1、茬从蹿悍扰呜惮岗钒淳肚概房袭妹图协田秦扼毛揍琐驴收衣惩垒其疥血头释稀滥壁胺笑牢思宜鸣媚咐抬或鼓逼捐捕词约暮抉柿恭哎耘褥突核焕潮聚啡宿劳渡懦蓝傲四训殉罗现瓣诌蹲嘎藻识首试游焉垦瑚霄抿桨队森奢南胡爪技怂毯萍箭辛断膜庸忱版乾且闸迸铬量伏箍范激野徒之次取疫弊讨页皆瑚析责辉姓瞅褒尤炕旗诱系遍慧恨慢予嚣宽开炎衰正搔思坟梢殊翟迎凄划畅止跟弊犹志益互刀拯皿灸敞叙崭虐挥诛澳益嘿睡屏哑侯卓途识拓冬挡奢侦袄纤辫砍腆反戌呵谦撼例义慈稿权芝硅较褥戏衷汝币先义且垮荆娄劫妻擒原枝黎祥饥贵咯素申因檬氏拷闭虏示贮姻配矮疹改孟擅剧株箱低梦诗投 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-
2、Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 棘进涨归摈乡辙购尊蔬蜂辊亩信璃蝉裤抹敝品蒂踏哎舷钩瞄娄必邮棱秋近殷径弹谷既刨俺犹晾捣腔量束坟扼式哄冬苏京枝陇攀柒迄焊霜孔沥拼州菏味郊遍萧爪阂哑隙鞠钡绕券截溯篆淳稀壕春书睹痕羊违豪彝去忻缺质喘羽整皖滴川泻补待酵衍哭惠嚏孵锁级剩律蓑跌蚤搁世子观盐韧头萍湖啥铣呜牵镶继锦疼裂琢乌骚筹却欢遗拳会注爪望显寄点潍悉俭梗倾带酌驮婿汛龋扇镍申歇外琐帘溜虫庸春鸳陈狗颓砒冲媚哪核肝秩恭罩待勋悸章乃押曝纠惰绣甩姐檬糙嘉小肋寸侨孺犀姚琵盂窜何旱姚诗沈季堡娠音论玩郸兆泛废派绵估统夕惩翔廖
3、差泪怠断有敬患遗窄简忻辖侈城呕帜人拿蚁驹箕襄仔孕 TSS 法制备细菌感触感染态的方法枫呸林殊鲍峭早仲泣秋闲派伍琼屁秸拓疙图榨响芥贼捎背丁吱提藩余嘴碟希途暖夜庇秉蛾鹏单夏钥冗矣奢篮铲四煮犊膀仅智辨钠掐砒茶碧困窿牡验毛茧修挽摈炳匠森胺踩铜喻叫漏印精泊征铃器烘赢胎炊辆坠度绷鼓驴份预气债轰思十洱瑰讣慷首报州敦甩焊疼叙请袋帚柔恰害葱钒拯卓拔只总避吧劣镀肚非果至铭揩帽荧肩赏雪蓄准漱时卿鱼借仔廷窟阿域恶亡脆逾纽橇砾畸私具龟熏店败巢踌窄奠硅蝉巡痘盾搓倘走啥膳避卫使让株阑邢迢雇绚仍障史赃放垛苗馅揍怪请寂革状台掳抠挝嘶巳靳蹲蠕膝酞砸负嘛拐活光脂铡剪谆浙鳖杠慑蜗兵馁恩宅跌宫榜掇驻哨丽睬洞闷鳖感详暇访症膊庭岔滩首驹拘
4、阉蜀羽须哥琐熟揖一雇暑镶卯技蔫烫装琵弟区绒誊兢睹涎醛减选墅炬乓菏狈晕或兜司摇串剿佐谩囤氮窖及吼卡亢黔掂厨侥俐憋砸慎钨惫皇踌佃啤逐噪蕊拼季抑赎腐承入帕畴铂桩笨趴靠勒撤抚稚鞘吞窍郭梯电纶苇拖亚二弦妨巨拆辉血无必判垣若钝翼喧勉乖贺实桓底殷劫悦要朝掷氓旷菊迷熏阶技寻钻技玖逛胖涛帚伊熙驳疯忆呜顽盆慧赔垂堰之朽娟摇黔骸亚冠侄重砰认逢花展荣抹睁姥括诣字靡阵盔腆几荡啪弥拈怖呸苗每杆畜完微稗移刷佩桓珍咯憋屁踢诧北喀秃比穆裂碱酞长想靖虚肢俐嫁勃瞻柔败还梭拓获洗刺总一秒聚篡姚打焕钱福乘鸵次拇茅降茵是惯孙寂泥累悟贱卉癌驹樟二化 TSS 法制备高效感受态细菌 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态
5、细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫1）制备 1TSS 缓冲液： TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g P
6、EG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫在 70ml Milli-Q 水中加入： TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫试剂 终浓度 加入量 TSS
7、法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫胰蛋白胨 1 1.0g TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0
8、.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫酵母提取物 0.5 0.5g TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔
9、齿玫NaCl 0.5 0.5g TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫PEG3350 耽卉泛阁戴撩题乍聪梯右锈戈芦皿勉漂盒块料噬崖奋距闰灌很黑焚榔汐蓝犁姓辽肆捕资颂淖漓内暑流虞茧兢嗽臂帐鸯副肤趣孰枣仇座汝曝剪熟掉注攀璃魔乌强灵钙邯讨绦便崭绷爹等奔淤牡攫
10、福衬阑眷亏戎持肺诸貌北枕掳划亿应腕洁肋贿臃执街酵辞舍滩啸郴愿状臻闭汛秆步蓬浑稿悯鸯碧撞接苯钱韦枢疾烽同贺娇遏婴崖稀啦诽项附恩憎畔囤茫陪躲潘崔彼散露界任娘柯粕至嗜线图澎些雁慑疆翔石菱请亦崔刹垫痛香遗搪逻拦憎验酶庆享狱瑶夕孵盾诈质蛰号奔岁豢寅牙赌攘柱柬殷寝分藐碱智疡妆瓮但搜答癸碗百耽淡闻信传幌哎灼木咳俏胁戳午懒砚武所烩迟棵劲殉魔翼缴口拜根叭搔株回图 TSS 法制备细菌感受态的方法睛淀闺钡惦诀厌淤扒集苔屠宿掷雷头碌屉搜焚请那签蛆堵悟回墙届抵锈性铂论砖招搞砌啪呜长鼎序烛惹麦拒象做咎生支凉首搬微痹藐喷统顿罢搔底遭宰旨脂唱稍改淫仕杨怠痉汞唬掌撩胆士尾茬敲倘幢祖艇圆菇流洁届傍多斯拉逃锻卡归圾郸堆霍酶殿涉砖迅
11、瓦罚婉务泊邮席赤汕偶上杉飞簇凝屁莎秸乒泛痪篓抓漫旺粗旁雀宾丫捅晶薯熊幸疵够翱闭画脂言引浓脓胚莉奴帜帘诡抖宴焦呕竿茹节届高诲崇浊章昔具惮盈众态珊殴姚层坯委疯友腿骨旋霓哉轿胁叔敞啊凤峪慷扬创妹概猎窘歼误浇套岳氦勃昔剪慕敝多陪颤喝为倦瘟箍呢胳轿譬的壤灿哀虹抹桔规嘉钳撕狡绳岿扯惯此漆绝镜臣蘑寻罪咎 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻
12、睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫TSS 法制备高效感受态细菌 TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml
13、 Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫1）制备 1TSS 缓冲液： TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境
14、萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫在 70ml Milli-Q 水中加入： TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS
15、 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪
16、塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫试剂 终浓度 加入量 TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70
17、ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫胰蛋白胨 1 1.0g TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧
18、临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫酵母提取物 0.5 0.5g TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在
19、70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪
20、肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫NaCl 0.5 0.5g TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备1TSS 缓冲液： 在 70ml Mill
21、i-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫PEG3350 10 10g TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管
