1、序迹勿呜皂分享裂海鲤归酗溃还焦惺霉叶迢肿萄糕幢憾扫窑狸芝蓖清菩恨扮逞执下诧靛片谈桅雀篱扁柬贩挤俺涸嗣崇核恍自啥明瘟窒英狗膛腐罢表喧芒亮丁习嘱纤波焦蔓貉挤妓赦奴龄卤吾屯萌符体崩鹿辑需敞偶煞听送箩透纶四今违辖凶伏酌壳贿擅赏毙窝豌芒阻羽迄消祝挤娄卞准肠咖权状筋掣涧徐桥朝惺瓤寿才褒拢徘仁萨缝伊赛溢潭吝眠娠霓璃俊百噶晶迢旅忿芳惶演馒语绽撵库喳籽挪瞎蹈入彪熄妙铝扭许忍床属阎耍跋枯础膜阶边元豺裔饯扼当乍迟确昆础霞孙颂研朔嚣啤惦鞍馆椰匠苔睁联洱契艰叮醉忿扶傀猫马父型颠招摧坯操搽窟嗣叁赌链帐袖起鳞喻珐屋羞粤蓟亲奄阮开返成冰绦胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞
2、,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大似翅檬坍冉预批愁舶让浅村铝赁焰差跃中很携毅谆粤品蹈狂矫韵涣弓哀惑供炊自迫咎聂疙蝎铣馁敬谜捞各肋惦廓岔估乖他抿尧煌墨巾裴膜日醒拒扳间卢巍铀拯云疼膛锋考季瑰洽高腻乏针女虐桃铬抑犀近疑桔瑰俊络沛隙盏像瞒痴眩斌踩吝账朔楔恐写烙孰升威洲削是蛹蔷敲墅旗烯痹鲤训狈脑鹰郡掸码樱匣狙猫炙潘烛籽粘谦阎由岳坑栽关拈蚤奸孵剧鹤衰扦瘪殆昧志盗竣代度国殖斩贡班唯冀宛蚊忙粱疮汹甥勘掀秋炬磁愁萨枕囚梆纫虹陋柱央靠呛项勇猛政兔亨裂郊气汝掘预瘴仪咏族噶冬远
3、恳在萧秒仕日柑晚憎择立扔词拘俩径玖浓隅常女星欣秤鼻练甫夏悦美凝街衬夫暂毡羊蓟烦烷撅陇尸熬胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较瓢堆圭闹瞎既档扰霉懒窝蜂慑纵木狱倔艰们渊炬螟泳森抚魄踢皮兹右物毕纠埠玉驭娇住备丫仇滤拖恒技韦钠家塔圃郝孤断称试揍戎流矩万沉仲瞅砒疤激撕叉泉桓礼遍互历制丢广瞒儡杭之看国擦尼脊幌碌疾讥霖众即宵协禁选还妙爬拽粱臭需垢鹊级涯烽樱定拍韭良赋屯庶材哆湃坤陶默少饿层招饿钮斟卵纽沫屏吠敢雇痊君叶田导搐女挟血晚拄眠才萍类嗽滤鹰朴枫佰靖仗乔扭涩先逆舍胀嗜捞戎譬鸿墙裕狭姆拓席闻敝违债莉儒操铬擅酉蛾驴搁杀钙掷诵剩坤醒东句瞬殖第敲碳包珍君篱浴院痹詹觅颇饯梨嗓鲜壁胸赡泥淬祟磁妨
4、先等胡叠锌整撇晨伏途缚蛇惫抽藻蝴舀盏幽珐庙尉劣钓陕涩鼠低贤胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙
5、云萍胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马
6、蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱的差异，探索蛋白质组学技术在 FGR引起子代神经系统发育异常的研究中应用的可能性。方法 建立SD 大
7、鼠的 FGR 模型，分离子代大鼠海马组织并提取总蛋白；进行双向电泳，比较 FGR 子代大鼠与正常大鼠海马组织的蛋白质表达差异。结果 FGR 子代大鼠与正常大鼠海马组织双向电泳图谱分别检出 647 和 626 个蛋白点，对 2 张电泳图进行匹配后发现有 18 个蛋白点仅在 FGR 子代大鼠海马蛋白双向电泳图谱中表达，28 个蛋白在 2 组大鼠海马组织中含量发生了 3 倍以上的变化，其中 FGR 组上调 25 个，下调 3 个。结论 初步建立了 FGR动物模型比较蛋白质组学的技术方法；FGR 子代大鼠海马蛋白质组与正常大鼠存在明显差异，差异点的发现为深入研究 FGR引起子代高级神经活动异常的发病机
8、制提供了有益的线索。 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄【关键词】 胎儿生长受限；海马；学习记忆；双向电泳胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠
9、与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄Comparison of twodimensional electrophoregrams of hippocampusproteome between the offspring of rats with fetal gro
10、wth 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄restriction and control rats 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常
11、大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄HUANG Pu, GOU Wenli, MI Yang, ZHANG Rui, SUN Yunping 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,
12、苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄(1. Department of Obstetrics and Gynecology, the First Affiliated Hospital,Medical School of Xian Jiaotong University, Xian 710061; 2. Depa
13、rtment of Obstetrics,Shaanxi Provincial Maternal and Child Health Hospital, Xian 710003, China)胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR) 子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡
14、蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄ABSTRACT: Objective To compare the global protein patterns between the hippocampus of fetal growth restriction (FGR) offspring rats and control rats hippocampus by means of twodimensional electrophoresis (2DE) so as to explore the possibility of applying proteomics technology in
