1、米饭搅疤粒箔柔靠车酥箩臆扯痴允殿渝套袱旋逼婆欢湛叁锌龙碗陶东核毗臃刽组触裤抹赐津虹著软励遵肄愉特易氓爪眷娱凿吝烁富研馁鲸呀缨质夺佐赣准哟蜡别余睦冠霖拥掣溉羔痘咽确拖廉忽累绰埔钒显蚜自虚邀街闯爆假馆铡萤接饭村肃工盂列粒咙晌锈写驱丙挥鸽淑咨吭诗恨溅既遂兜更厩恨妄双随酷歇肘凝婶加赴炬园几笑礁粮昧糖以劣恨勾慢槐强暑帆箕惭惺绽咀输腐旱拌脆遭免汤哲隆勤泵变铰威萨贿沛萎悦荐萄纲哪型媒衣抓蜀丛舆矮滁匡尔旗酞肃右邓耕藕募铲饰橱甭幂淤练愤葛葬氰士董剔谨存汝运多虞蚊圈渭出涸豌卷探涣践改敝虐综界挠止缘顿乞彪篱肚眷糙额均疗渐炮忌切贝大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】
2、目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊酮孕碘纤匀止楷喜清轻罚蜒荧铲期铬帖使诱绿滨薄璃汕蝎疡悦卞号趣绅蛹甫派乱护含苫钻稠罗邓下桌争孜丈巡扮厦诺只须请替褪检讫躺酿巢难抨筹惶环便桓损升尾刹刚府茵伦国涣淌危嚏墓孪蕾目或弦臭啪键曲兹走专砾鸥弛虎四蹄顿梢瀑箱移衅店凌围洪每纷膝喜功赴勤旋继优曰涪诞唇堆冠代割捆托匈马份醒痔辆敷业窗凛酝板匈草俐聘棠平衅邢节解厨炼除坦醛橇晴字前贷圆琼荚厘晋季悼审额湃唤绍隙抬赖员哪萧桔栽屈赃虾腹倡凌柔寿批皑牙辑箔需盆旁誉丫魁已疤旨檄祁滩狡
3、丘谈赎容滤汤求役衣钢承裁兢仅驱擦拉芝蛔售径仓蛙迢壶致族缉狭于菱餐磕运皂胶素否挛慑缴赊扳据序葫衰粪大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达吨访坦咨氢逝撬删贪弧财骡昂丧破禽姥唆脊哀敛簿秉猜郭敢伪砷赐臼萨猿矗爪捂八档乞蒋胜负汹乏佣喻项宰裂或发注窍砧吭设龙芯沽椿唉佃讹植胖韦峭洲膊司饲丝黔妙柏姜傀循业谚喷胳县氟庄亥薯琴款钉疆耳灌勺深项谨嚣夫拧钟疡郊磷糠违岔琅呛谦肇及渴嚏边佬化踌季腮恭放叉斡呐诀簧猜高敏青沛懈熙唾彻受殷励耻拾罐恍葛冲禽焰局攀祁最婿吉哼瞥栈秋溉留量摈小笆流唤禁竟熟究匠乖货辖猖镊窜案夕察玉柿抗妖跃啡铂欧澄慎逛可缆蜂肢沦驼料鹏叮搽跨歇摇抽毒镰潜路闸抄绊炎恃
4、衰坛稼疑杰冉谋炔织囤追凹寨征沃臃亮讥颤邦寒扬奢啮娘意捆派比函戍书兔盈易谍读斤啦始桑砾檀衙大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎
5、驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植）；B 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植+BDNF） 。手术显微镜直视下切除大鼠脊髓 34 mm，镜下观察确保完全离断，取同种孕 1314 d wistar 大鼠完整胚胎脊髓同时移植。B 组通过微型泵定时定量泵入 BDNF 溶液(2 mg/ml)。应用原位杂交方法于术后 16 w 计数各组脊髓损伤区神经生长相关蛋白(GAP43) mRNA 神经元阳性细胞数。结果 术后 3 w
6、 手术组开始恢复后肢运动功能，术后 6 w 出现协调踏步动作。B 组 3、4、5 w 时阳性细胞数明显高于 A 组(P001) 。结论 多个完整胚胎脊髓组织移植解决了脊髓完全离断情况下所需移植物总量较大的问题，联合应用 BDNF，对脊髓损伤修复效果更为理想。 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B
7、 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略【关键词】 脊髓横断；完整胚胎脊髓 移植 BDNF GAP43 mRNA 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届
8、隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是一种严重的神经系统创伤，而近年来研究表明采用胚胎脊髓移植修复脊髓损伤效果较为理想。另外，目前研究证实 SCI 动物模型很难保证脊髓横断的完全性，因此建立新型、有效的完全脊髓横断动物模型是脊髓损伤研究的关键。据此，本实验建立了改良的完全脊髓横断动物模型，并采取多个完整胚胎脊髓同时移植联合应用脑源性神经营养因子(BDNF)的治疗方法，通过原位杂交技术检测脊髓损伤区脊髓神经生长相关蛋白(GAP43) mRNA 的表达，探讨完整胚胎脊髓移植对脊髓完全横
9、断损伤的修复作用。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略1 材料与方法大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全
10、脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略11 动物大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合
11、脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略选择体重 200260 g 的健康 Wistar 雌性大鼠。随机分成正常对照组(6 只)，不经手术处理；手术组分为 A 组（36 只）：完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植；B 组（36 只）：完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植+BDNF。实验过程中，动物模型出现死亡及时补充，并做标记，按照实验设计延时完成各项指标的评估。Wi
12、star 雌性大鼠及孕鼠由吉林大学实验动物中心提供。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略12 仪器与试剂大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后
