1、实验五,激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定,实验性质：综合性,实验：激素对血糖浓度的影响- 邻甲苯胺法测血糖一、目的及要求1掌握血糖的测定原理及方法。 2掌握血糖的正常范围及意义。 3熟记胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响并解释其作用机制。,二、原理:,3H2O冰乙酸， 沸水浴 1）葡萄糖 5-羟甲基-2-呋喃甲醛2） 5-羟甲基-2-呋喃甲醛 + 邻甲苯胺 西夫氏碱（蓝绿色）3）同样处理标准管与样品管,三、试剂：（略）,四、操作步骤：,实验分组：2 大组 / 实验室 ，即胰岛素组和肾上腺素组。4 或 5 小组 / 大组，即胰前和胰后组 或肾前和肾后组。,1、取预先饥饿 14-16 小时的正常
2、家兔 2只，称重。2、从耳缘静脉采血：剪毛 二甲苯棉球擦拭 干棉球擦干 碘酒、酒精消毒 7号针头穿刺取血放入加有抗凝剂（草酸钠：2mg / ml）的烧杯中摇匀。,3、1只家兔 肌肉注射胰岛素（ 5U / Kg , 规格：5U / ml ），另一只家兔 皮下注射 肾上腺素（0.5 mg / 只，规格： mg / ml ）。4、30分钟后，分别从耳缘静脉取血或心脏取血。,5、无蛋白血滤液的制备：,取短试管 4只，各加胰前、胰后、肾前、肾后等抗凝血 0.4 ml，用滤纸擦净粘附于吸管尖端外表面的血液，再加入 5%三氯醋酸 3.6ml，边加边摇，充分混匀。待血液由鲜红色变为暗红色（或酱油色），3000
3、rpm 离心5min，上清即为无蛋白血滤液。,6、取试管 6 支，编号，按下表操作（单位：ml）,H2O 1.0 标准液 1.0 胰前无蛋白血滤液 1.0 胰后无蛋白血滤液 1.0 肾前无蛋白血滤液 1.0 肾后无蛋 白血滤液 1.0 邻甲苯胺试剂 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5,空白管 标准管 胰前管 胰后管 肾前管 肾后管,各管分别混匀，同时置于100水浴加 热8分钟，流水冷却 。630 nm进行比色， 以空白管校正零点，读取各管光密度。,五、计算,血糖(mg) = O.D测定 / O.D标准 0.1 1 1 / 0.1 100= O.D测定 / O.D标准 100,六、注
4、意事项:,1、采血及注射激素时，应尽量使家兔保持安静。2、由于血细胞不断从血浆摄取葡萄糖加以利用，因此, 采血后及时进行检测，否则血糖浓度将逐渐降低。3、取血量要准确。,4、无溶血现象及高脂血症时，可以不制备血滤液，而用血清或血浆直接检测。5、邻甲苯胺是一种带微黄色的油状液体，久放后于光线或空气接触易氧化变质；如色泽变红，最后变棕黑色，此时必须重新蒸馏提纯。,6、硫脲是抗氧化剂，可使邻甲苯胺试剂稳定，减低空白管读数，并使反应化合物呈现纯兰绿色。七、临床意义：正常情况下，血糖浓度在各种因素调解下，维持相对恒定；一旦调节发生紊乱，可导致高糖血症或低糖血症。,1、生理或暂时性高血糖：,餐后12小时，
5、注射葡萄糖后，情绪紧 张激动时，肾上腺素分泌增多或注射该药 后，可出现暂时性高血糖。,2、病理性高血糖：,多见于胰岛素相对或绝对不足（糖尿病）。其它内分泌系统的疾病，如甲状腺功能亢进、垂体前叶功能亢进（巨人症或肢端肥大症）、肾上腺皮质功能亢进（库欣综合征）、嗜铬细胞瘤、胰岛-细胞瘤等。,3、生理性低血糖或暂时性低血糖：,见于饥饿或剧烈运动后，注射胰岛素 或口服降糖药后（多见于药物反应或超量 用药）。,4、病理性低血糖：,可见于胰岛细胞瘤引起的胰岛素分泌过多症，严重肝病由于肝的生血糖作用降低而使血糖来源减少，对抗胰岛素的激素分泌不足如垂体、肾上腺皮质或甲状腺功能减退等。,八、思考题：,1、血糖的
6、来源与去路有哪些？2、调节血糖的激素主要有哪些？其作用机制如何？3、在实验中应注意哪些问题？,九、实验报告： 10分,实验报告按医学论文格式书写，包括中文摘要（目的、方法、结果、结论四部分，2分）、材料（1分）、方法（2分）、结果（2分）、讨论（3分）和参考文献等部分。,电动离心机的使用 ：,离心机是利用离心力对混合液体进行分离沉淀的一种专用仪器。利用电动离心机可使混合液体中的悬浮微粒快速沉淀，借以分离各种物质成分。,按离心时转速的不同，离心机可分为：离心机 转速 / 分普通（低速） 4 000 rpm高速 2 0000 rpm超速 7 0000 rpm,低速离心机的使用：,1、使用前先检查
7、变速旋纽 是否在“0”处，离心机套管底部需放有 橡皮垫 。2、选择大小合适的离心管（用小试管代替），待离心溶液盛量占管 2/3 体积为宜。,3、将盛有待离心溶液的两支离心管连同套管置台秤上，调节两边重量使之达到平衡。如不平衡，可调整离心管内容物量或加减离心管套管内水量。每次操作都必须严格遵守平衡的要求，否则离心管破裂，损伤离心机部件，甚至造成严重事故，应十分小心。,4、平衡好的离心管及管套，按对称方位放到 离心机插孔中。不用的离心套管取出，盖严离心机盖。,5、开动时，慢慢拨动旋钮使逐渐增加到所需的速度。当到达离心机所需的时间后，再调旋钮，进行逐渐减挡降速，最后将旋钮拨到 “0” ,待离心机自动停止后，才能打开离心机盖取出样品，不连续使用时拔下插头。,6、用完后，倒尽离心管内水，倒立放置使其干燥。电动离心机使用的注意事项 ：1、离心机应放在坚固的水平面上。,2、启动要慢，若启动快，不仅多余电流会变成热能，易烧坏线包，而且离心管受震动大，容易洒液及破管。停止时也要慢，绝不能用手阻止离心机强迫其停止。,3、离心过程中，若听到特殊响声，表明离心管可能破裂，应立即停止离心。如果管已经破裂，应清除破玻璃片；若管未破，也需要重新检查离心管是否平衡后再离心。,
