1、 ICS 备案号：陕西省地方标准DB61DB61/T 水果及浓缩果汁（浆）中多种农药残留量测定方法 液相色谱- 串联质谱法Determination of Multiple Pesticide Residues in Fruits and Concentrated Fruit Juices（Pulps ） LC-MS/MS（征求意见稿）-发布 -实施陕 西 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB61/T I前 言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由陕西出入境检验检疫局提出。本标准起草单位：
2、中华人民共和国陕西出入境检验检疫局。本标准主要起草人：。DB61/T 1水果及浓缩果汁（浆）中多种农药残留量测定方法 液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定了水果及浓缩果汁（浆）中多种农药残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。本标准适用于水果及浓缩果汁（浆）中多种农药残留量的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 方法提要试样中加入磷酸氢二钠缓冲溶液，调pH 后用乙腈萃取，N-丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱
3、净化，用液相色谱-串联质谱法检测，外标法定量。4 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。4.1 乙腈：色谱纯。4.2 甲醇：色谱纯。4.3 磷酸氢二钠（Na 2HPO412H2O）。4.4 氯化钠。4.5 氢氧化钠。4.6 无水硫酸钠：650 灼烧 4 h，贮于密封容器中备用。4.7 甲酸：色谱纯。4.8 氢氧化钠溶液（2 mol/L）：称取 8g 氢氧化钠，用 100 mL 水溶解。4.9 磷酸氢二钠缓冲液：称取 50 g 磷酸氢二钠、300 g 氯化钠，用水溶解并定容至 1000 mL。4.10 乙腈-甲醇（1 + 1，V/V）：取 50 mL
4、 乙腈、50 mL 甲醇混合均匀。4.11 甲酸溶液（0.1%）：取 500 mL 超纯水，加入 500 L甲酸，混匀。4.12 甲醇-甲酸溶液（65 + 35，V/V）：取 65 mL 甲醇，加入 35 mL 甲酸溶液（4.10），混匀。4.13 农药标准物质：相关信息参见附录 A 中表 A.1。4.14 标准储备液：分别称取适量的农药标准物质，用甲醇配制成 0.5 mg/mL 或 1.0 mg/mL 的溶液。4.15 混合标准溶液：分别移取各个农药的标准储备液，用甲醇定容，配制成浓度均为 5 g/mL的标准混合溶液。4.16 基质混合标准工作溶液：用样品空白溶液配制，现用现配。4.17 N
5、- 丙基乙二胺（ PSA）固相萃取柱：500 mg，6 mL 或相当者。使用前在柱上端装填约 2 cm 高的无水硫酸钠（4.6），然后用 5 mL 乙腈活化，保持柱体湿润。4.18 微孔滤膜：0.2 m，有机系。5 仪器和设备DB61/T 25.1 液相色谱-串联质谱仪：配有 ESI 电离源、串联四级杆质量分析器。5.2 分析天平：感量 0.01 mg、0.01 g。5.3 组织捣碎机。5.4 振荡器。5.5 固相萃取装置，带真空泵。5.6 离心机：转速不低于 4000 r/min5.7 减压旋转蒸发器。5.8 具塞离心管：50 mL。5.9 浓缩瓶：50 mL。6 试样制备与保存取代表性水果
6、样品约500 g，将其可食用部分切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于-18 冷冻避光保存。取代表性浓缩果汁（浆）样品约500 g，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于4 避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7 测定步骤7.1 提取净化称取2.0 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL离心管中，加入6 mL磷酸氢二钠缓冲液（4.9），振摇1 min，用氢氧化钠溶液调节pH 至89，加入10.0 mL乙腈，振荡提取10 min，4000 r/min离心5 min，准确取5.0 mL乙腈提取液，上样于活化好的