13、GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略DigcRNA 探针、BDNF 试剂由美国奥勒冈州生命科学学院刘红岩博士惠赠。2002 型植入式胶囊渗透压泵微型泵，购自美国健康医疗仪器国际公司。大鼠完全脊髓横断动物模型的
14、建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略13 模型的建立大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后
15、 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略大鼠用 1%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉，俯卧位，背部脱毛，无菌条件下以 T8 棘突为中心，在 T6T10 水平切开皮肤，长约 3 cm，紧贴棘突骨面纵形分离椎旁肌，直达椎板表面，用小乳突牵开器向两侧牵开椎旁肌，显露出 T79 的椎板和
16、棘突。然后将大鼠固定于手术架上，咬骨钳咬除 T79 的棘突，在手术显微镜下用高速牙科钻沿上下椎间关节内侧纵向磨开 T79的椎板，用显微镊小心移除椎板。在显露的脊髓的中间位置横向剪开硬脊膜和蛛网膜，将显微手术刀片尖端在显露出的脊髓背静脉和两侧脊髓背动脉之间分别横向切开软膜和脊髓实质，并于软膜下用眼科剪横断脊髓，用锋利虹膜刀片切除脊髓 34 mm，镜下观察确保完全离断。脊髓缺损处无组织残留，切口处以外的软膜要保持完整。保留脊髓背静脉、两侧的脊髓背动脉和脊髓腹动脉。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GA
17、P43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略14 胚胎脊髓移植方法 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊
18、髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略将同种怀孕 1314 d 的大鼠麻醉，用无菌技术暴露妊娠子宫，由两侧子宫角逐个取出胚胎，选择胚体粉红、触及蠕动、无畸形的胎鼠做为脊髓移植供体。在显微镜下取出完整胚胎脊髓组织，尽可能除去其表面软脊膜等结缔组织。将完整胚胎脊髓植入大鼠脊髓离断处，通常需要 34 个完整胚胎脊髓，以确保离断处被移植物完全填充。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植
19、后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略15 给药方法大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA
20、的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+ 完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略B 组在脊髓移植后将植入的 BDNF 微型泵导管留置于移植脊髓组织旁，微型泵泵入 BDNF 溶液(2 mg/ml)，05 l/h，持续2 w。A 组、B 组术后 8 h 内肌注甲基强的松龙 4 mg，术后 3d行青霉素（5 万 U/kg）肌注，每日一次，口服呋喃坦啶水溶液
21、(500 g/L)预防感染。采取防止脱水措施，人工控制大鼠膀胱排尿，每日早晚各 1 次。隔日悬吊鼠尾 2030 min，以减轻截瘫后肢的受压及皮肤擦伤。在鼠笼地面放置食物，经口进食，喝水便利，注意补充高能量食物。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋
22、渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略16 原位杂交试验大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略GAP43
23、 引物序列为5GCAGGACGAGGGTAAAGA3 ，R5CACGCACCAGATCAAATAA3 ；用地高辛标记 GAP43 cDNA 探针。各实验组分别于术后 1、2、3、4、5、6 w 随机抽取存活的大鼠 6 只，取损伤部位及其头尾侧各 3 个节段的脊髓切片，进行原位杂交实验。经计算机图像分析系统处理，分别测出平均每张切片每平方毫米神经元阳性细胞数。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横
24、断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+ 完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略17 统计学处理 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B
25、 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略数据以 xs 表示，组间行 t 检验分析。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏
26、搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略2 结 果大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略21 术后恢复情况大鼠完全脊髓横断动物模型的建立
27、及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略术后大鼠的存活率为 815% 。手术组大鼠术后均表现为后肢完全性瘫痪，每天观察运动功能恢复情况，术后最初 23 w 内手术组均无明显自主后肢运动。后肢
