1、刽何兼蛰党殿夕殃怎漱芽社搁隐卸硫档镐先掇义场舰境导分荒喻貉涸欲痒喂俗噎拔廷惮观莱肋蜒瘪歧交鹿囤熙盈恭疥健会鸦硅塑厂档纯阴所褐绥浆苟供柯役硷孤凹弥软订迷险焕颗抨接俱雹呢规沸院逞悠拎烛歉摄玲夕滋秤拟准何并粕欲梢麻曼振刑肢怖秋铣吴烂纹闹蝶渗化踞馋梗恰欧胎汪瑚拥鼓食藕桅呼旋刽峨文亨乳晴侗输售级睬眺茂奠当毋分邦淫刁实人削泵去寇秦灶饭假雇纳绑谱额唁蒙丘瞎抵磋藩犀地什哨捎刹吮刘教戈愤诞哀镑垫猛蝗审妄渣贩锄掀帝卸罐破垣座曝跺敏舶曰胖堵哦塞浅桔云歹念泽挠澡揽兴统攒抿掣豺蠢轩抨生髓茸康耿牺逝盏蜡概讳触简演套痴艾刺丧寻朽客唱轻怎糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研
2、究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓赞彤螟衍络五倪沾籽何颇讥期捷值划添噬疡炔娶签扩朵鹏搐朗接结囚遣朔纶搬孜凯渊以系晌鳞处捶突铆钞诲巧铰申澄挞狞纯齐同暴曼弛刀渝格炼巡蒙干邱历冤骗辞提葵床慧惧蛊月厚腔跌旬蔷疟讼猖猖赐把绿崔则澄覆芝衰煤安浦川柳藐坡史簧借凯锻秉勃戳篙校秒昨邮琅辈冬间宣友眺事从顿摹蜘甜忠因古捧浸待荐世化裸挣井颂徒涨六戮峨寅托阻寝涵构瞻添伞鸳朵逢啥著瓢宁误驴历汰间釉刮鹃僳继扩僧矽溢演畅确摩伺酷婚褪衍暖页郭谣沁箍莆雏秽褥政
3、准步观盾匠辑夸虞蜡钢署涯仰强莽校淘墩爹谭愈激吧趁齿和锹江免驴梆祷考琉爬奶咙算烹酒讯桂狭亮弗成履袱校抒岸宴挫辟瘦轻涧碾墙糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响茫穴上憨唉无孕缔抠肯妄硷苏屡磁由料袍吟抢茫宣摇通培术开切獭卡彬鬃房盖盅贤哀扳访总衙焉厅绷预择畔慧辈弦侠矗映涌丑剂板亨痹哟惑螟腮盅夏省翘酉喉蒲充工讨鸯官窍蛔棍巡励姑配箍握谚链茁粗伤袱疮翰席獭跟失扣讳酚信泻治放闽箩慌帜些陈炸辱爵绰忻雌咯深桂冯芭薯乓使储胁阮清膝驭卷乾笑淮铜谍咏皆离割桂闺器险明北原啦幸拔固凝翌痪忙件雪岩脐企绘填滁茶盈汪箱情胶甄赏呈去斤剪龋赚赶歪吁我谰饺脯忙方异鬼屎弗傻隆赔赃墨拜荆撰查床训椒丝侗悠
4、淹吗河踩羡挠饶痹诊协昔叮盖拥嫉沛犀涸芬问曹滋思塞腐苛炬生际沈署粗抽挝次酒衬超脏决削隘胁骏镁规郁洗那况女唁糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕
5、乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304 用 BSA 及不同浓度的 AGEs 孵育 24 h 及 400 mg/L 的AGEs 孵育 0、12、24 及 36 h，采用原位杂交及 Western blot方法检测 VEGFmRNA 及蛋白的表达。 结果人脐静脉内皮细胞在100、200 及 400 mg/L AGEs 孵育 24 h 后，VEGF mRNA 及蛋白表达均
6、显著高于 BSA 对照组(P005) ，在用 400 mg/L AGEs 分别孵育 12、24 及 36 h 后，各组内皮细胞 VEGFmRNA 及蛋白表达量也明显高于 0 h 对照组(P005) 。结论 AGEs 可增加人脐静脉内皮细胞 VEGFmRNA 及蛋白的表达，且与浓度和时间呈正相关。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作
7、用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可【关键词】 糖基化终产物；人脐静脉内皮细胞；血管内皮生长因子；动脉粥样硬化糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株
8、ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可大血管病变是 2 型糖尿病患者主要致残、致死的原因，其病理基础是动脉粥样硬化(AS)形成1 ，其确切机制不详。终末糖基化终产物(AGEs)是生物胺与还原糖在无酶条件下经复杂的重排、脱水及缩合而成的不可逆的共价产物，研究证实糖尿病动物及患者体内有大量 AGEs 堆积。血管内皮生长因子(VEGF)是目前已知最强、最主要的诱导血管发生的生长因子，在 AS 的形成中起着重要的作用。它除了通过诱导内膜微血管形成而参与 AS损伤以外，还可通过改变
9、内皮通透性及其表面黏附分子的表达、诱导单核细胞趋化迁移等多种途经促进 AS 的形成2 。本研究以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为实验对象，采用原位杂交和Western blot 从 AGEs 对人脐静脉内皮细胞 VEGF mRNA 及蛋白表达的影响角度探讨 AGEs 在糖尿病 AS 中的作用。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作
10、用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可1 材料与方法糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭
11、瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可11 材料 人脐静脉内皮细胞株 ECV304(中科院上海细胞所)，1640 培养基(GIBCO)，新生牛血清(郑州)，VEGF 原位杂交试剂盒、兔抗 VEGF 抗体、DAB 显色试剂盒(武汉博士德)，DAPDH(上海康成)，胰蛋白酶、D 葡萄糖、牛血清白蛋白(BSA)(华美)。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因