7、N- 丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱（4.17），然后用5 mL乙腈-甲醇（4.10）洗脱，固相萃取过程保持流速2 3 mL/min，于 40 旋转蒸发至近干，用1.00 mL甲醇-甲酸溶液（4.12）溶解定容，过0.2 m有机系微孔滤膜，供液相色谱-串联质谱法检测。7.2 测定7.2.1 液相色谱参考条件a) 色谱柱：HSS T3柱 1)，长100 mm，内径2.1 mm，粒径1.8 m，或相当者；b) 流动相：甲醇-甲酸溶液（ 4.11）梯度洗脱，参见表 1，梯度变化模式为线性递增或递减；表 1 流动相条件时间（min）流速（mL/min） 甲醇（%）甲酸溶液（%）0.00 0.30 20
8、 803.00 0.30 60 406.00 0.30 60 409.50 0.30 95 512.00 0.30 95 512.20 0.30 20 8014.00 0.30 20 40c) 柱温：35 C；d) 进样量：5.0 L。1) HSS T3 柱是是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息只是是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。DB61/T 3e) 61 种农药的参考色谱保留时间参见附录 B 中表 B.1。7.2.2 质谱参考条件a) 电离方式：ESI +；b) 毛细管电压：3 Kv；c) 萃取电压：3
9、V；d) 脱溶剂气：氮气，纯度99.9 %，500 L/h ；e) 锥孔气：氮气，纯度99.9 %，50 L/h ；f) 碰撞气：氩气，纯度99.999 % ，0.2 mL/min ；g) 脱溶剂气温度：400 C；h) 离子源温度：115 C；i) 采集模式：多重反应监测模式（MRM）；j) 多重反应监测条件参见附录B中表B.1 。注：7.2.2为采用waters Quattro Premier XE串联四级杆质谱仪时的质谱检测参数，若选用其他仪器，可根据具体情况进行调整。7.3 定量测定及定性确证7.3.1 定量测定根据样液中农药残留含量情况，选定与样液浓度相近的标准工作溶液，标准工作溶液
10、和样液中农药的响应值均应中仪器检测线性范围内，如果样液中农药含量超出检测的线性范围，则稀释后再进样。对标准工作溶液和样液等体积分时段参插进样测定，外标法定量。7.3.2 定性确证对标准工作液及样液按7.2规定的条件进行测定时，如果样液与标准工作液的选择离子图中，样液中目标物质的保留时间与相近浓度标准溶液的保留时间偏差在 2.5 %以内；且定性离子对的相对丰度与相近浓度标准溶液对应定性离子对的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/(%) 50 20 至 50 10 至 20 10允许的相对偏差/(%
11、) 20 25 30 507.4 空白试验除不加试样外，均按上述检测步骤进行。7.5 结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中各个农药残留量（1）mAVcXs式中：X 试样中农药的含量，单位为毫克每千克，mg/kg；A 样液中农药的色谱峰面积；cs 标准工作液中农药的浓度，单位为微克每毫升，g/mL ；V 样液最终定容体积，单位为毫升，mL ；As 标准工作液中农药的色谱峰面积；m 最终样液所代表的试样量，单位为克，g。8 测定低限、回收率DB61/T 48.1 测定低限本方法中61种农药的测定低限均为0.01 mg/kg。8.2 回收率不同样品基质中61种农药的加标回收率均在65
12、 % 125 %范围内，平均回收率均大于75 %，回收率相对标准偏差均低于15 %。DB61/T 5附 录 A（资料性附录）农药标准物质信息表A.1 农药标准物质基本信息序号 化合物 英文名称 CAS.号 应用 分子式 分子质量 表 B.1中序号1 苯醚甲环唑 Difenoconazole 119446-68-3 杀菌剂 C19H17Cl2N3O3 405.0647 532 吡虫啉 Imidacloprid 138261-41-3 杀虫剂 C9H10ClN5O2 255.0523 63 吡虫清 Acetamiprid 135410-20-7 杀虫剂 C10H11ClN4 222.0672 74
13、 丙环唑 Propiconazole 60207-90-1 杀菌剂 C15H17Cl2N3O2 341.0698 455 残杀威 Propoxur 114-26-1 杀虫剂 C11H15NO3 209.1052 136 除虫脲 Diflubenzuron 35367-38-5 杀虫剂 C14H9ClF2N2O2 310.0321 387 哒螨灵 Pyridaben 96489-71-3 杀螨剂/杀虫剂 C19H25ClN2OS 364.1376 618 敌百虫 Trichlorfon 52-68-6 杀虫剂 C4H8Cl3O4P 255.9226 89 敌敌畏 Dichlorvos 62-73