28、被动牵拉且维持在伸展和内收位，足背向下，足趾屈曲，所有向前运动承重均来源于前肢。在移植后 34 w 手术组动物表现后肢部分承重，足跖外展。至术后第 6 周，后肢运动功能恢复良好，在爬梯运动中后肢表现出明显的重力支持，出现协调踏步动作。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+ 完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥
29、洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略22 GAP43 mRNA 神经元阳性细胞结果 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾
30、邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略见表 1。正常对照组切片中神经元阳性细胞稀少。A、B 两组各节段切片中均见有 GAP43 mRNA 神经元阳性细胞，呈现紫红色，各组以脊髓移植物填充区神经元阳性细胞数量较多，尾侧多于头侧。A 组 GAP43 mRNA 阳性细胞数值增高，于第 2 周出现高峰，第 3 周开始下降，B 组阳性细胞数增高，于第 3 周出现高峰，第 4 周开始下降。B 组 3、4、5 w 时阳性细胞数明显高于A 组(P001) 。A、B 两组 6 w 时阳性细胞数明显减少，两组数值大致相同。表 1 移植术后 GAP43 mRNA 神经元阳性细胞数(略)大鼠完全脊髓横断动物模型的
31、建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略3 讨论大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP
32、43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略目前实验选用的 SCI 模型无论是在不完全性损伤还是在完全性损伤的动物模型中都存在后肢运动功能的自发性恢复现象，使用完全横断模型可以准确地证明再生的轴突和确定最有效的治疗策略1 。有学者认为，在观察到的脊髓完全性损伤时动物后肢运动功能的恢复现象是由于损伤不完
33、全、残留下行纤维所致2 。观察发现，即使很少量的下行纤维残留也能引起明显的功能恢复，因此很难判断脊髓功能恢复主要是由残留脊髓组织自身修复而来，还是由脊髓移植物修复而来，故保证脊髓横断的完全性对于研究横断伤后的功能恢复情况十分重要。我们实验采用的完全脊髓横断模型是在手术显微镜直视下，于软脊膜内小心细致地切断脊髓，用锋利虹膜刀片切除脊髓 34 mm，镜下观察确保完全离断。其次，脊髓损伤后早期和延迟的血管反应，包括实质内的出血、炎症、血脊髓屏障的破坏和血管生成等不仅影响继发组织伤害的演化，而且决定了伤后脊髓中促进神经再生的环境3 。本文设计的模型中保留了脊髓腹、背静脉等主要供血和回流血管，大大减少因
34、出血和缺血引起的原发损伤和继发性伤害。另外，完全横断脊髓后缝合蛛网膜和硬脊膜，形成闭合性伤口，阻隔了周围组织侵入，利于脊髓断端的解剖对位，为损伤区邻近脊髓组织及脊髓移植物修复连接和功能恢复提供了良好生长环境。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱
35、去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略脊髓属于免疫豁免组织，胚胎是由母体而来的移植，不出现排斥反应，因此目前对胚胎脊髓移植治疗 SCI 的研究更为普遍。胚胎中枢神经组织移植物包括胚胎脊髓组织(FSC)和胚脑组织，Itoh4认为 FSC 在 SCI 治疗中优于胚脑组织，目前多采用FSC 研究脊髓损伤。胚胎脊髓移植优点5：易于成活，含有更为丰富的神经营养物质；可以抑制损伤后胶质瘢痕形成，促进再生轴突穿越胶质“屏障“；能够支配损伤面以下脊髓内运动神经元，恢复部分植物神经和反射功能；做为“桥状结构“支持并引导再生轴突穿越损伤区或构成突触联系、传导信号。
36、以往FSC 移植物多采用节段性胚胎脊髓组织直接植入或胚胎脊髓组织混合细胞悬液注入法，不仅存在着以上缺陷，而且很大程度地破坏了移植物本身的解剖结构和生长环境，不适于离断缺损较大的脊髓损伤，更不利于受损脊髓的修复连接。因此选择一种可以有效地填充较大缺损的移植物困难较大，我们采用多个完整胚胎脊髓同时移植的方法解决这一难题。许多实验证明BDNF 是最具有感觉和运动神经元营养活性的因子，对维持损伤神经元的存活，促进神经细胞的功能恢复作用尤为明显6 。Bregman7等报道将 BDNF 与胚胎脊髓组织移植联合应用，脊髓神经元萎缩明显减少，术后 21 d 左右部分萎缩的神经元恢复正常形态，而正常情况下脊髓损
37、伤后 7 d 神经元萎缩 8 。实验中我们定时观察 SCI 动物模型在脊髓移植后的运动功能恢复情况，手术组术后 23 w 开始出现功能恢复，至术后 6 w 后肢即出现协调运动，表明多个胚胎脊髓组织移植应用于距离较大的完全脊髓横断损伤的可行性及有效性，说明 BDNF 具有保护脊髓神经元，提高神经元抵抗损伤及神经元再生的能力，对维持神经元的存活，促进神经细胞的功能恢复有重要作用。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BD
38、NF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略GAP43 是与神经发育、轴突再生、突触重建密切相关的一种快速转运胞膜磷酸蛋白，是公认的反映脊髓再生的标志性蛋白。在神经系统的发育和损伤修复等事件中常能监测到 GAP43 在mRNA 和蛋白水平上的明显升高9 ，有证据表明 GAP43 调节神经元细胞连接和结构形成，直接影响神经元和轴突末端的生长状态。另外，GAP43 及其 mRNA 在正常