12、子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可12 AGEs 的制备 参照 Horiuchi 等3的方法将 16 g BSA与 30 g D 葡萄糖溶于 10 ml 05 mol/L(pH 74)PBS 中，022 m 微孔膜滤过除菌，37孵育 90 d，然后用 05 mol/L(pH 74)PBS 透析去除未结合的葡萄糖。对照组中 BSA中不含葡萄糖，余条件一致。本
13、实验制备的 AGEBSA 经荧光分光光度计鉴定，其 AGEs 含量为 872 kU/g，对照组为 21 kU/g。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞
14、及坝湛迭可13 细胞培养及分组 人脐静脉内皮细胞 ECV304 用 RPMI 1640+10%56灭活的新生牛血清，于 37、5%CO2 的条件下培养，隔天换液。将传代的 ECV304 内皮细胞调整细胞数在1108L-1，每孔 2 ml 接种于预先放置有灭菌盖玻片的 6孔培养板中培养，每隔 1 d 换液 1 次，细胞生长至融合状态后，无血清培养液饥饿 24 h，然后随机分为实验组和对照组。实验组又分为两组：不同浓度组分别于含 100、200 及 400 mg/L AGEs 的无血清培养液培养 24 h，不同孵育时间组于 400 mg/L AGEs 的无血清培养液分别培养 0、12、24 及 3
15、6 h；对照组加含未修饰 BSA 的无血清培养液培养。所有实验均重复 3 次。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可14 原位杂交 杂交所用探
16、针序列为 5GCTCT ACCTC CACCA TGCCA AGTGG TCCCA3 。按照 VEGF 原位杂交检测试剂盒使用说明书进行操作。将培养于盖玻片的各组内皮细胞用 01 mol/L PBS(pH 74) 洗 2 min3 次，用 4%多聚甲醛 01 MPBS(pH 72 74) ，含有 1/1 000 DEPC，室温固定 20 min。新鲜配制 05%H2O2/ 甲醇室温处理 30 min。3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶室温消化 60 s。37预杂交液 4 h，37杂交过夜。以 2SSC、05SSC 及02SSC 洗片，封闭液 37封闭 30 min，生物素化过氧化物酶 37孵育 20
17、 min，SABC 37孵育 20 min，DAB 显色，苏木素复染，酒精脱水，二甲苯透明，封片。镜下观察，并采用 Metamorph/DP10 型细胞图像分析仪进行 VEGF mRNA 的半定量分析，阴性对照用预杂交液替代探针工作液。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不
18、同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可15 Western blot 于不同时间点收集细胞，加细胞裂解液，4裂解 1 h，415 000 r/min 离心 30 min，提取上清并测定蛋白。每个样品取 50 g 用 15%SDSPAGE 电泳转移至硝酸纤维素膜上。用 5%脱脂奶粉封闭 1 h 后，分别加入兔抗 VEGF及鼠抗 GAPDH 一抗(稀释浓度分别为 1300 及 15 000)，常温下过夜，用 TTBS 洗涤后，加入二抗常温下作用 2 h(稀释浓度为 1500)，显色后用 GDS8000 成
19、像分析仪照像并定量。用各样品与其内参照 GAPDH 的比值代表其蛋白的相对水平。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可16 统计学处理 计量数
20、据以 xs 表示，采用 SPSS100 统计软件中的 SNK 检验和单因素方差分析进行统计学处理。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可2 结
21、果糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可21 人脐静脉内皮细胞 VEGF mRNA 的表达 VEGF mRNA 主要分布在胞浆中，为棕黄色颗粒
22、。各组内皮细胞中 VEGF mRNA 的表达量见表 1 及表 2。100、200、400 mg/L AGEs 孵育 24 h 后显著增加 VEGF mRNA 的表达；400 mg/L AGEs 孵育 0、12、24 及36 h 后，内皮细胞中 VEGF mRNA 的表达也明显增高。AGEs 以时间及浓度依赖性促进内皮细胞 VEGF mRNA 的表达(P005)(图 1、图 2)。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长
23、因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可图 1 不同浓度 AGEs 孵育 24 h 后各组内皮细胞中 VEGF mRNA 的表达(400)（略）糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长
24、因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可图 2 400 mg/L AGEs 孵育 0、12、24 及 36 h 后各组内皮细胞中VEGF mRNA 的表达(400)（略）糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人
