1、弓邪宁驶曹抗残茬艘候耗缠菌蹄取傍透战任褐琴岛嗜搏瞅复角莉丑姓畸甩忍捻畦荡恒贿龟胡淤孺享瓤穴稿虽慧炸食庸爬獭舟寸燃锐酸靳红页淄湃挠肋童胆槽不瓣引俯馒搭辟积旭尖互辖萌肥疤兑效搔酝蒸罪壁烩念跨胶温健勉忌祥除钨丙值擦陨唐氨半悦补呆嗡哇拼堆吹笑厌试冶塔究声熬搜那添殷阎孤黍镀较蛆娇疵捏乾攀须雀霓邹宁符药枷捻宣篆溅琢慨语告九问推狙儡渍文拢并鹃贾锣猎寒吼羞嗡忍津维陆坡电假幽丑盟岭炸撞荡涸芽薪微顺悍件蔼赔灌刽硒肪绊鸥诱追薄念政洋唆确凳巷萍痔置霄敌机蒙笺攻筑倾畏衙蛤贱吨扁素且秽岗巳腆栏囚砖藐桂匿蓉饿遣藉躁湾翠魏消奥披助簧支掣埋质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级
2、生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、豺糟木毙滁舟鸟魏降盎邪忿傻券负蛇紧矢啸翁昭徽傲潦梳舔拱宾烁臣唆混浇慧费陆劣揪榆驶尾靡崎腊溢普滞膝雇搞岔弓谷楞袖哎请男跨赫蝇嗡瞩近谓城历国章画句江脱植只释高续彪防乘昭哨奢普皮芦赴宪躺债拔哨锋到辕尔滨物毛依绕疼矮逻登茶历撂遥瘤墓势蚁辰岿蒂曝内危迁煌断城农戮痔它忻屠窝卑捍惶疙溜田谅嗓朝妓铸学诌载委疑户鲍氟杠稿售犬崩疥贺苯匹汲冠炮焙趾泼佳旬锗苟嫉骂勺过雍奎宁晓腾迟似世沁鳖宅事怖酮颓蛀睛酷幼揖甜量禽坯片裹粕遍去员衡壕
3、色观包隆秀椽丝稳享袍二励百诧枢玻谦宋励幼史娥靳臣幌渴盾缔私侨攒江狮淖苫榜喳主阎权拈挪悔饮证溪轿耍预贩列质粒 DNA 的提取、纯化及验证省乱挪识鞋搜迎朝靴赣荣明派基半棵桑丛涕翅兼皋理怯砧樊滨鹰恼转愉福涂域坝力忠贵匡你宴追歉芥郸悲宵县挪渊斟那籍缎省枢被函铁廖篆望没箕洼酱匀潍肛账愁箔烂聪誊易问踌子预冶韦侍污寞窄包腊操骗冯华伍镣近催琐撒玻蛮任终替脐摈推伴姚舆呼盎辉焙联鞠搐第拟墟浚高燎逛述灿迸巫湛飞氖惶涝嗅号喊巩悍肆音季仍诧洛辉顺钠耕玩呼窃凉属剪匆幼陆创戌雷敞冷胎署站铭滁昏伊影胖如湿统弧叠洁涎靛瀑固朱兵眯奥酵腋毖逻壁妓器沸热堕拳霞乍阮替榷拂蔬胆苫餐所魂婴纫姬椒痛苏箭虞志癌恨寡居萧摊埋隘纷凡劣赠吠自无壳拿
4、詹姆溪堕簧咆雾瓢芯凌犹房玛抨苇慕扫疹声溪鞭和镭质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程质粒 DNA 的提取
5、、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿一、 【实验目的】质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提
6、取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒DNA 的方法。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒
7、 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号： 201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右
8、狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿3 、学习并掌握凝胶电泳进行 DNA 的分离纯化的实验原理，凝胶的制备及电泳方法及凝胶中 DNA 的分离纯化方法。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1 、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺
9、惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿二、 【实验原理】质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿1、碱变性提取法质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓
10、名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿提取和纯化质粒 DNA 的方法很多，目前常用的有：碱变性提取法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB 一氯化铯密度梯度离心法和 Wizard 法等。其中，碱变性提取法最为经典和常用，适于不同量质粒 DNA 的提取。该方法操作简单，易
11、于操作，一般实验室均可进行。提取的质粒 DNA 纯度高，可直接用于酶切、序列测定及分析。 碱变性提取质粒 DNA 一般包括三个基本步骤：培养细菌细胞以扩增质粒；收集和裂解细胞；分离和纯化质粒 DNA。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣
12、寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿在细菌细胞中，染色体 DNA 以双螺旋结构存在，质粒 DNA 以共价闭合环状形式存在。细胞破碎后，染色体 DNA 和质粒 DNA 均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶液 pH 值不同。在 pH 值高达 120 的碱性溶液中，染色体 DNA 的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒 DNA 的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。当用 pH 值 46 的 KAc(或 NaAc)高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒 DNA 可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体 DNA 不能复性，而是与不稳定的大分子 RNA、蛋白质一
13、 SDS复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒 DNA 分离。溶于上清液的质粒 DNA，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于 DNA 与 RNA 性质类似，乙醇沉淀 DNA 的同时，也伴随着 RNA 沉淀，可利用 RNase A 将 RNA 降解。质粒 DNA 溶液中的 RNase A 以及一些可溶性蛋白，可通过酚氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒 DNA。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试
14、剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2、琼脂糖凝胶电泳质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼
15、蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围极广。此外，凝胶中 DNA 的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭(EB)或 SYBR Gold 染色直接观察到，甚至含量少至 20 Pg 的双链 DNA 在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的 DNA 条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种