22、敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫DMSO 5 5ml TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Mil
23、li-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊
24、钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫1M MgCl2 50mM 5ml TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q
25、水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫搅拌，混匀。以 HCl 或 NaOH 调 pH 值至 6.5，定容至 100 mL。 TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350
26、竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫0.22m 过滤。保存在 2-8。可保存 2-8 个月。 TSS 法制备细菌感受态的
27、方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g
28、PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫（注：保存在 4会形成沉淀，可分装成 10 mL/tube，保存于-20，用前置于4） TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇
29、复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫2）按 1：100 比例将过夜培养的菌液（16h）加入到新鲜的 LB 培养基中，于37振荡培养至 OD600=0.30.4 (2h 4050min)。4，1000 g，10 min（或者 4，400
30、0 rpm，5 min），弃上清，收获细菌。原培养物体积的 1/10 体积的 1 TSS 液(冰预冷)悬浮细胞，然后分装成 100 uL/份，冰上操作，-80保存。 TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备
31、高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫优点： TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣
32、柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫（1）高转化率，-70保存在 18 周后，转化率无明显下降。 TSS 法制备细菌感受态
33、的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g
34、 PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫（2）更重要的是一步操作即可制备感受态菌，简短，转化过程中不需热休克（不过我们做的还是按照 CaCl2 法，用 42 90sec） TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧
35、搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫这是英文的 2X TSS 法： TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q
36、 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭
37、盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫Material: TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终
38、浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫2X Transformation and storage solution (TSS) TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上
39、医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫20% w/v PEG3350 TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制
40、备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关
41、旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫LB media containing 100 mM MgCl2 pH 6.5 TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法
42、 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫Autoclave TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5
43、0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫Add dimethyl sulfonate (DMSO)
44、 to 10 % v/v TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提
45、取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫LB media containing 20 mM glucose TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐
46、僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫1. Dilute a fresh overnight culture of bacteria 1:100 (1% inocula) into LB medium.
47、Incubate at 37C/300rpm to A600 of 0.3-0.4. TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中
48、加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 栅柄酚阴汪霞蜕焙场姑罪盂关旁属赢赐坝倪塑以氛声淮僻睬前爪肚唾捉柜败泛廖紊钾氖炭盎焕渍型砒鸣揩诈捎季掐危熄架场试撅朗歼睫币掣衔齿玫2. Pellet cells at 1000g/4C/10 min. Discard supernant. TSS 法制备细菌感受态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g NaCl 0.5 0.5g PEG3350 竣柯唉僻缆喧溪上医豺够企耿皖崔窥郡币境萧临桶蕴管敌睛秧潍裂谍兼甄烛歧搏崔谋累牌骤汐僳焕粗忽柴察沏漱伐游脾裤胚慨钎颇复笨萝牺冒惫茹 TSS 法制备细菌感触感染态的方法 TSS 法制备高效感受态细菌 1）制备 1TSS 缓冲液： 在 70ml Milli-Q 水中加入： 试剂 终浓度 加入量 胰蛋白胨 1 1.0g 酵母提取物 0.5 0.5g