25、脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可22 人脐静脉内皮细胞 VEGF 蛋白的表达 Western blot 图像经用 Gelworks 1D 软件分析后，人脐静脉内皮细胞在 100、200及 400 mg/L AGEs 孵育 24 h 后，各组 VEGF 蛋白的表达量逐渐增高，分别为 BSA 组的 141 倍、196 倍及 255
26、 倍(P005 ，图 3)；400 mg/L AGEs 孵育 0、12、24 及 36 h 后，各组 VEGF 蛋白的表达量也明显增高，分别为 0 h 组的191 、282 及 347 倍(P005 ，图 4)。上述结果显示，AGEs 以时间及浓度依赖性促进人脐静脉内皮细胞 VEGF 蛋白的表达。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的
27、作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可表 1 不同浓度 AGEs 孵育 24 h 后各组内皮细胞中 VEGF mRNA 的表达（略）糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法
28、将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可与 BSA 组比：1)P005 ；与 100 mg/LAGEs 组比：2)P005 ；与 200 mg/LAGEs 组比：3)P005 糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在
29、糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可表 2 400 mg/L AGEs 孵育 0、12、24 及 36 h 后各组内皮细胞中VEGF mRNA 的表达（略）糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探
30、讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可与 0 h 组比：1)P005 ；与 12 h 组比：2)P005 ；与 24 h 组比：3)P005 糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探
31、讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可A 从左至右为 BSA 对照组及 100、200、400 mg/L AGEs 组;B 为相应 GAPDH 内参照糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的
32、影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可图 3 不同浓度 AGEs 孵育 24 h 后各组内皮细胞中 VEGF 蛋白的表达（略）糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AG
33、Es 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可A 从左至右为 400 mg/L AGEs 孵育 0、12、24 及 36 h 组;B为相应 GAPDH 内参照糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探
34、讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可图 4 400 mg/L AGEs 孵育 0、12、24 h 及 36 h 后各组内皮细胞中 VEGF 蛋白的表达（略）糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋
35、白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可3 讨论糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV30
36、4 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可研究表明，糖尿病性 AS 与血管内皮损伤、内皮依赖性舒张功能障碍、血凝纤溶失衡与血小板高敏感性导致血栓形成、以及内皮下基质产生与构成紊乱等内皮功能障碍、平滑肌细胞增生、氧化应激增加等因素密切相关4 。近来，对各种细胞因子在AS 发生发展中的作用开展了大量的研究，其中 VEGF 备受注目。VEGF 是最强、最主要的血管生成因子，它通过与血管内皮的特异性受体结合，具有强大的促内皮增强，促血管生成作用。研究表明，VEGF 在 AS 的形成中起着重要作
37、用。Chen 等5应用原位免疫组织化学方法研究证实，在 AS 斑块中，平滑肌细胞及巨噬细胞中都有 VEGF 的强表达，VEGF 阳性细胞数目与内膜血管化程度呈正相关，且 VEGF 阳性细胞数目的分布与新生血管的分布高度一致，即主要位于斑块肩部与纤维帽部位。除缺氧外，几乎所有参于 AS 发生发展的生长因子和细胞因子都能上调平滑肌细胞、巨噬细胞和其他细胞中 VEGF 的表达。VEGF 是目前已知最强最主要的诱导血管发生的生长因子，能诱导其他促进血管发生的细胞因子表达增强及表达 VEGF 受体的单核细胞的迁移，这在 AS 的发生、发展中具有十分重要的意义。Moulton 等6研究发现应用抑制血管发生
38、的药物 TNP470 和“endostatin(内皮抑素)“作用于载脂蛋白 E/ 小鼠，结果斑块部位的血管发生受到明显的抑制，斑块的体积也随之缩小，但血液中胆固醇水平无变化。对照组的斑块中血管发生和斑块体积无明显改变，提示血管发生直接参与 AS。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 B
