1、HPLC 法测定呋塞米中有关物质的含量作者：wangyu 科研信息来源：文献资料 点击数： 228 更新时间：2007-12-3 关键词：呋塞米,高效液相色谱法,利尿药,托拉塞米,布美他尼健康网讯：呋塞米(Furosemide)是一种强效利尿药，应用于临床已 30 余年，其标准已被 2005 年版中国药典（二部）收载。近 20 年来除了托拉塞米和布美他尼，注射剂利尿药很少有新的品种产生、呋塞米注射液是一个比较成熟的品种，临床用量非常大）从呋塞米化学结构来看，呋塞米具有酰胺基，易被氧化分解，注射液的稳定性不够理想，而注射用吠塞米却能很好的解决这个问题。由于现有中国药典标准中还未见注射用呋塞米中有
2、关物质的含量控制项，故笔者建立了测定注射用呋塞米中有关物质含量的高效液相色谱法。 1 仪器与试药 Shimadzu 10-VP 高效液相色谱仪及 CLASS-VP 色谱工几作站（日本岛津公司）。 呋塞米原料药（江苏亚邦药业有限公司，纯度：99.7%，批号：030801）；注射用呋塞米（湖南中南科伦药业有限公司，规格：20mg，批号：20050220、20050221、20050222）；呋塞米注射液（山西省某药厂、安徽省某药厂、黑龙江省某药厂、海南省某药厂、河南省某药厂，规格均为每支 20mg，批号：200609201、 061201、20060821、061101、060901）：四氢呋喃为
3、色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为超纯水 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil-ODS（150mm4.6mm，5m）；流动相：水-四氢呋喃-冰醋酸（70;30:1）；检测波长：254nm；流速：1.OmLmin -1；进样量：20L。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液：精密称取呋塞米原料药适量，加流动相溶解并稀释制成浓度为 1mgmL-1的溶液，作为对照品溶液。 2.2.2 样品溶液：取样品 5 瓶，倾出内容物，研细，准确称取适量（约相当于呋塞米 25mg），置于 25mL 棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释制成浓度为 1mgmL-1的溶液，作为样品溶液。 2.2.3
4、空白样品溶液：取按处方比例及制备工艺制备的不含主药的空白辅料适量，按“2.2.2”项下方法制成空白样品溶液。 2.3 线性关系考察 避光操作。精密称取呋塞米原料药 50 000g，置于 25mL 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；精密量取贮备液 5、2.5、1、05、0.25mL，分别置于 lOmL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得系列溶液（包括贮备液）。分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行回归分析，得回归方程 A= 19 519C+823 572（r=0.9997）。结果表明，呋塞米检测浓度的线性范围为 5
5、02 OOOgmL -1。 2.4 专属性试验 2.4.1 高温破坏：取样品（批号:20050220）适量（约相当于呋塞米 25mg），置于 25mL 容量瓶中，于 105烘箱中放置 6h冷却，加入流动相溶解并稀释制成浓度为 1mgmL-1的溶液，按 “2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。HPLC 详见图 1。 2.4.2 酸破坏：取样品（批号：20050220）适量（约相当于呋塞米 25mg），置于 25mL 容量瓶中，加入 0.1molmL-1盐酸溶液（简称稀盐酸）2mL，放置 Zh 后加 0.1molmL-1氢氧化钠溶液（简称稀氢氧化钠）2mL 中和，再加人流动相稀释制成浓度为 1m
6、gmL-1的溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。HPLC 详见图 1。 2.4.3 碱破坏：取样品（批号：20050220）适量（约相当于呋塞米 25mg），置于 25mL 容量瓶中，加入稀氢氧化钠 2mL，放置 2h 后加稀盐酸 2mL 中和，再加入流动相稀释制成浓度为 1mgmL -1的溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。HPLC 详见图 1。 2.4.4 氧化破坏：取样品（批号：20050220）适量（约相当于呋塞米 25mg），置于 25mL 容量瓶中，加过氧化氢溶液 2mL，放置 2h，用流动相稀释制成浓度为 lmgmL-1的溶液，按“2.1”项下色谱条件