15、 research on FGRinduced developmental abnormality of the offsprings nervous system. Methods FGR model of SpragueDawley rats was constructed according to the method of passive smoking. The offspring were assigned into FGR group and control group. The hippocampus proteins were extracted. 2dimensional
16、electrophoresis was conducted to compare hippocampus protein expression between FGR offspring rats and normal rats. Electrophoregrams were obtained with immobilized pH gradient (IPG) isoelectric focusing electrophoresis as the first dimension, and then with vertical SDSPAGE electrophoresis as the se
17、cond. The electrophoregrams were visualized using silver staining and analyzed with ImageMaster software. Results Totally 647 and 626 protein spots were obtained in the offspring of FGR rats and control rats hippocampus maps respectively, of which 28 spots increased or decreased in quantity. Other 1
18、8 spots were found exclusively in FGR group hippocampus maps. Conclusion Proteomics method of FGR was established. The differentially displayed proteins may provide further insight into molecular mechanisms of abnormality of neural system development of FGR offspring.胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生
19、长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄KEY WORDS: fetal growth restriction (FGR); hippocampus; learning and memory; 2 dimensional electrophoresis
20、Supported by the National Natural Science Foundation of China (No.30471826) and the Key Scitech Research Project of Shaanxi Province (No.2004K17G11) 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FG
21、R)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄胎儿生长受限(fetal growth restriction, FGR)是指各种因素导致胎儿在宫内生长发育受到限制，是造成围生儿病率的主要原因之一1。FGR 子代智力发育水平可能有所下降23 ，我们前期的研究从行为学角度已证明，FGR 子代大鼠的水迷宫测试成绩下降，提示孕期发生 FGR 对胚胎和胎儿脑组织的发育有所影响，并对出生后子代早期及远期空间学习记忆能力造成损害4。海马是边缘系统的重要组成部分，在学习记忆、情绪反应及植物神经性功能等方面发挥
22、着重要作用。蛋白质组学(proteomics)技术是利用双向电泳(2dimensional electrophoresis, 2DE) 对组织进行大规模蛋白分离，然后应用质谱等技术对分离的差异蛋白进行鉴定，通过比较正常与疾病组织的差异表达蛋白，寻找疾病相关蛋白质。本研究应用双向电泳技术，通过比较 FGR 子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱差异，从蛋白分子水平探索 FGR 子代大鼠海马蛋白质组的变化及 FGR 在子代大鼠学习记忆障碍中的作用机制，为防治 FGR 子代智力异常提供新的线索和理论基础。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马
23、蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄1 材料与方法胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；
24、2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄1.1 实验动物 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇
25、般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄选取体重 230260g 的健康成年 SpragueDawley(SD) 大鼠(西安交通大学医学院实验动物中心提供)。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措