14、-7 杀螨剂/杀虫剂 C4H7Cl2O4P 219.9459 1210 毒死蜱 Chlorpyrifos 2921-88-2 杀虫剂 C9H11Cl3NO3PS348.9263 5811 多菌灵 Carbendazim 10605-21-7 杀菌剂 C9H9N3O2 191.0695 312 多效唑 Paclobutrazol 76738-62-0 生长调节剂 C15H20ClN3O 293.1295 3213 二嗪磷 Diazinon 333-41-5 杀虫剂 C12H21N2O3PS 304.1011 4614 氟苯嘧啶醇 Nuarimol 63284-71-9 杀菌剂 C17H12ClF
15、N2O 314.0622 3015 氟虫脲 Flufenoxuron 101463-69-8 杀螨剂/杀虫剂 C21H11ClF6N2O3488.0362 6016 氟硅唑 Flusilazole 85509-19-9 杀菌剂 C16H15F2N3Si 315.1003 3917 氟菌唑 Triflumizole 99387-89-0 杀菌剂 C15H15ClF3N3O 345.0856 5118 环氟菌胺 Cyflufenamid 180409-60-3 杀菌剂 C20H17F5N2O2 412.121 4819 甲胺磷 Methamidophos 10265-92-6 杀螨剂/杀虫剂 C2
16、H8NO2PS 141.0013 120 甲基嘧啶磷 Pirimiphos-methyl 29232-93-7 杀虫剂 C11H20N3O3PS 305.0963 4421 甲萘威 Carbaryl 63-25-2 杀虫剂 C12H11NO2 201.079 1722 甲霜灵 Metalaxyl 57837-19-1 杀菌剂 C15H21NO4 279.1471 2223 腈菌唑 Myclobutanil 88671-89-0 杀菌剂 C15H17ClN4 288.1142 3424 抗蚜威 Pirimicarb 23103-98-2 杀虫剂 C11H18N4O2 238.143 925 克百
17、威 Carbofuran 1563-66-2 杀虫剂 C12H15NO3 221.1052 1426 氯苯嘧啶醇 Fenarimol 60168-88-9 杀菌剂 C17H12Cl2N2O 330.0327 3627 氯吡脲 Forchlorfenuron 68157-60-8 生长调节剂 C12H10ClN3O 247.0512 2428 嘧啶磷 Pirimiphos-ethyl 23505-41-1 杀虫剂 C13H24N3O3PS 333.1276 5529 嘧菌环胺 Cyprodinil 121552-61-2 杀菌剂 C14H15N3 225.1266 3130 嘧菌酯 Azoxys
18、trobin 131860-33-8 杀菌剂 C22H17N3O5 403.1168 27DB61/T 6续表A.1序号 化合物 英文名称 CAS.号 应用 分子式 分子质量 表 B.1中序号31 嘧霉胺 Pyrimethanil 53112-28-0 杀菌剂 C12H13N3 199.1109 1932 灭多威 Methomyl 16752-77-5 杀虫剂 C5H10N2O2S 162.0463 433 灭线磷 Ethoprophos 13194-48-4 杀虫剂/NematicideC8H19O2PS2 242.0564 3734 灭幼脲 Chlorbenzuron 57160-47-1
19、 杀虫剂 C14H10Cl2N2O2 308.0119 4035 扑灭津 Propazine 139-40-2 除草剂 C9H16ClN5 229.1094 2936 噻菌灵 Thiabendazole 148-79-8 杀菌剂 C10H7N3S 201.0361 537 噻螨酮 Hexythiazox 78578-05-0 杀螨剂 C17H21ClN2O2S 352.1012 5938 三环唑 Tricyclazole 41814-78-2 杀菌剂 C9H7N3S 189.0361 1039 三唑醇 Triadimenol 55219-65-3 杀菌剂 C14H18ClN3O2 295.10
20、88 3540 三唑酮 Triadimefon 43121-43-3 杀菌剂 C14H16ClN3O2 293.0931 3341 杀扑磷 Methidathion 950-37-8 杀虫剂 C6H11N2O4PS3 301.9619 2542 莎稗磷 Anilofos 64249-01-0 除草剂 C13H19ClNO3PS2367.0233 4343 水胺硫磷 Isocarbofos 24353-61-5 杀虫剂 C11H16NO4PS 289.0538 2144 四螨嗪 Clofentezine 74115-24-5 杀螨剂 C14H8Cl2N4 302.0126 4945 速灭威 Me
