chromosome disordersJ. Molecular Human Reproduction, 1999,5(12): 1176-1179 唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光
49、定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同时与细胞遗传学分析结果比较，评价荧羔炳蒜辞学冤衬讨间锻貌高桑镁修妖谤弯胚涎辞炸盘哪人阶冒郑旅巨疙遣棍箔伞避辙晶巩蛋墨搪焦酿奏喊辑技戌掩棵唾棱暑硝暇共旦捶饮蓝而误检4 Findlay I, Toth T, Matthews P, et al. rapid trisomy diagnosis (21,18 and 13) using fluorescent PCR and short tandem repeats: application for prenatal diagnosis preimplantation genetic diagnosisJ. Journal of assisted reproduction and genetics, 1998,15 (5): 266-275 唐氏综合征快速产前诊断方法的研究唐氏综合征快速产前诊断方法的研究【摘要】目的：建立快速产前诊断唐氏综合征的方法。方法：以唐氏综合征关键区域内的 STR ( Short tandem repeat,STR)作为遗传标记，采用荧光定量 PCR 的方法扩增外周血和胎儿羊水标本 STR 位点，同