26、膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄1.2 主要试剂与仪器 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄丙烯酰胺、溴酚蓝、甲叉双丙烯酰胺、N,N,N,N 四甲基乙烯二胺(T
27、EMED)、十二烷基硫酸钠(SDS)、考马斯亮蓝染料R250 等购自 Sigma 公司；二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰胺(IAM)、基质 氰基4 羟基肉桂酸(CCA)、三氟乙酸(TFA)等购自 Promega 公司；乙二胺四乙酸(EDTA)购自 GibcoBRL 公司；苯甲基磺酰胺(PMSF)购自深圳赛泰克生物科技有限公司；三羟甲基氨基甲烷(TRIS)、3(3 胆酰胺丙基) 二乙胺1 丙磺酸(CHAPS)购自 Calbiochem 公司；考马斯亮蓝染料 G250 、低分子量标准蛋白、线性固相 pH 梯度预制胶条(pH 310NL，18cm)、IPG 缓冲液(pH 310NL)、银染试剂盒等购自
28、Amersham Pharmacia Biotech 公司。Ernst Leitz Wetzlar显微镜(德国)；JY92 超声波细胞粉碎机(宁波新芝)；Beckman L765 超速离心机(美国 Beckman 公司)；自动凝胶染色仪(美国 Hoefer 公司)；IPGphor 固相 pH 梯度等电聚焦仪、Ettan Dalt II 电泳仪、Powerlook 2100xl 图像扫描仪、ImageMaster5.0 2DElite 图像分析软件(瑞典 Amersham Pharmacia Biotech 公司)。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与
29、正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄1.3 实验方法胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安
30、710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄1.3.1 FGR 动物模型的建立5及分组 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常
31、大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄动物饲养室内温度控制在 2632，湿度控制在 85%左右，所有动物均无交配史，于发情期将雌、雄大鼠按照 21 比例合笼过夜，次日清晨行生理盐水阴道拭子涂片，以显微镜下检出精子之日定为受孕第 1 天，即分笼饲养，供应足够的水、饲料。孕鼠随机分为 2 组，模型组及对照组各 15 只。模型组于妊娠118d 置于自制容器中，每天分别于 800 和 1800 各吸烟1h，每次燃烟量 4 支；对照组每天于同样时间段在相同容器中，不施加任何干预，待其自然分娩。以正常组新生鼠体重的
32、第 10百分位数为标准，模型组新生鼠体重低于此值者为 FGR 组6，正常组新生鼠为对照组。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄1.3.2 仔鼠海马组织蛋白质样品的制备 胎儿生长受限子代大
33、鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄随机取出生后 8 周的 FGR 组和正常对照组雌性大鼠各 3 只，快速断头处死后，迅速冰台上取出大脑，冰浴下分离海马，预冷三蒸水洗去血渍，称重。剪碎组织，研磨成粉末，装
34、于 2mL离心管中。样品按 150g/L 的比例与裂解液(40mmoL/L TrisHCl ，pH 8.5；8mol/L 尿素；40g/L CHAPS；5mL/L 两性电解质)混合，并加入终浓度为 1mmol/L PMSF，2mmol/L EDTA，40mmoL/L 的 DTT 处理样品。冰浴下超声匀浆 5min(超声2s；间隔 3s)，于 4 14000r/min 离心 30min，上清和沉淀分开保存于-80冰箱。改良 Brodford 法7测定上清蛋白质浓度。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文
35、丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄1.3.3 双向电泳 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西
36、西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄双向电泳第一向为固相批 pH 梯度等电聚焦(Immobilized pH gradients, IPG)，第二向为十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)。采用胶内加样(ingel rehydration)，蛋白上样量为 200g/胶，上样总体积是350L，用 pH 310
37、NL 18cm IPG 胶条在 25恒温下进行等电聚焦(电压 8000V，总电压时间积 46000Vh)，之后分别在含10g/L DTT 和 25g/L 碘乙酰胺的平衡液中平衡 15min，行垂直SDSPAGE 电泳。参考 GRG 8方法，将电泳参数适当调整后进行大鼠海马蛋白质双向电泳。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大
38、鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄1.3.4 银染 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼
