1、实验一、大鼠在体小肠吸收实验一、 实验目的1 掌握大鼠在体小肠吸收的实验方法。2 掌握计算药物的吸收速度常数（Ka），以及每小时吸收率的计算方法。二、 实验指导大多数药物以被动扩散方式从生物膜的高浓度侧通过膜向低浓度侧转运。被动扩散可用 Fick 第一定律来描述。该定律指出，扩散速度（dC/dt）正比于膜两侧的浓度差（C），因此有： )(bCKadtc（1）式中 C 是消化道中药物浓度，C b是血液中药物浓度， Ka 是吸收速度常数，其值大小取决于药物的扩散常数，吸收膜的厚度与面积，及药物对膜的穿透性。胃肠道吸收的生物学过程包括这样一个系统，即药物从胃肠道屏障的一侧（吸收部位）向另一侧（血液）
2、扩散。因为进入血液的药物很快分布到全身，故与吸收部位比较，血中药物浓度维持在很低的水平。几乎在所口服给药的情况下，对于胃肠道来说，血液（室）的作用尤如一个“水槽”（sink）。并且在整个吸收相保持很大的浓度梯度，CC b，则 CC，于是（1）式可以简化为 KaCdtc（2）此为一级速度方程式的标准形式。胃肠道按一级动力学从溶液中吸收大多数药物。用消化液中药物量的变化（ dXa/dt）表示扩散速度，则： Xt(3)将（3）式积分，并在方程两侧同取对数。 Kata)0(lnl(4)式中 Xa 为消化液中药物量， Xa（0）为零时刻消化液中药物量， Ka 为药物吸收速度常数。以 lnXa 对 t 作
3、图得一条直线，其斜率为药物在小肠中的吸收速度常数（ Ka）。三、 实验内容与操作1 仪器蠕动泵；分光光度计；红外灯；手术剪；止血钳；乳胶管；烧杯；固定板；电热恒温水浴锅。2 试剂（1） 01%NaNO 2液；（2）0.5%氨基磺酸铵（NH 2SO3NH4）溶液；（3）0.1%二盐酸萘乙二胺溶液（偶合试剂）；（以上置冰箱保存），(4)1 mol/L HCl;(5)0.2 mol/L NaOH; (6)生理盐水；（7）Krobs-Ringer 试液（每 1000ml 内含NaCl7.8g，KCl0.35g，CaCl 20.37g，NaHCO 31.37g，NaH 2PO40.32g，MgCl 20
4、.02g，葡萄糖1.4g）；（8）戊巴比妥钠溶液（10mg/ml，大鼠每 100g 腹腔注射 0.4ml 麻醉。）；（9）磺胺嘧啶（Sulfadiazine，SD）。 3操作(1)取 85ml 供试液（100ml Krobs-Ringer 试液含 SD2mg、酚红 2mg）加入循环装置的烧瓶中。（2）将实验前禁食一夜，体重 200g 左右的雄性大鼠，称重，腹腔注射戊巴比妥钠（剂量为 100g 体重注射 0.4ml），麻醉后并加以固定。（3）沿腹中线打开腹腔（约 3 厘米长）。自十二指肠上部及回肠下部各剪开一个小口，各插入直径为 0.5cm 的玻璃管，用线扎紧，并用 37的生理盐水将小肠内容物冲
5、洗干净，然后将大鼠串联到循环装置中。（4）开动蠕动泵，以 5ml/分的流速循环 10 分钟后流速调至 2.5ml/分。（5）自烧瓶中取样1.5ml（1ml、0.5ml 各一份）为药物和酚红零时间样品，并补加 2ml酚红溶液（每毫升Krobs-Ringer 试液含酚红 20g）其后每 15 分钟取样（1ml、0.5ml 各一份），同时补加酚红溶液。由于酚红不被小肠吸收，用以测定水被小肠吸收的量。4定量方法（1）磺胺嘧啶的定量 取样品 1ml，加入1mol/L HCl 5ml，加入0.1%NaNO2 1ml，摇匀，放置 3 分钟，加入 0.5%氨基磺酸铵 1ml，摇匀，放置 3 分钟。加入 0.1
6、%萘乙胺 2ml，摇匀，放置 20 分钟。在 550nm处测定吸收度。参比溶液的配制：取 1ml 供试液按磺胺嘧啶的定量方法但不加萘乙胺显色剂。（2） 酚红定量样品 0.5ml，加入 0.2mol/L NaOH 5ml，摇匀，在 550nm 测定吸收度。参比溶液：酚红的比色空白液为 0.2 mol/L NaOH。5标准曲线的制备（1） 酚红的标准曲线精密称取酚红 100mg，置 1000ml 容量瓶内，加 1%Na2CO3溶液溶解并稀释至刻度，制成100g/ml 的标准溶液。取 1，2，3，4，5，6ml 的标准溶液于 10ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度。自上述各溶液中吸取 0.5ml，按酚红
7、的定量方法测定吸收度，并绘制标准曲线。（2） SD 的标准曲线贮备液的配制：精密称取磺胺嘧啶标准品 10mg，置 100ml 容量瓶中，以蒸馏水溶解并稀释至刻度，使成 100g/ml 的标准溶液。标准曲线制备：取上述贮备液适量，稀释至 20g/ml 的工作液，分别吸取2，4，6，8，10ml 于 10ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度。从上述溶液中各吸取 1ml 按 SD 定量方法测定吸收度，并绘制标准曲线。四、实验结果与讨论将实验数据按表 1 中公式进行计算，以剩余药量的对数对时间作图，求出吸收速度常数 Ka，和每小时吸收率（%）。每小时吸收率（%）= 零 时 间 剩 余 药 量分 钟 剩 余 药 量零 时 间 剩 余 药 量 60100%表 1 大鼠在体小肠吸收量的计算式取样时间（hr）S吸收度D浓度酚吸收度红浓度供试液体积（ml） 剩余药量（g）循环前 Ao C0 A0V0=85ml Po=85Co0 A1 C1 1V1=0CP1=C1 V10.25 A2 C2 221124)5.(P2=C2V2+1.5C10.5 A3 C3 33230).(CVP3=C3V3+1.5(C1+C2).tn An Cn nnnCV40)5.1(115.niCVPn五、思考题1作好本实验的关键是什么？2在操作中应该注意哪些问题？
