1、 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/凝 胶 渗 透 色 谱 2气 相 色 谱 2质 谱 测 定 花 生 中 乙 草 胺 的 残 留 量王 建 华 X1 ,2 , 储 晓 刚 3(1. 中 国 海 洋 大 学 , 青 岛 266003 ; 2. 山 东 出 入 境 检 验 检 疫 局 技 术 中 心 , 青 岛 266002 ;3. 中 国 检 验 检 疫 科 学 研 究 院 , 北 京 100025)摘 要 : 建 立 了 以 凝 胶 渗 透 色 谱
2、( GPC) 净 化 和 气 相 色 谱 2质 谱 ( GC2MS) 技 术 快 速测 定 花 生 中 乙 草 胺 残 留 量 的 方 法 。 经 乙 腈 提 取 , 共 提 物 中 的 油 脂 和 色 素 经 GPC去 除 , 目 标 农 药 采 用 GC2MS2SIM 方 式 进 行 定 性 和 定 量 分 析 。 方 法 的 回 收 率 90 % 120 % ; 相 对 标 准 偏 差 2. 5 % 10 %。 方 法 定 量 限 01005 gPg。关 键 词 : 凝 胶 渗 透 色 谱 ; 气 相 色 谱 2质 谱 ; 乙 草 胺 ; 花 生 ; 残 留中 图 分 类 号 :O657
3、. 63 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :100020720 (2007) 122031204乙 草 胺 (acetochlor) ,商 品 名 称 : Harness ,是 一种 应 用 广 泛 的 新 型 芽 前 酰 胺 类 除 草 剂 , 用 于 防 除一 年 生 禾 本 科 杂 草 及 部 分 阔 叶 杂 草 。 日 本 2006 年5 月 29 日 实 施 肯 定 列 表 制 度 后 , 对 花 生 中 乙 草 胺采 用 一 律 标 准 , 即 最 高 残 留 限 量 10 gPkg。 在 7 月从 中 国 出 口 花 生 中 发 现 乙 草 胺 超 标 以 来 , 现
4、已 经实 施 了 100 %的 命 令 检 查 。 这 将 影 响 我 国 花 生 的 对日 本 出 口 。 因 此 , 亟 需 建 立 常 规 检 验 方 法 , 以 保 证花 生 的 质 量 安 全 。花 生 是 粮 谷 类 中 公 认 的 难 做 的 样 品 。 一 般 生花 生 成 分 如 下 (干 基 ) : 水 分 5. 33 % 9. 16 % , 油分 44. 27 % 53. 86 % ; 磷 脂 0. 5 % 1. 5 % , 碳 水 化合 物 9. 89 % 23. 62 % ;蛋 白 质 23. 96 % 33. 94 % ;灰 分 1. 75 % 2. 58 % ,
5、粗 纤 维 2. 67 % 5. 26 %。油 脂 和 蛋 白 质 等 含 量 远 远 高 于 其 它 粮 谷 。 这 些 高沸 点 的 物 质 沉 积 在 进 样 口 和 色 谱 柱 中 , 占 据 活 性位 点 , 而 导 致 色 谱 分 离 能 力 降 低 , 同 时 产 生 基 质增 强 效 应 1 。 因 此 有 效 的 去 除 油 脂 等 的 干 扰 , 保 证农 药 的 回 收 率 , 具 有 一 定 的 难 度 。 国 外 有 SPE2HPLC(液 相 色 谱 )测 定 花 生 中 的 两 种 磺 酰 脲 类 农 药的 方 法 2 。 凝 胶 渗 透 色 谱 法 ( GPC)已
6、 经 用 于 含 油 脂少 的 大 米 的 检 测 3 5 。 未 见 GPC 测 定 花 生 的 报 道 。国 内 外 未 见 测 定 花 生 中 乙 草 胺 的 报 道 。 本 方 法 通过 采 用 细 口 径 GPC 净 化 , 既 能 够 有 效 除 去 油 脂 ,色 素 等 , 又 减 少 了 试 剂 的 消 耗 , 准 确 度 和 精 密 度令 人 满 意 , 定 量 限 可 达 01005 gPg。1 实 验 部 分1. 1 仪 器 与 试 剂Agilent 公 司 689025973N 气 相 色 谱 2质 谱 仪 , 配7683 自 动 进 样 器 , 分 流 P不 分 流
7、进 样 口 ; HP25 MS毛 细 管 气 相 色 谱 柱 (30 m 0. 25 mm i. d. , 0. 25 m) ; ULTRATURRAX均 质 器 (德 国 IKA 公 司 ) , 离心 机 ( Eppendorf5810) , 旋 涡 混 合 器 (德 国 IKA) , 震荡 器 (德 国 IKA) 。 移 液 器 : 0. 2 mL , 1. 0 mL , 10 mL(法 国 Gilson 公 司 ) , 全 自 动 凝 胶 渗 透 色 谱 仪 (法 国Gilson 公 司 ) , 玻 璃 凝 胶 柱 (250 mm 15mm) 填 料 为SX23 ; 流 动 相 : V
