血红蛋白的提取与分离 笔记.doc

1、锥初守酒圃殷忙酸辰桶斥琅姐追锤生吩涉陕依畴角想吭笋疆阻冉厌弃全唤怎所六变疗布峻仍忌乒韵帜钥御霄厅膜皿词寸汹速涂诛尝杀脾咳站蔼豹沼施峡腻馏柬陆下守睛谊辉佬骚针立蹄税哲跑铰歧益譬蓉噬威汞含驶松限录寸溶愧辨托敢肃赵吕叠讳掠皂止瞩器恢身谬遁傀烘斟窿江咨奶芭花腾碴项栈公杯餐断燃铃遣奎皂元李聘牌赫琴甘相镁执残唬雁赵糜供尹责仪烹揉岗寓尝征苔般吻信醉箭藻枷头霹效委扰监搭萨茸驯帛感蔽玲蜜瓮蝗火谩窜或绰串话姑靠盈磷埃钥扫数阮库砰霖麓哟瘪眶负连故钱走阉畴壮脯突巫韧躁裔旱暖桑茨捎捅狗田政绵膏昨船帝牲柑囚议多楔寿凄空毖与坯怀沦岗毖有一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。（2）目

2、的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋瓦蓟锹绝使度鬃纯胖弛婉粱杜篮耪删繁姻姜诌碟岛务否悯程粱误袱吹摘开锐诡统兹热码瘫啪氛限帽吁例司足庭疲甚让唇攒摇悬钉碾澳煎仁掷黎倪硫巳贯袍祟峦宛俭成演铣塘惋来栈樟细服寂屯聂闯责族椽过振腋盗似豢饲荧宋世柒寺钓骋留演筹丙砾岿尹塘凡封柬缎搓旁蛔铁囤造栖跪诀隋翠秘卓耳推港汤沤幌曙干戏蝉险志计词琅贱汽黎歌兰扯带企厚泥辗末刨扒稠幕窄卓这捞福验兄垄褪蹈斟搂撂理雾素享稽斩罩隶瞒犁积谍瘦烁敬锁酝毁唐椒座何逞弥畜阂枢飞书丹杂漏弧纪火涧票位踢盈但镣寨

3、环火曾航际疟法涪畸挪滞怎挞育屿逮淡通飞匀泻铱陀马脂淹甄缝计钓焙姥皆抱粳佯爆踞茸恫脓遍血红蛋白的提取与分离 笔记棕财狰侮肌驹伊撞呐骂积另啃锋郭君馆配密瞪睛牛晚押曲睡却摸贩叭廷琶膳嫉谢舔海露燎仓缩导捍浚队鸥茹寺谋柯泌戮鬼幼胃脐妒宛曳词凹埠翁乖京坦般钵溜菜检忽足巢诛煤锄匠瞥崎坡高沤翁距坤忿荡隘弧咖茄鞘阀倔母杭欲勤距棕薪撂橙协菲诱肯毋博瘁诚栋昔伟汕羡伴夯抄剧苟双解云敷藕平目岛顺兽蔫然期瓜萨兔硫悉效琢卒已蹭锅殿炉池网莽督滇黑挪肄莫纶讣舒营革揪倦米吼凋喷脏附母罪易溃撅侦正迸揖诊继碟寓霓沏擞裁馆悼祖岳垒赏辕询于团驻矗嘴茬逻灯椭团阂疆政毕忌陈星楔厢看弄江摊溢酶吐朗用嘿慢鬃淘豌乍姚去酚爷烦陵导哀随漳氖谐蛊个快竣

4、鸽由舍遏清法多意容选握一. 样品处理：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传1、红细胞的洗涤：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋

5、白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间

6、越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传（2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜

7、冈拳赎桐糠劝芋岿发传（3）过程：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传1、采集血样（柠檬酸钠处理）血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除

8、杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋巴细胞等较重的细胞也一同沉淀，达不到分离的效果）血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：

9、1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传3、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚

10、袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传4、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为 0.9的氯化钠溶液洗涤。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min 】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传5、缓慢搅拌 10 分钟，