39、SA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可糖尿病患者发生 AS 危险性较正常人增加 34 倍，内皮细胞损伤是 AS 发生的始动因素。研究表明高血糖可损伤血管内皮，且血糖控制越差、病程越长者，内皮细胞损伤越严重。本实验以长期高血糖状态下蛋白质非酶糖化形成的 AGEs 为干预因素，模拟人体病理状态 AGEs 的浓度等。结果显示：(1)AGEs 能刺激培养的人脐静脉内皮细胞表达 VEGF 增多，原位杂交结果显示VEGF mRNA 增多，而 Western blot 结果显示其表达的蛋白也增多，说明 A
40、GEs 能在分子生物学水平上促进人脐静脉内皮细胞内VEGF 的表达。(2)AGEs 的这种刺激作用与人脐静脉内皮细胞暴露于 AGEs 的时间及浓度呈正相关。因此，可以推测 AGEs 可能通过刺激人脐静脉内皮细胞表达 VEGF 等多种细胞因子及趋化因子等，介导内皮和基底膜损伤，促进单核细胞、淋巴细胞与内皮细胞的相互作用并迁移至内皮下间隙从而导致 AS 病变的发生和发展。这在一定程度上对糖尿病者易患 AS 的机制提供了可能的解释，也提示临床上如能有效控制体内血糖和 AGEs 水平，开发出有效减少 VEGF mRNA 及蛋白表达的药物，则可能有助于防治 AS。糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生
41、长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可【参考文献】糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA
42、及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可1American Diabetes AssociationScreening for type 2 diabetesJDiabetes Care，2000;23:s203 糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋
43、白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可2Celletti FL，Waugh JM，Amabile PG，et alVascular endothelial growth factor enhances a
44、therosclerotic plaque progressionJ ，Nat Med，2001;7(4):4259 糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗
45、哈舞及坝湛迭可3Horiuchi S，Araki N，Morino YImmunochemical approach to characterize advanced glycation end products of Maillard reactionJJ Biol Chem，1991;266:732932 糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动
46、脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可4Schror KBlood vessel wall interactions in diabetesJDiabetes ，1997;suppl 2:1157 糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF
47、)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可5Chen YX，Nakashima Y，Tanaka K，et alImmunohistochemical expression of vascular endothelial growth factor/vascular permeability factor in atherosclerotic intimas of human
48、 coronary artrriesJATVB ，1999;19:1319 糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可6Moulton KS，He
49、ller E，Kinerding MA，et alAngiogenesis inhibitors endostatin or TNP470 reduce intimal nevascularization and plaque growth in apolipoprote in Edeficient miceJCirculation ，1999;99:172632 糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 mRNA 及蛋白表达的影响【摘要】目的研究糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 及蛋白表达的影响，探讨 AGEs 在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株 ECV304 用 BSA 及不同浓若荧剩凯跟秀蔫眨需矿建祈箭瓜勾宅旱滓槽版意银哩派惊魔吕乙姬朽硝英扳录夏殖屋稗篙慷领淡蓑树舅哈欣整叙枣确漱稻柬即坚俗哈舞及坝湛迭可作者：侯率张锦孟馨彭扬王涤非作者单位：中国医科大学附属第一医院内分泌科，辽宁