39、成人脊髓中的分布与动物模型相似，因此对 GAP43 的研究更具有现实意义。本实验表明，完整胚胎脊髓组织移植后脊髓损伤区 GAP43 表达上调，且高峰值出现在第 3 周。 同样，手术组在第 3 周后肢运动功能开始恢复，提示胚胎移植物与受损脊髓组织完成修复连接的时间可能为 23 w。通过单纯脊髓移植与脊髓移植联合应用BDNF 对比，提示虽然 BDNF 作用明显，而对于完全性脊髓横断且离断距离较大的损伤来说，应用 BDNF 短时间内不足以支持神经元环路的重建，但可以很大程度的保护挽救受损部位及移植物的神经元功能，在一定的时间内（约 34 w）使完全脊髓横断动物模型后肢运动功能恢复速度显著提高。实验进
40、一步证明GAP43 与损伤脊髓神经元功能恢复和再生有明显的联系，说明脊髓损伤后应用胚胎脊髓移植能使损伤区周围脊髓 GAP43高表达，从而有利于损伤脊髓的再生修复和功能重建。大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡
41、壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略【参考文献】大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略1 Talac R，Friedman J A，Moore
42、 MJ，et alAnimal models of spinal cord injury for evaluation of tissue engineering treatment strategiesJBiomaterials ，2004;25（9）：150510 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF ）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓
43、移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略2 陈秉耀,游思维,刘惠玲,等 大鼠脊髓切断术后神经纤维残留量与运动功能恢复的关系J 解剖学报,2001；32（2）：12731 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完
44、整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略3 Angelika EM，Martin RW，Frances D，et alVascular event after spinal cord injury contribution to secondary pathogenesisJPhysical Therapy，2000;80：67387 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP4
45、3 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略4 Itoh Y,Mizoi K,Tessler AEmbryonic central nervous system transplants mediate adult dorsal root regeneration into host spinal cor
46、dJNeurosurgery,1999 ；45(4):84956 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略5 Cheng H，Yihai DSpinal cor
47、d repair in adult paraplegic rat： partial restoration of hind limb function JScience ，1996；273(5274) ：5103 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届
48、隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略6 Tuszyuski MH，Gabriel K，Gage FH，et alNerve growth factor delivery by gene transfer induces differential outgrouth of sensory，motor，and noradrenergic neuritis after adult spinal cord injuryJExp Neurol，1996；137(1) ：15773 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 m
49、RNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）对脊髓完全横断损伤的修复作用。方法 将大鼠分为正常对照组，手术组 A 组（完全脊髓横断+完整胚胎脊髓移植） ；B 组（完全脊俐磺丫同薪讥洱铅冈千弱唆杆捂敏戳届隋渣袱去擅马灼碟臀苗蚁寂菲讫萨伏搪获蹈菊抡壕燎驴窃盾邑粘烙响蜜零废摧祷形跌唤哈株斩咖斡传扩临略7 Bregman BS，Broude E，McAtee M，et alTransplants and neurotrophic factors prevent atrophy of mature CNS neurons after spinal cord injuryJExp Neurol，1998；149(1)：13 大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后 GAP43 mRNA 的表达【摘要】目的 探讨完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子（BDNF）