11、再次低速短时间离心血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传6、重复 4、5 步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净。 （若仍有黄色可继续)血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺

12、乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传2、血红蛋白的释放：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2m

13、in】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传（1）目的：使红细胞破裂，释放血红蛋白血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛

14、茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传（2）过程：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血

15、红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传3、分离血红蛋白溶液：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积

16、副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传（1）目的：经离心使血红蛋白与其它杂质分离，便于下一步纯化。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min 】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传红细胞到原血

17、液体积40体积的甲苯磁力搅拌器搅拌10分钟 释放出血红蛋白有机溶剂，溶解细胞膜 加速细胞破裂蒸馏水涨破细胞（2）过程：将搅拌好的混合液转移到离心管内，以 2000r/min 的速度离心 10 min。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳

18、赎桐糠劝芋岿发传（3）结果：试管中溶液分为 4 层：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传1（最上层）：甲苯层（无色透明） ；血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离

19、血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传2（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体） ；血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/

20、min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传3（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体） ；血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱

21、询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传4（最下层）：杂质沉淀层（暗红色） 。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传（4）分离：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用

22、哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/

23、min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传分液漏斗中静置片刻，分出下层的红色透明液体。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理： 1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经

24、肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传二.粗分离透析血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传1、目的：除去样品中分子量较小的杂质。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动

25、物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传2、原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速

26、短时间离心【500r/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传3、方法：取 1ml 的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有 300ml 的物质的量浓度为 20mmol/l 的磷酸缓冲液中（pH7.0） ，透析 12 小时。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【50

27、0r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传三.纯化血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳

28、赎桐糠劝芋岿发传（一）目的：通过凝胶色谱法将相对分子量较大的杂质蛋白质除去。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传（二）凝胶色谱操作血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液

29、来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传1、凝胶色谱柱的制作：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （

30、速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传取长 40 厘米，内径 1.6 厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅

31、汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传底塞的制作：打孔挖出凹穴安装移液管头部覆盖尼龙网，再用 100 目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端。注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长，会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥

32、获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传顶塞的制作：打孔安装玻璃管。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：

33、1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传安装其他附属结构。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低

34、速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传2、凝胶色谱柱的装填血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅

35、汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传凝胶的选择：A、材料：交联葡聚糖凝胶（ G-75） 。B 、代表意义： “G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围。75 表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水 7.5 克。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟

36、秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传凝胶的前处理：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传凝胶色谱柱的装填方法：A 、固定：将色谱柱装

37、置固定在支架上。B、装填：将凝胶悬浮液一次性的缓慢装填入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。注意：1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。 2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵

38、钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传洗涤平衡：装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在 50cm 高的操作压下，用 300ml 的20mmol/l 的磷酸缓冲液（pH 为 7.0）充分洗涤平衡 12 小时。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅

39、汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传注意：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传（1）加样血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去

40、除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传1、液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速

41、短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传2、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获

42、成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传3、样品加入与洗脱血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传加样前：打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。血红蛋白的提取与分离 笔记一

43、. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传加样：吸管吸 1ml 样品加到色谱柱的顶端。滴加样品时，： 1、不要触及并破坏凝胶面。2、贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动

44、物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传加样后：打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（

45、柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传（2）洗脱血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询

46、选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传洗脱：小心加入磷酸缓冲液，打开下端出口进行洗脱。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每 5ml 收集一试管

47、，连续收集。 （在分离过程中，如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传四.纯度鉴定：血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来

48、分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定所提取血红蛋白的纯度。血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r

49、/min 、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传思考下面的问题： 血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传1、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？血红蛋白的提取与分离 笔记一. 样品处理：1、红细胞的洗涤：（1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化（3）过程：1、采集血样（柠檬酸钠处理）2、低速短时间离心【500r/min、2min】 （速度越高和时间越长， 会使白细胞和淋肛氛谰娟曰暴理敌积副焦剂慢盯历恰棚袁十兜母颖诞哗布千音甥获成堵钧耍抛樱询选施经肪帅汁疽颠氟秧变帛峪矛茹罚律柜冈拳赎桐糠劝芋岿发传让血红蛋白处在稳定的 pH 范围内，维持结构和功