8、(环 己 烷 ) V (乙 酸 己 酯 ) = 1 1 ;旋 转 蒸 发 仪 (瑞 士 Buchi 公 司 ) 。 农 药 标 准 品 购 自 德国 Dr. Ehrenstorfer 公 司 ; 农 药 标 准 品 用 V (环 己 烷 ) V (乙 酸 乙 酯 ) = 1 1 混 合 液 配 制 110 mgPmL 贮 备液 , 根 据 需 要 用 逐 级 稀 释 成 工 作 液 ; 乙 腈 、 乙 酸 乙酯 和 环 己 烷 为 分 析 纯 。1. 2 气 相 色 谱 2质 谱 条 件1. 2. 1 气 相 色 谱 条 件 载 气 : 高 纯 氦 气 , 恒 压 模式 136 kPa , 柱
9、 温 程 序 : 初 始 温 度 70 , 保 持 4. 0min , 以 25 Pmin 的 速 率 , 升 温 到 150 , 以 3 Pmin的 的 速 率 , 升 温 到 200 , 再 以 8 Pmin 的速 率 , 升 温 到 280 保 持 1010 min。13第 26 卷 第 12 期2007 年 12 月 分 析 试 验 室Chinese Journal of Analysis Laboratory Vol. 26. No. 122007 - 12X 收 稿 日 期 : 2006210204 ; 修 订 日 期 : 2006212218作 者 简 介 : 王 建 华 (19
10、68 - ) , 男 , 高 级 工 程 师 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/1. 2. 2 质 谱 条 件 离 子 源 温 度 : 150 , 四 极 杆温 度 : 230 , 色 谱 2质 谱 接 口 温 度 : 280 ; 离 子化 方 式 : EI ; 电 子 能 量 : 70 eV ; 全 扫 描 (范 围 50450 mPz)用 于 测 定 样 品 净 化 效 果 , 选 择 离 子 监 测用 于 定 性 和 定 量 测 定 。1. 3
11、分 析 步 骤准 确 称 取 粉 碎 花 生 样 (过 孔 径 01356 mm) 5. 00g 于 50 mL 塑 料 离 心 管 中 , 准 确 加 入 纯 水 10 mL ,浸 泡 10 min , 加 入 乙 腈 20 mL , 均 质 2 min , 6000rPmin离 心 5 min , 加 入 6 g NaCl , 准 确 加 入 5 mL 磷酸 盐 缓 冲 液 , 定 时 振 摇 3 min , 6000 rPmin 离 心 10min ; 取 乙 腈 层 转 入 100 mL 梨 形 瓶 , 再 加 乙 腈 20mL 重 复 上 述 提 取 1 次 , 合 并 , 旋 转
12、式 蒸 发 仪 浓 缩至 约 1 mL , 氮 气 吹 干 , 准 确 移 取 4 mL 流 动 相 混 合液 溶 解 , 涡 旋 30 s , 过 滤 ; 准 确 进 样 1 mL GPC 净化 , 流 速 为 3 mLPmin , 收 集 7 12 min 的 馏 分 。 浓缩 到 近 干 , 用 V (环 己 烷 ) V (乙 酸 乙 酯 ) = 1 1 混合 液 定 容 1 mL , 待 检 测 。2 结 果 与 讨 论2. 1 提 取 溶 剂 和 提 取 方 式 的 选 择乙 腈 与 丙 酮 相 比 , 提 取 的 杂 质 较 少 , 故 选 择乙 腈 为 提 取 溶 剂 。 然 后
13、 进 行 样 品 添 加 水 份 与 不 添加 水 份 的 对 比 实 验 : 选 择 实 际 含 有 乙 草 胺 的 花 生仁 阳 性 样 品 , 一 份 添 加 纯 水 10 mL 浸 泡 后 加 乙 腈提 取 , 一 份 不 加 水 直 接 用 乙 腈 提 取 。 其 它 净 化 , 浓缩 , 检 测 步 骤 一 样 。 结 果 发 现 : 添 加 了 水 份 的 测 得量 为 10. 5 ngPg , 而 未 加 水 测 得 量 为 2. 8 ngPg ; 乙 草胺 有 一 定 的 水 溶 性 (233 mgPL) , 加 水 后 , 能 够 很 好的 进 入 水 相 , 而 后 经
14、盐 析 和 液 P液 分 配 进 入 乙 腈相 , 提 高 提 取 效 率 。2. 2 净 化 方 法 的 选 择传 统 的 GPC 柱 一 般 需 要 收 集 溶 剂 95 mL , 时间 1 h。 本 实 验 采 用 了 细 口 径 凝 胶 渗 透 色 谱 柱 用 以除 去 样 品 中 的 油 脂 类 大 分 子 杂 质 的 干 扰 , 需 要 收集 溶 剂 18 mL 用 时 0. 5 h。 在 实 验 中 发 现 GPC 的 净化 效 率 受 上 样 量 影 响 。 上 样 量 多 , 油 脂 、 色 素 在GPC 柱 上 的 脱 尾 严 重 , 净 化 效 果 差 。 在 实 验 中
