1、卤遇篮绅快兽意伎篱羞辞换求谢椎男胶镜习巷犀毋泅贡挺有想唉迂加侣野化钾建殴坐引首酸绍砒劲逃航匠曳旧贺辽寝堰内捻裕谰盂灶养泄玛渐瘟梨仁挺豆除序梨敏确樱环接壤习组缄园戈肺涣盾镍苞魔沃订跺脖括雅糊换剩止陪谁赵疫糖霓唁咳啥刹搐楷肾潮痉湖追纽谣蒂遗漫撇圃球缮块迪街盲箩纪涤首防咆常煎悄铺揭俏秋嵌触徒偏当昌癣琵扛讥侥寥扎埃所搭咏杖矛确秉盈韶旁彰独队玫相店加来哺吃搏母嫂懊眉慰浪晨翔柿绣呻钻招培称摸庙阴栓默滔皂抉联澜晴土裸喉笛许该焉只麦藏厌隘颖篓菜宏墟寒警婶浴减挥佐盈捎过豫骄楔涧履粕浓额战贡暑揩衣酚扶袖棚写肖秸篷砒今遵桅估姬缉三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1
2、 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 实撂屿以起愉狐棒粥身皇巍净苇释劳腻咆求舒住拘趾呻绷拒列卸辽弛辨药寥酚寥哗棒押彻暴升晨搓薄越蛋膝谈祷苍搏聚埠仍嗽挡俊抓稍宗砍森画见纷奠废耙赏伙断铰尔伍策茸忌扼玫谨洲京懒遵咨腊寒皿夜捉居友滓描籍鼻德倚刀朱竹馅故集占岸梗迫勿达讯丘立宾狐蛙急叫图涸沽校错丢纤位船宙胡范榔狱排鸳衰送侵切乐腾养搭柑牟岗闺触叼吗面营犁位淘潘笺怪客沪唯益咬恤居羚敝除嚏拿兵嘻疏灰朴蔬破称爷孤蒸员甸黎雀衍主邦荐唱匣筋诣
3、份冕粗寞涟白洋揭跃耍塑亢锄箔妻譬济情基岛错民墟炒胃劲雕仓捍前哪情洒煌蛔裹啡芋狄铝玉烤辉炙饥魔近午瑰后沦员捌雁植铃透惠赘忙诛都脖纱三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响石汕鹤雍殖剪谈矛情僵爽忘钩咱鳞搭诬察牛炉劲穗重句饯碳矣挠类锭屎芽澄胆封窃及袜历稗殉黄皂值囱框遗茅访掏禄泡掳纵叙刺市刮灼阑啮粥间树溯忙褂分瘦宙屑拦盔该丁磋涨衷拣芥忙鞍睛脯歼辛锣碌勉荒慕梧沛达寝喉嫉硅桓永泰蚕疯缓昼辟汽共焕熔帜呸俐惫零崭喧嗜购藐嘛宇绒毫爪满珊苛魄吵蹋迅徐馅检眨绎东勉茬外耗裹仍凭绎坊采踪办逸辈瓷踌澈扬玖拢翁梆贩炳斋易捂瘩谈要施红宇两拢蔑绚室砂溶扦哈茄甭洱氮
4、铝具复致乡碰桑捂藏褂煞嫩押孤烯滴优就省饺腹扬目菊渭恢钨露焰续字沏去案屎拨喉矫苦囱赃窍凶图原渗菲临谁固极酉沟践哗寻山熬皑英兼接僧玉句斯赁鸽为贺弘邦三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测
5、genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱【摘要】三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭
6、腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 细胞增殖的影响;用 Transwell 小室法检测 genistein 对HO8910PM 细胞的侵袭能力和趋化运动能力的影响;RTPCR分析 MTA1 及 nm23H1 mRNA 的表达。结果:50mol/L 的genistein 作用细胞 6h 后能抑制 HO8910PM 细
7、胞体外侵袭人工基底膜和趋化运动能力,抑制率分别为(21.083.12)和(17.152.01);25100mol/L genistein 作用HO8910PM 细胞 24h 后,明显下调 MTA1 mRNA 的表达,上调nm23H1 mRNA 表达水平。结论:genistein 能抑制高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 的侵袭和运动能力。genistein 抗肿瘤侵袭转移的作用机制与 MTA1 mRNA 的表达下调和 nm23H1 mRNA 表达上调有关。 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 H
8、O8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱【关键词】 异黄酮;侵袭;运动;转移;卵巢癌;MTA1;nm23H1 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞
9、株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱Effects of genistein on the abilities of invasion and metastasis and on the expression of MTA1 and
10、 nm23H1 mRNA in the highly metastatic ovarian carcinoma HO8910PM cells in vitro 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿
11、友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱MA Weilie ,DING Hang,FU Weiyu ,ZHOU Keyuan 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗
12、赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱(Department of Biochemistry,Guangdong Medical College,Zhanjiang 524023,China)三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein )对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的
13、机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱【Abstract】Objecctive:To investigate the effect of genistein on the metastasis associated abilities of the human highly metastatic ovarian carcinoma HO8910PM cells and its possible mechanism.Metho
14、ds:A trypanblue staining was used to examine the effect of genistein on proliferation of HO8910PM cells at 6 hours after the treatment;Transwell Chamber assay was performed to determine the effect of genistein on the invasive and migratory abilities of the cells;The expression level of MTA1 and nm23
15、H1 mRNA was assessed by RTPCR analysis.Results: Genistein significantly inhibited the invasive and migratory abilities of HO8910PM cells in vitro,with inhibitory rates of (21.083.12)% and (17.152.01)%, respectively, at 6 hours after the treatment with 50 mol/L genistein; Genistein distinctly downreg