7、进样测定，记录色谱。HPLC 详见图 1。 由图 1 可知，各项专属性试验中，呋塞米主峰与其它杂质峰均分离很好。 2.5 精密度试验 2.5.1 进样精密度：精密称取样品（批号：20050220）适量，用流动相溶解并稀释成浓度为 1mgmL-1的溶液。按“2.1”项下色谱条件重复进样测定 5 次，以相对主峰保留时间约 0.4 的有关物质峰面积计算。结果，RSD=6.90。 2.5.2 方法精密度：精密称取同一批样品（批号：20050220）5 份，用流动相溶解并稀释成浓度为 1mgmL-1的溶液。按 “2.1”项下色谱条件重复进样测定 5 次，以相对主峰保留时间约 0.4 的有关物质峰面积计算
8、。结果，RSD=8.26%。 2.6 稳定性试验 精密量取样品溶液，分别在室温放置 1、2、3、4、5h 后，进样测定，检查有关物质峰面积。结果表明，样品溶液在 5h 内较稳定。 2.7 注射用呋塞米中有关物质的含量测定 避光操作。精密称取样品内容物适量（约相当于呋塞米 25mg），置于 25mL 棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为样品溶液；精密量取样品溶液 1mL，置于 100mL 棕色容量瓶中，加流动相稀释制成浓度为 10gmL-1的溶液，作为 1自身对照溶液精密吸取对照溶液 20L，进样测定，调竹仪器检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为记录仪满量程的 1020：再精密量取样晶溶液和
9、对照溶液各 20L，进样测定，记录色谱至主成分峰保留时间的 2.5 倍，样品溶液的色谱中如有杂质峰，相对主峰保留时问约 0.4（H）的杂质峰血积占主峰面积的百分含量不得过 0.5；各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%）。有关物质含量测定结果详见表 1。 表 1 有关物质含量测定结果批号 H 时杂质/% 总杂质/%20050220 0.15 0.7920050221 0.20 0.7320050222 0.14 0.83200609201 0.25 0.91061201 0.29 1.0220060821 0.33 1.18061101 0.35 1.23060901 0.40 1
10、.57表 1 可知，3 批注射用呋塞米中有关物质的平均含量为 0.78%。 2.8 呋塞米注射液中有关物质的含量测定 避光操作。分别精密量取 5 个厂家的呋塞米注射液 1mL, 置于 1OmL 棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液 1mL，置于 100mL 棕色容量瓶中，加流动相稀释制成浓度为 10gmL -1的溶液，作为1自身对照溶液（再按“2.7”项下方法进行测定。结果见表 1、 3 讨论 注射用呋塞米按市售包装对光不稳定，取本品市售包装（批号：20050220），横放置于光橱内离日光灯 5cm 处照射，光照度 4 500Lx。于 5、10d 后取样，进行外观及有关
11、物质检查，光照 5、10d 与 Od 比较，外观颜色变黄，有关物质增加。结果表明，呋塞米对光不稳定，应避光操作和避光保存。 在呋塞米原料药质量标准中采用紫外分光光度法控制了芳香第一胺的含量，在 530nm 波长处测定，吸光度不得大于 0.12，在具体制剂检查中，无沦是光照破坏的样品，还是加速试验和长期留样试验的样品，其吸光度均约为 0，但将这些样品用 HPLC 法检查其有关物质，结果见表 1。说明采用质量标准方法不能准确、有效地控制产品的质量。而且从 5 个厂家生产的呋塞米注射液有关物质测定结果可见，不同来源的样品其有关物质有所不同，甚至达不到注射用呋塞米的标准。 目前，2005 年版中国药典有呋塞米和呋塞米注射液的含量测定方法，但未对其有关物质进行检查。特别对于注射用的药物存在严重的安全隐患，故笔者建立了有关物质的检查方法，以为保证该产品的质最和稳定性提供参考。 综上所述，本文所建立的方法简便、快捷、准确、重现性好，可用于该制剂的质量控制。