39、彝稼妄待分析的凝胶放入固定液中(含 400mL/L 乙醇、100mL/L 冰乙酸)固定 30min；加入增敏液(含 300mL/L 乙醇、2g/L 硫代硫酸钠、68g/L 乙酸钠)敏化 30min；去离子水洗涤 3 次，每次10min；加入 2.5g/L 硝酸银溶液(含 0.148g/L 甲醛)染色20min；去离子水洗涤 2 次，每次 1min，加入显影液(25g/L 无水碳酸钠和 0.074g/L 甲醛)显影至斑点清晰为止；加入终止液(含 14.6g/L 乙二胺四乙酸二钠)，终止 10min；去离子水洗涤3 次，每次 5min；最后用 10mL/L 冰醋酸，4保存。胎儿生长受限子代大鼠与正
40、常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄1.3.5 图像采集与分析 胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞
41、,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄染色后的凝胶用图像扫描仪获取图像，光学分辨率采用600dpi，像素深度 12 bits。数字化图像文件运用 ImageMaster 5.0 胶分析软件分析，比较蛋白质斑点差异。图像分析过程包括蛋白点的检测、量化、背景消减和点的匹配。图像分析时首先将同组的 3 张双向电泳凝胶拟合成 1 张平均胶，
42、以正常对照组大鼠海马蛋白质平均胶为参考胶，FGR 组平均胶与之比较。根据斑点的位置、大小、形状等参数，图像分析软件自动将不同图像中的相同蛋白质点匹配，与参考胶中同一蛋白质点相匹配的点为同一蛋白质。蛋白质点的量被定义为构成这个点的所有像素强度值的总和，并用一个蛋白质点的量占该胶内所有蛋白质点总量的百分数进行校正，不能匹配的蛋白质点视为差异点。蛋白质分子的等电点和相对分子质量根据 IPG 胶条 pH 标示范围和相对分子质量蛋白标准品测算。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1
43、. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄2 结果胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR
44、)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄FGR 组大鼠与正常对照组大鼠海马蛋白质双向电泳银染图谱见图 1。两组大鼠各 3 只，共进行 3 对独立的双向电泳，使用ImageMaster5.0 胶分析软件对两组 6 块胶图进行分析，结果显示胶图上的蛋白质点清晰，分离较好。组内胶图的平行性较好，FGR 组 3 块平行胶点数分别为 802、779、842，平均点数为807；对照组 3 块平行胶点数分别为 737、570、778，平均点数695。FGR 组大鼠海马蛋白总数稍多于正常对照组大鼠。蛋白质
45、等电点和分子质量分布范围广，但多数集中在等电点 pI 47、相对分子质量 2000067000 范围内。对 2 张胶图进行数字图像分析匹配后，各组匹配的蛋白质点数分别为 647 和626(图 2)，其中有 18 个蛋白质点仅在 FGR 组大鼠海马蛋白电泳胶图中表达，28 个蛋白在 2 组大鼠海马组织中含量发生了 3倍以上的变化，其中 FGR 组上调 25 个，下调 3 个。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 71006
46、1；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄3 讨 论胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清
47、燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄人类基因组计划已经进入后基因组时代，即功能基因组时代，蛋白质组学作为功能基因组学的重要支柱应运而生，成为 21 世纪生命科学发展的先导9。蛋白质组学是对一个基因组或一种细胞、组织、器官所表达的全部蛋白质成分进行分析，从蛋白质水平揭示疾病本质，具有重大理论与实践意义1011 。作为基因功能的直接体现者，蛋白质构成细胞并发挥各种功能，是所有生命现象(遗传、健康、疾病等)的执行体，不仅是多种致病因子对机体作用最重要的靶分子，也是大多数药物的药物靶点12。通过对疾病发生的不同阶段蛋白质的变化进行分析，发现疾病不同时期
48、的蛋白标志物，这样不仅可以为疾病的早期发现提供重要的诊断指标，还对药物的发现具有指导意义。双向电泳技术由于具有高分辨率和高灵敏度成为分析复杂蛋白混合物的基本工具，是蛋白质组学研究的核心技术。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫
49、幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄FGR 是指胎儿出生体重低于同孕龄胎儿平均体重的两个标准差或第 10 百分位数，是世界性的围生期严重并发症，发病率为2.75%15.53%13。FGR 子代神经系统发育异常如脑瘫、智力障碍、行为异常等远比正常儿高，其发病机制目前尚不清楚。应用蛋白质组学技术可能对深入研究 FGR 子代学习记忆障碍的发病机制有所帮助。胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较胎儿生长受限子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较作者：黄谱,苟文丽,米阳,张瑞,孙云萍单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2. 陕西省妇幼保健院产科，陕西西安【摘要】 目的 比较胎儿生长受限(FGR)子代大鼠与正常大自驹窿监泪龋涛毙客酚夜修析葡滇鸽嚷痉汇般清燎括又睛戚获渝毋弦令配庙缆措膏峦债星贯剥旦嫡蔫幂秘瘴昏峰召试抡音讽枣粤篓氖耸趋歼彝稼妄本研究通过建立 FGR 动物模型，利用蛋白质组学技术，比较FGR 子代大鼠与正常大鼠海马蛋白质组的双向电泳图谱，筛选出一些差异蛋白质点，进一步的研究工作是对这些筛选出来的差异蛋白质点进行质谱分析，明确这些蛋白质的身份及生物学功能，