21、tolcarb 1129-41-5 杀虫剂 C9H11NO2 165.079 1146 特丁硫磷 Terbufos 13071-79-9 杀虫剂 C9H21O2PS3 288.0441 5647 戊菌唑 Penconazole 66246-88-6 杀菌剂 C13H15Cl2N3 283.0643 4148 戊唑醇 Tebuconazole 107534-96-3 杀菌剂 C16H22ClN3O 307.1451 4249 西玛津 Simazine 122-34-9 除草剂 C7H12ClN5 201.0781 1550 烯唑醇 Diniconazole 70217-36-6 杀菌剂 C15H
22、17Cl2N3O 325.0749 5251 辛硫磷 Phoxim 14816-18-3 杀虫剂 C12H15N2O3PS 298.0541 4752 亚胺硫磷 Phosmet 732-11-6 杀虫剂 C11H12NO4PS2 316.9945 2653 氧环唑 Azaconazole 60207-31-0 杀菌剂 C12H11Cl2N3O2 299.0228 2354 乙硫磷 Ethion 563-12-2 杀螨剂 C9H22O4P2S4 383.9876 5755 乙霉威 Diethofencarb 87130-20-9 杀菌剂 C14H21NO4 267.1471 2856 乙酰甲胺磷
23、 Acephate 30560-19-1 杀虫剂 C4H10NO3PS 183.0119 257 异丙威 Isoprocarb 2631-40-5 杀虫剂 C11H15NO2 193.1103 1858 异柳磷 Isofenphos 25311-71-1 杀虫剂 C15H24NO4PS 345.1164 5059 抑霉唑 Imazalil 35554-44-0 杀菌剂 C14H14Cl2N2O 296.0483 1660 茚虫威 Indoxacarb 144171-61-9 杀虫剂 C22H17ClF3N3O7527.0707 5461 莠去津 Atrazine 1912-24-9 除草剂 C
24、8H14ClN5 215.0938 20DB61/T 7附 录 B（资料性附录）质谱参考条件及色谱参考保留时间表B.1 61种农药测定的参考MRM条件及色谱参考保留时间序号 化合物 定量离子对 定性离子对锥孔电压（V）碰撞能量（ eV）保留时间（min）表 A.1中序号1 甲胺磷 142.0/94.0 142.0/124.9 20 15，12 1.34 192 乙酰甲胺磷 184.0/142.9 184.0/124.9 15 10，15 1.50 563 多菌灵 192.1/159.9 192.1/132.0 28 18，25 2.12 114 灭多威 163.0/88.0 163.0/106
25、.0 10 10，10 2.28 325 噻菌灵 202.1/175.0 202.1/130.9 21 20，25 2.47 366 吡虫啉 256.1/174.9 256.1/208.9 22 20，15 2.81 27 吡虫清 222.9/125.8 222.9/89.9 28 25，30 3.15 38 敌百虫 256.9/108.9 256.9/220.8 20 18，10 3.20 89 抗蚜威 239.0/72.1 239.4/182.0 25 20，15 3.36 2410 三环唑 189.9/162.8 189.9/135.8 40 20，25 3.72 3811 速灭威 16
26、6.0/108.9 166.0/90.9 15 8，25 4.03 4512 敌敌畏 221.0/109.0 221.0/79.1 25 18，28 4.22 913 残杀威 210.2/110.9 210.2/167.8 15 15，10 4.29 514 克百威 222.2/164.9 222.2/122.9 20 15，20 4.33 2515 西玛津 202.0/131.9 202.0/123.9 30 20，20 4.38 4916 抑霉唑 297.0/158.8 297.0/254.8 30 20，18 4.39 5917 甲萘威 202.2/145.0 202.2/127.0 1