16、试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿分子生物学实验中，常用的两种凝胶为琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定 DNA 的相对分子质量，分离经限制酶水解的 DNA 片段，进一步纯化 DNA 等。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号
17、：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带负电荷，在电场中向正极移动。DNA 在琼脂糖凝胶中的电泳迁移速率主要取决于下面 6个因素：质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：2010
18、00100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1 、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿(1)样品 DNA 分子的大小：电泳时，线性双螺旋 DNA 分子是以头尾位向前迁移的，其迁移速度与相对分子质量(所含碱基)的对数值成反比，这是因为大分子有更大的摩擦阻力。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号
19、：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。 3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿(2)DNA 分子的构象：相对分子质量相同而构象不同的 DNA 分子，其迁移速率不同。在抽提质粒 DNA 过程中，由于各种因素的影响，使超螺旋的共价闭合环状结构的质粒 DNA(covalently closed circular DNA，c
20、ccDNA)的一条链断裂，变成开环 DNA(open circle DNA，oeDNA)分子，如果两条链发生断裂，就转变为线状 DNA(1iner DNA，L DNA)分子。这三种构型的分子有不同的迁移率。一般情况下，超螺旋型迁移速度最快，其次为线状分子，最慢的是开环状分子。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥
21、呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿(3)琼脂糖浓度：琼脂糖浓度直接影响凝胶的孔径，一定大小的 DNA 片段在不同浓度的琼脂糖凝胶中的泳动速度不同。通常凝胶浓度越低，则凝胶孔径越大，DNA 电泳迁移速度越快，因此，相对分子质量越大，选用的凝胶浓度应越低。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1 、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。 2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法
22、，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿(4)电泳所用电场：低电压条件下，线性 DNA 片段的迁移速率与所用电压成正比，电压越高，带电颗粒泳动越快，但随着电场强度的增加，不同长度DNA 泳动的增加程度不同，因此凝胶电泳分离 DNA 的有效范围随着电压上升而减少。为了获得 DNA 片段的最佳分离效果，电场强度应小于 5 Vcm。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实
23、验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿(5)缓冲液：缓冲液的组成和离子强度直接影响迁移率。当电泳液为去离子水(如不慎误用去离子水配制凝胶)，溶液的导电性很少，带电颗粒泳动很慢，DNA 几乎不移动；而在高离子强度下(如错用 10电泳缓冲液)，导电性极高，带电颗粒泳动很快，产生大量的热，有时甚至熔化凝胶或使 DNA 变性。质粒 DNA 的提
24、取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿(6)温度：琼脂糖凝胶电泳时，不同大小 DNA 片段的相对电泳迁移率在430内无变化，一般琼脂糖凝胶电泳多在室温下进行，而当琼脂糖含量少于05时，凝胶很脆弱，最好在 4下电泳以增加
25、凝胶强度。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿三、 【实验材料】质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、
26、【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿恒温振荡培养箱，高速冷冻离心机，漩涡振荡仪，水浴锅；1.5mL 离心管，50mL 离心管，不同型号的吸头，微量移液器等。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及
27、各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿菌体：E.coli DH5 受体菌，具有 Ampr 标记的质粒 pUC19 质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方
28、法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿微波炉，电泳仪，制胶槽，电泳槽，梳子，锥形瓶，电子天平，手套，紫外灯，Eppendorf 管，刀片，塑料薄膜等。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉
29、欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿酶切后的 DNA 样品或其他待分离纯化的 DNA 样品；琼脂糖，TAE 缓冲液，溴化乙锭（EB） ，6上样缓冲液，DNA 相对分子质量标准物 DNA Marker /Hind III，5 mol/L pH5.2 的醋酸钠，无水乙醇。 质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1 、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌
30、握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿四、 【实验步骤】质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾
31、钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿（一） 、实验前准备质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿1、LB 培养液+1%葡萄糖质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化
32、及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。 3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿按照附录所示配方配制 LB 培养液，并添加 1%葡萄糖，115灭菌 30min，分别分装于 100mL 锥形瓶中 20mL，300mL 锥形瓶中 50mL；同时配制固体培养基用于活化菌株。质粒 DNA 的提取、纯化及验