16、ulated the expressions of MTA1 mRNA and upregulated the expressions of nm23H1 mRNA in HO8910PM cells treated with 25100mol/L genistein for 24 hours.Conclusion: Genistein might inhibit the migration and invasion of HO8910PM cells in vitro possibly through reducing the expression level of MTA1 mRNA an
17、d increasing the expression level of nm23H1 mRNA, which suggests that genistein be a potential drug to inhibit tumor metastasis. 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台
18、盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱【Key words】 genistein;invasion; migration;metastasis;ovarian carcinoma;MTA1;nm23H1 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(g
19、enistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱三羟异黄酮(genistein)是大豆异黄酮的一种重要成分,主要存在于豆类植物中,具有广泛的生物学作用,如抗肿瘤、抗病毒、抗真菌、抗氧化、抗突变等,其中 genistein 抑制肿瘤的血管生成是当前的研究热点之一 。MTA (matastasisassociated gene)是近年来发现的一组与肿瘤转
20、移密切相关的基因,包括 MTA1、 MTA2 和 MTA3 等2 ,有研究表明 MTA1 在 mRNA 水平与多种肿瘤的侵润转移密切相关3 。nm23 基因(nometastatic gene 23)是 steeg 等4用差异克隆杂交技术,在具有不同转移潜力的 7 种鼠 K1735 黑色素瘤细胞系 cDNA 文库中克隆出来的一种转移抑制基因。人类 nm23 基因有 5 种亚型,最早报道为 nm23H1 和 nm23H2 两个亚型5 。nm23H1 mRNA 表达与多种肿瘤转移有关,nm23H2 mRNA 与肿瘤的关系研究较少。本文用体外实验的方法研究 genistein 对 HO 8910PM
21、 细胞侵袭和运动能力的影响,并用 RTPCR 的方法检测genistein 对 MTA1 mRNA 和 nm23H1 mRNA 表达的影响,探讨genistein 抗肿瘤侵袭转移的可能作用机制。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89
22、认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱1 材料与方法三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹
23、砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱1.1 实验材料 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂
24、标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱人高转移卵巢癌细胞(HO8910PM) 购自上海细胞生物所,由浙江省肿瘤研究所许沈华等6建立。细胞在含体积分数为 10%小牛血清,1105U/L 青霉素和 100mg/L 链霉素的 RPMI 1640完全培养基中,37、5%CO2(体积分数)饱和湿度孵箱培养。细胞经过消化传代,取对数生长期的细胞进行培养。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高
25、转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱1.2 药品与试剂 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能
26、力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱超级小牛血清购自杭州四季青公司;RPMI1640 培养基购自Gibco 公司;PVPF 滤膜(孔径 8m,直径 13mm)购自Osmonics 公司;Fibronectin 购自 Sigma 公司;Matrigel 购自BD 公司;4上样缓冲液(125mmol/L TrisHCl ,pH6.8,4%SDS,10% 巯基乙醇,20%甘油,0 .04%溴酚蓝); RTPCR
27、 试剂盒购自 Qiagene 公司;100bpDNAmarker 购自华美生物工程公司;genistein 购自sigma 公司,实验前用 DMSO 溶解,培养液稀释,DMSO 终浓度为0.1(实验证明该浓度对细胞无影响)。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测genistein
28、对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱1.3 台盼蓝拒染法测定异黄酮作用 6h 对 HO8910PM 细胞增殖的影响 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 ge
29、nistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱选取对数生长期的 HO8910PM 细胞,经胰酶消化、台盼蓝染色后在血球计数板上计数,确保活细胞在 97%以上。调整细胞浓度为每孔 2.5104 个(每孔 250L),加到 24 孔培养板中。将培养板放入 37、5%CO2 孵箱中培养。待细胞贴壁后取出培养板,加入不同浓度 genistein 1L,使其终浓度分别为25、50、100、200mol/L,每个浓度设 3 个平行孔;同时设置空白对照组和溶剂对照组。培养板放回孵箱
30、继续培养 6h,取出培养板,以台盼蓝活细胞拒染法计数活细胞,计算药物对细胞的增值抑制率(IR) 。细胞增殖抑制率(IR%)=(对照组细胞计数处理组细胞计数)/对照组细胞计数100%。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗
31、赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱1.4 重组基底膜侵袭、趋化性运动实验7 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿
32、友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱将 PVPF 滤膜用指甲油 manicure 贴在 Transwell 小室上,风干。在膜的外表面涂纤粘蛋白 Fibronectin(5g/10L),置超净台内风干,膜内表面涂基底膜成分 Matrigel5g(10L),使之干燥,形成人工重组基底膜;在 24 孔板内加入 0.1BSA RPMI1640,每孔 600L。收集对数生长期的 HO8910PM 细胞,悬浮于含 0.1BSARPMI1640 培养基中,终浓度为1109/L。将 Transwell 小室浸于 24 孔板的条件培养基中,每个小室加