27、5 10，25 4.58 2118 异丙威 194.1/95.0 194.1/137.0 20 15，8 5.25 5719 嘧霉胺 200.2/107.0 200.2/167.9 35 25，33 5.36 3120 莠去津 216.1/173.8 216.1/145.8 30 15，22 5.37 6121 水胺硫磷 290.9/230.9 290.9/120.9 12 10，30 5.59 4322 甲霜灵 280.1/220.0 280.1/192.0 20 13，17 5.61 2223 氧环唑 299.9/158.8 299.9/230.8 30 25，18 5.66 5324 氯
28、吡脲 248.0/128.9 248.0/154.8 26 15，15 5.72 2725 杀扑磷 302.9/144.9 302.9/85.0 17 10，18 5.97 4126 亚胺硫磷 317.9/159.8 317.9/132.9 20 15，40 6.36 5227 嘧菌酯 404.0/372.0 404.0/344.0 25 15，25 6.88 3028 乙霉威 268.1/225.9 268.1/179.8 15 10，18 6.92 5529 扑灭津 230.1/145.9 230.1/187.9 33 24，18 6.96 3530 氟苯嘧啶醇 314.9/251.8 3
29、14.9/81.0 35 20，25 6.97 14DB61/T 8续表B.1序号 化合物 定量离子对 定性离子对锥孔电压（V）碰撞能量（ eV）保留时间（min）表 A.1中序号31 嘧菌环胺 226.1/92.9 226.1/107.9 35 35，25 7.55 2932 多效唑 294.1/70.1 294.1/124.9 20 20，30 7.68 1233 三唑酮 293.9/196.9 293.9/224.9 28 15，12 7.96 4034 腈菌唑 289.1/70.2 289.1/125.1 25 15，26 7.98 2335 三唑醇 296.2/70.1 296.2/
30、99.0 15 15，13 8.30 3936 氯苯嘧啶醇 330.9/268.0 330.9/258.9 35 23，25 8.36 2637 灭线磷 243.2/130.9 243.2/96.8 25 20，30 8.50 3338 除虫脲 311.0/140.9 311.0/113.0 22 33，50 8.73 639 氟硅唑 316.0/165.0 316.0/247.0 25 25，18 8.74 1640 灭幼脲 309.0/155.9 309.0/138.9 25 18，30 9.02 3441 戊菌唑 284.0/158.9 284.0/172.9 25 25，20 9.02
31、 4742 戊唑醇 308.0/70.0 308.0/124.8 28 20，28 9.08 4843 莎稗磷 367.9/198.9 367.9/170.9 25 15，20 9.12 4244 甲基嘧啶磷 306.1/164.0 306.1/277.8 35 20，20 9.18 2045 丙环唑 342.0/158.8 342.0/204.9 30 30，18 9.20 446 二嗪磷 305.0/169.0 305.0/153.0 35 20，20 9.20 1347 辛硫磷 299.0/128.9 299.0/96.9 20 15，15 9.30 5148 环氟菌胺 413.0/29
32、5.0 413.0/241.0 20 16，22 9.34 1849 四螨嗪 302.9/137.8 302.9/101.9 20 15，35 9.39 4450 异柳磷 346.0/244.8 346.0/216.9 10 10，20 9.45 5851 氟菌唑 346.0/278.0 346.0/205.9 20 10，30 9.51 1752 烯唑醇 325.9/70.1 325.9/158.9 35 25，30 9.53 5053 苯醚甲环唑 406.0/251.0 406.0/188.0 40 25，45 9.55 154 茚虫威 528.0/149.9 528.0/202.9 30
33、 20，40 9.57 6055 嘧啶磷 333.9/197.8 333.9/169.8 35 22，35 9.99 2856 特丁硫磷 289.0/103.0 289.0/232.9 10 10，5 10.03 4657 乙硫磷 384.9/198.9 384.9/170.8 15 10，18 10.14 5458 毒死蜱 349.9/198.0 349.9/96.9 20 20，35 10.25 1059 噻螨酮 353.0/227.9 353.0/167.9 23 15，25 10.26 3760 氟虫脲 489.0/157.9 489.0/140.9 21 20，35 10.31 1561 哒螨灵 365.0/147.0 365.0/309.0 18 28，13 10.73 7