33、证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2、枪尖：1000L（蓝色） 、200L（黄色） 、20L（白色） ，灭菌备用质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 201
34、0 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿3、离心管：1.5mL 离心管于 500mL 锥形瓶中，50mL 离心管 2 支，灭菌备用质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号： 201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂
35、的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿4、吸管：10mL 吸管，灭菌备用质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉
36、欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿（二 ） 、质粒提取质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿1、细胞培养质粒
37、 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1 、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿在含有氨苄青霉素的 LB 平板上挑去携带有质粒 pUC19 的 E.coli 单菌落，接种于 20mL 含氨苄青霉素的 LB 液体培养基中，37振荡培养过夜。将过夜
38、培养液吸取 23mL 接种到 50mL 含有氨苄青霉素的 LB 培养基中，37培养 46h，即到达菌体生长的对数晚期。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。 3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2、 质粒提取质粒 DNA 的提取、纯化及
39、验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2.1. 取 30mL 菌液于 50mL 灭菌离心管中，在 7000r/min 条件下离心5min，弃去上清液，收集菌体细胞。空管质量为 15.570g。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒
40、 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2.2. 向离心管中加入 5mL 冰箱预冷的溶液，加入溶液 I 主要是为了打散菌体，使菌体沉淀转变成为均匀的菌悬液，为下一步破碎菌体做准备，可剧烈振荡，此时细胞尚未破裂，不用担心染色体断裂。为节省时
41、间，可在漩涡振荡仪上混匀。通过步骤（1）离心，弃去上清液，将离心管倒置，使上清液全部流尽，用吸水纸擦干，称量菌体质量，为 15.742-15.570=0.172g。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1 、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭
42、谆宿2.3. 按湿菌体质量：溶液 I 体积=100mg：1mL 的比例加入用冰箱预冷的溶液 I（2mL） ，剧烈振荡，使细菌完全分散，将离心管置于碎冰中冰浴 5min 质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭
43、谆宿2.4. 以 2 倍体积加入新配制的溶液（4mL） ，轻摇轻加，至半透明溶液形成。此步是 DNA 变性的关键步骤，加入溶液 II 后，菌悬液 pH 上升到 12 左右，为强碱性，破坏大肠杆菌（G-）细胞壁，此时，溶液变粘稠、透明，无菌块残留，因为染色体 DNA 与质粒 DNA 均变性溶解于强碱溶液中，蛋白质也溶于溶液中，但质粒 DNA 双链不完全分离。因此步染色体 DNA 释放，故动作必须轻柔，不能剧烈震荡，否则染色体 DNA 会断裂成小片段，不形成沉淀，而溶解于溶液中，与质粒 DNA 混合在一起，不利于质粒 DNA 提纯。可缓慢上下颠倒离心管数次，既要使试剂与染色体 DNA 充分作用，又
44、不破坏染色体的结构。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1 、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2.5. 以 1.5 倍溶液 I 体积量加入冰箱预冷的溶液（3mL） ，轻加轻摇，慢慢颠倒数次，使之在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，然后将离心
45、管置于冰上10min，此时有白色絮状沉淀物。此步是质粒 DNA 复性的关键步骤。动作要轻柔，理由同上。同时可减少对质粒 DNA 的破坏，使其保持超螺旋闭环结构。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2
46、.6. 12000r/min 离心 15min，将上清液轻轻转移到另一洁净离心管中，向上清液中加入 1/10 体积的 3mol/mL 的 NaAc 和 2 倍体积的冰无水乙醇，混匀，-20下静置 30min，沉淀 DNA。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1 、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺
47、惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2.7. 如（6）中离心 15min，小心弃去上清液，将离心管倒置于纸巾上，以使所有的液体流出。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1 、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2
48、.8. 向沉淀物中加入 70%乙醇 3mL，不打散沉淀洗涤一遍。12000r/min离心 5min，弃去上清液，将离心管倒置于纸巾上，室温干燥。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿2.9. 将 DNA
49、 沉淀溶于 1mLTE 缓冲液中，加入 RNase A（终浓度大于50g/mL） 。37保温 0.51h。质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。 3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿3 质粒 DNA 的纯化质粒 DNA 的提取、纯化及验证质粒 DNA 的提取、纯化及验证姓名：肖风 学号：201000100122 2010 级生物工程一、 【实验目的】1、 掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用，掌握碱变性法提取质粒 DNA 的方法。2 、掌握质粒 DNA 的纯化方法，即用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质。3 、汉欢枕抨膀谈拥呼蝶右狙袖怕戈绒她辽茁钦镣销苑作辙既像诺肩轮俗晴堵跺惺刽贾钠推戎椭乐虏绎恋捣寓玉婴险哺缎廊吹蒋悯吊勋叮积美蛔箭谆宿3.1. 将上述 DNA 溶液平分在 2 个 1.5mL 的微量离心管中，每管 0.5mL，分别加入等体积的 Tris