33、细胞悬液 100L,再分别加入不同浓度genistein 1L,使其终浓度分别为 25、50mol/L,对照组加入等量的 PBS。37、5%CO2 温箱内孵育 6h。将 Transwell小室取出,滤膜用甲醇固定 1min,苏木精染色 3min,水洗,伊红染色 10s,水洗,用 PBS 浸湿的棉签擦去滤膜内表面的细胞;用封片胶将滤膜封于载玻片上,于 400显微镜下计数穿过PVPF 滤膜的细胞数。每膜计数上下左右中 5 个随机不同视野,每组平行设 3 个滤膜。运动实验与侵袭实验相比,只是 PVPF 滤膜上不需铺 Matrigel。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及
34、MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱侵袭抑制率(IR%)=(对照组穿膜细胞数-给药组穿膜细胞数)/对照组穿膜细胞数100%运动抑制率(IR%)=(对照组穿膜细胞数-给
35、药组穿膜细胞数)/对照组穿膜细胞数100%三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱1.5 半定量 RTP
36、CR 检测 MTA1 及 nm23H1 基因的 mRNA 表达 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱(
37、1)总 RNA 的提取:分别收集以 PBS、和 25、50、100mol/L genistein 处理 24h 的 HO8910PM 细胞,按 Trizol 试剂盒说明提取总 RNA。(2)引物设计与合成:nm23H1 引物设计参照文献8 ,引物序列为:sense primer:5AGG GCA GAC CAC ATT GCT TTT C3 ,antisense primer:5GCT GGG AGG AAG CAT TTT TAA TC3 ,扩增产物长度为 185bp。MTA1 引物设计参照文献8,引物序列为:sense primer:5AGC TAC GAG CAG CAC AAC GGG
38、 GT3 , antisense primer:5CAC GCT TGG TTT CCG AGG AT3 ,扩增产物长度为 290bp。以 GADPH 为内参照,引物序列为:sense primer:5 ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC 3,antisense primer:5TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA3 ,扩增产物长度为 452bp。引物均委托上海生工生物工程公司合成。(3)扩增条件:50逆转录30min,5预变性 15min,循环 35 次(9430s,501min,721min),再 72充分延伸 10min。取 5L PCR 产物加 1L
39、6上样缓冲液混匀(含荧光燃料 GreenI) ,1.8%琼脂糖凝胶在 100V 恒压电泳约 40min,紫外透射仪观察结果并拍照。相片经扫描仪扫描后,用图像分析软件 ScionImage进行光密度积分值分析,计算出 heparanase 分别与内参照GAPDH 的光密度积分值之比作为 heparanase 的相对含量值。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞
40、HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱1.6 统计学处理 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用
41、的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱采用 SPSS11.0 统计软件包进行方差分析。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以
42、台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱2 结果三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞
43、 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱2.1 genistein 作用 6h 后对 HO8910PM 细胞增殖的影响 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高
44、转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱分别用 25、50、100 mol/L 的 genistein 作用HO8910PM 细胞 6h 后,台盼蓝拒染法测定细胞增殖抑制率,结果表明,100mol/L genistein 作用细胞 6h 后,细胞增殖抑制率为(11.262.35)%;而当 genistein 的浓度为25、50mol/L 时,细胞增殖抑制率均少于 10%,且与对照组相比,差异无显著性(P0.05),可以认为 genistein 处理 6h 后对细胞增殖无明显的影响,
45、故选择 25、50mol/L 的异黄酮作为体外侵袭和趋化性运动的实验浓度。结果见表 1。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein )对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽
46、基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱表 1 genistein 作用 6h 后对 HO8910PM 细胞增殖的影响 (略)三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡
47、蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱与对照组相比较, *0.01。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标沛芽基牌刽通快惩
48、乡质俘整妙嘉葱2.2 genistein 对 HO8910PM 细胞侵袭基底膜成分能力的影响 三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒曲仇拜烟劝敢威增霞镰题涪麓坡蓑搁借铲利柞背骂标
49、沛芽基牌刽通快惩乡质俘整妙嘉葱用 25、50mol/L 的 genistein 处理 HO8910PM 细胞 6h 后,能明显抑制细胞体外侵袭基底膜成分 Matrigel 的能力,其抑制率分别是(10.791.42)%和(21.083.12)%,见表 2,图 1 A、B。三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株 HO8910PM 的侵袭、转移及 MTA1、nm23H1 基因表达的影响【摘要】目的:研究三羟异黄酮(genistein)对人高转移卵巢癌细胞 HO8910PM 转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测 genistein 对高转移卵巢癌细胞 HO89 认征吭腮朗赎临护奥未归媒橱帐腕宿友玄闰失椎蓟湾恭裹砒