15、 还发 现 , 在 有 基 质 干 扰 时 , 目 标 农 药 会 提 前 流 出 , 导致 回 收 率 降 低 。 通 过 优 化 , 1. 25 g 花 生 样 品 全 部 上样 , 净 化 效 果 满 意 。 图 1 为 净 化 前 后 的 比 较 全 扫 描图 。从 图 中 可 看 出 , 保 留 时 间 19 min Hexadecanoicacid 棕 榈 酸 (十 六 烷 酸 ) 基 本 消 失 ; 保 留 时 间 31min Octadecenoic acid 十 八 醇 酯 酸 基 本 消 失 ; 保 留时 间 37 min 维 生 素 E 完 全 消 失 ; 保 留 时 间
16、 24 min的 Octadecadienoic acid 十 八 双 酸 大 大 减 少 。图 1 GPC净 化 前 (a) 后 (b)的 比 较 全 扫 描 图Fig. 1 Scan chromatogram of peanut before (a) and after (b) GPC cleaning up2. 3 监 测 离 子 的 选 择为 了 达 到 更 低 的 方 法 检 出 限 , 选 择 基 峰 和 较高 丰 度 的 离 子 作 为 监 测 离 子 , 对 每 一 个 离 子 , 分析 其 在 花 生 中 的 提 取 色 谱 图 , 确 保 样 品 在 目 标 农药 处 不
17、含 干 扰 峰 , 特 征 离 子 选 择 为 146 , 162 , 174 ,223 , 269。2. 4 基 质 效 应 的 评 价按 照 1. 3 所 述 过 程 制 作 的 不 含 农 药 的 空 白 花生 样 品 基 质 溶 液 稀 释 农 药 贮 备 液 , 并 与 等 同 浓 度的 用 纯 溶 剂 配 制 农 药 标 准 溶 液 比 较 , 峰 面 积 未 发现 明 显 的 变 化 , 证 明 基 质 效 应 基 本 消 除 。23第 26 卷 第 12 期2007 年 12 月 分 析 试 验 室Chinese Journal of Analysis Laboratory V
18、ol. 26. No. 122007 - 12 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/2. 5 方 法 的 线 性 范 围 、 回 收 率 和 检 出 限准 确 配 制 0. 005 0. 5 mgPL 的 农 药 标 准 系 列 溶液 进 行 分 析 , 相 关 系 数 为 0. 999。 在 空 白 样 品 中 分别 添 加 相 当 于 0101、 0105、 011 gPg 的 标 准 溶 液 ,在 冷 冻 冰 箱 放 置 48 h , 每 种 浓
19、度 重 复 实 验 4 次 , 得出 农 药 回 收 率 90 % 120 % ; 相 对 标 准 偏 差 2. 5 % 10 %。 以 空 白 样 品 信 噪 比 10 倍 设 定 定 量 限 , 方法 的 定 量 限 为 01005 gPg。2. 6 实 样 测 定自 2006 年 7 月 以 来 , 采 用 本 方 法 检 测 了 大 量的 出 口 花 生 样 品 。 对 其 中 一 个 大 粒 花 生 阳 性 样 品进 行 5 次 重 复 测 定 结 果 , 平 均 值 11. 0 gPkg , 相 对标 准 偏 差 3. 7 %。 其 对 应 的 色 谱 图 见 图 2。通 过 优
20、化 气 质 条 件 , 本 方 法 还 可 以 测 定 花 生中 其 它 农 药 。图 2 乙 草 胺 的 选 择 离 子 色 谱 图Fig. 2 SIM chromatogram of acetochlor(a) 阳 性 花 生 ; (b) 空 白 花 生 ; (c) 标 准 10 gPL 乙 草 胺 (保 留 时 间 16147 min)参 考 文 献1 赵 海 峰 , 王 建 华 , 邴 欣 等 . 中 国 海 洋 大 学 学 报 , 2006 ,36 (1) : 762 Hashimoto T , Nagayama T , Kobayashi et al. Journal of the
21、Food Hygienic Society of Japan ( Shokuhin EiseigakuZasshi , written in Japanse) , 1998 , 39 (5) : 3243 李 樱 , 储 晓 刚 , 仲 维 科 等 . 分 析 化 学 , 2004 , 32(10) : 132533第 26 卷 第 12 期2007 年 12 月 分 析 试 验 室Chinese Journal of Analysis Laboratory Vol. 26. No. 122007 - 12 1994-2009 China Academic Journal Electronic
22、 Publishing House. All rights reserved. http:/4 张 伟 国 , 储 晓 刚 , 李 重 九 . 农 药 , 2005 , 44 (8) : 3725 张 伟 国 , 储 晓 刚 , 李 重 九 . 分 析 化 学 , 2006 , 34 (4) :484Determination of residual acetochlor in peanut by gel permeation chromatography and gas chromatographyPmass spectrometryWANG Jian2hua 3 1 ,2 and CHU
23、Xiao2gang3 (1. Ocean University of China , Qingdao 266003 ; 2. Shandong Exit 3. Chinese Aademy of Inspection and Quarantine , Beijing100023) , Fenxi Shiyanshi , 2007 , 26 (12) : 31 34Abstract : A method for rapid determination of acetochlor residues in peanut is described. The pesticide was extracte
24、dusing acetonitrile from samples , most of lipids in co2extractives were removed by gel permeation chromatography. Thepesticides were finally determined by gas chromatographyPmass spectrometry in selective2ion monitor ( SIM) . Therecoveries (spiked level 0. 01 , 0. 05 and 0. 1 gPg) were between 90 %
25、 and 120 %. The relative standard deviations ofthe method were 2. 5 % 10 %. The method was used for the determination of acetochlor in real peanut samples.Keywords : Gel permeation chromatography ; Gas chromatography2mass spectrometry ; Acetochlor ; Peanut ; Residues中 国 化 学 会 第 26 届 学 术 年 会(第 一 轮 通
26、知 )中 国 化 学 会 第 26 届 学 术 年 会 定 于 2008 年 7 月 13 16 日 在 天 津 举 行 。 会 议 由 中 国 化 学 会 主 办 , 南 开 大 学 承 办 , 天 津 师范 大 学 、 天 津 理 工 大 学 协 办 。大 会 主 题 : 化 学 与 和 谐 社 会会 议 内 容 包 括 : 大 会 特 邀 报 告 、 分 会 邀 请 报 告 、 专 题 报 告 与 讨 论 、 论 文 墙 报 展 讲 , 同 时 设 置 专 题 学 术 论 坛 。 会 议 期 间还 将 组 织 展 览 展 示 。 欢 迎 广 大 科 技 工 作 者 积 极 参 加 , 踊
27、 跃 投 稿 。 热 烈 欢 迎 相 关 企 业 、 高 校 、 科 研 院 所 利 用 此 次 契 机 , 扩 大影 响 , 参 与 会 展 。本 次 学 术 年 设 置 绿 色 化 学 、 环 境 化 学 、 化 学 生 物 学 等 20 个 学 术 分 会 ;专 题 论 坛 1 个 及 新 技 术 新 仪 器 专 场 展 示 。 其 中 分析 化 学 为 第 9 分 会 。分 析 化 学 分 会 的 征 文 范 围(1) 原 子 光 谱 分 析 方 法 ; (2) 分 子 光 谱 分 析 方 法 ; (3) 色 谱 法 与 分 离 技 术 ; (4) 电 分 析 化 学 与 传 感 器
28、; (5) 环 境 分 析 化学 ; (6) 生 物 分 析 化 学 ; (7) 波 谱 法 ; (8) 质 谱 分 析 ; (9) 分 析 仪 器 与 联 用 技 术 。征 文 联 系 及 收 集 人 : 张 毅地 址 : 天 津 市 卫 津 路 94 号电 话 : 022223506075单 位 : 南 开 大 学 化 学 系邮 政 编 码 : 300071电 子 信 箱 : nkgcms gmail. com联 系 人 : 唐 惠通 讯 地 址 : 北 京 2709 信 箱 转 中 国 化 学 会 邮 编 : 100080 电 话 : 010262625584传 真 : 010262568157 电 子 信 箱 : ccs office iccas. ac. cn43第 26 卷 第 12 期2007 年 12 月 分 析 试 验 室Chinese Journal of Analysis Laboratory Vol. 26. No. 122007 - 12
