1、细胞悬浮培养茄属植物 chrysotrichum（Schldl.） - 植物生产抗真菌的螺旋甾烷型甾体皂苷MaLuisa.Villarreal1;5Carlos.Arias2,Alfredo.Feria-Velasco3,Octavio.Tonatiuh.Ram.rez45关键词:真菌、批量悬浮培养, 茄属植物 chrysotrichum Schldl., 螺旋甾烷型甾体皂苷摘要对一种抗真菌皂甙螺旋甾烷醇定点生产的 SC - 1 已经在墨西哥发现的 Solanum chrysotrichum（拉丁文学名不用翻）细胞悬浮培养马铃薯胚轴在含有 MS 介质的烧瓶中震动培养 25 天得到的愈伤组织进行
2、批量培养得到一个细胞悬浮。在整个生长周期、鲜重和干重、SC-1 产量和蔗糖、葡萄糖、果糖的含量的是确定的。接种物大小和蔗糖浓度对生物量积累和合成活性代谢产物的影响进行了研究。最大的 SC-1 产量在 14 mg.g-1 以上(这是五十次田间种植的植物 ),用添加了 2 mg.l-12,4-D ，2mg.l -1 的激动素和蔗糖的 2%培养液和完整的 MS介质中培养 20 天之后产量增加到 3045gl-1。缩写:2,4-d2,4- 二氯苯氧基乙酸； DW干重；FW鲜重；IAA吲哚 -3-乙酸；MIC最小抑菌浓度；NAA萘乙酸；2、4、5-T 2、4、 5-三氯苯氧基乙酸。简介高等植物作为各种各
3、样有机化合物的抗真菌活性一个重要来源(Kue 1992)。然而,从种植中提炼出来的知识结构,由于药用或工业用途是有限的(Humphrey 1994)。虽然有许多天然成分能够广泛地研究了包括植物抗毒素已经为他们的活动对植物真菌的病原体(Bailey et al. 1982;Gordonet al.1980),有极少的信息的这些物质对人类的影响和动物的真菌病原物(带来的 1992 年)。多种严重关切人类的疾病是真菌引起的(Bulmer1979)，所以迫切需要去发现新的抗真菌分子。茄科茄物种来源于不同的甾体皂苷(Dopke et al. 1975; Verbist et al.1977; Chakr
4、avarty et al. 1978, 1979, 1980, 1981,1982; Adam et al. 1980)。不过,确实有人只有很少数的人描述这些具有抗真菌活性的化合物(Mahato et al. 1982; Okunji et al.1990) 。大量的与墨西哥等热带国家发生的皮肤感染流行病相关的植物学研究，报告指出茄科植物chrysotrichum（同上）是在东南方国家中为治疗各种皮肤真菌病最经常使用的一种植物(Zurita 但每个补充激素水平如下: 培养基 1(2mg-l 2、4 D)、培养基 2（0.5 mgl-1 NAA）,培养基 3（0.5 mgl-1 IAA）或者培养
5、基4（1 mgl-1 2,4,5-T） 。 烧瓶在恒温旋转振荡器中以 130 转每分钟用培养条件如前所述。成功的培养是每 15 天用 3 毫升培养液作再次培养。对经济增长和动力学研究大规模生产有关的变量,证明测 mgl 量每五天(3 次重复的平均值),在 25 天的培养:干重、鲜重、pH 、细胞经-碳水化合物,能干,SC-1 介质。鲜重被确定为过滤后生物量、冻干后干重，细胞活力测定用荧光素二乙酸盐(Widholm, 1972)。SC-1 提取生物活性物质这些细胞被采集和冻干产品在适当时期培养 干燥后的细胞(250毫克) 在室温下连续两次在 25ml 乙酸乙酯浸泡后提取。 后来,对干燥提取物是在
6、真空环境下蒸发,在一个高效液相色谱法溶剂系统重塑土样的甲醇水合氯仿过滤(29:70:1),( 孔径 0.4 毫米), 并将其应用于高效液相色谱柱。试验介质也存在的 SC -1。在受到一毫升等分量连续两次乙酸乙酯 1:1(v / v)萃取。SC-1 识别和量化应用薄层层析法为辨认了 SC-1 硅胶 G254 使用下列流动相( 氯仿-甲醇- 丙酮比例是 5:1:3),和斑点可视化铵铈的硫酸盐。高压液相色谱法的实施是使用 anRI-71Merck 示差折光检测器, 一个多孔玻璃 60 2584 毫米,5mm 默克专栏 ;和一个流动相的甲醇-氯仿- 水(29:70:1),和一个流量 120ml min
7、-1。SC-1 保留时间的山峰从细胞培养是和正宗的 SC-1 的分 离叶子对照。合适的校准曲线进行量化化合物的体外构建的基础上,运用绿叶的活跃的产品为标准。体外抗真菌检测抗真菌的测试分数和野生的细胞培养抗真菌的测试分数和野生植物细胞培养进行了方法根据报道为研究天然产物抗菌作用(斯1991)。皮肤真菌的测试是Trycophyton rubrum NRRL A-2846，Trycophyton mentagrophytes NRRL 1942, 石膏样小孢子菌NRRL A 2605。 （都是真菌学名，不管， ）有制霉菌素等是作为参考标准。观测结果, 观察一式两份中的一份,并进行了结果表现为最低浓度
8、的分数和产品,完全抑制生长(MIC值) 。图 1。高效液相色谱(HPLC)模式的 s . chrysotrichum 叶(A)和 20 天旧细胞悬架(B):流动相条件下甲醇水合氯仿提取物 120 毫升 29:70:1.流量最小:1 碳水化合物分析在培养基上高效液相色谱法因为碳水化合物分析、2 毫升的媒介是每两天为 10 分钟,判读在 每分钟转速 10000,（过滤孔径 0.4 毫米),自动取样器调和至一个小瓶里。 蔗糖、葡萄糖、果糖同时和总糖测定高效液相色谱分析方法DeVries 使用描述孙俐。(1979 年)。高效液相色谱系统采用多孔玻璃(5-4mm 100 NH2 柱 250 约 4 毫米
9、)是一个例子 50ul。易变相水化乙腈相（80:20);( 最低为 1 天流量 150 毫升和采用一种示差折光检测器。采用指数检测器。结果和讨论后的骨痂培养达到30天后形成达到92%。衍生的胚芽愈合组织并没有表现出任的器官形成,并繁衍成一个杂乱的质量易碎的亮褐色的细胞群落。这4种媒介在最初的细胞悬架试验中都能够支持细胞生长。然而,自从它被选中MS1提供了更精细悬架和更均匀的比其他细胞媒体。测试的细胞悬架抗真菌提取物从S.chrysotrichum值显示MIC价值是6.0mgml-1，一个类似的活动,获得与提取物从叶片的野生植物。两者的材料提取物对Trycophyton mentagrophyt
10、es和Microsporum gypseum反应最活跃。 SC-1活性摘要茄科茄属植物chrysotrichum复合得到细胞悬架是强而有力的证明了抗真菌药物治疗、对应于高度活跃的天然物质展出的MIC值下降到40ugm -l (Lorimer Alvarezet al. 1993)以及其他植物细胞悬浮培养(Kutsal Fujita et al. 1981)对其他植物物种,这显示那获得最大限度的产物收率的采用最低接种物大小。不同蔗糖浓度的影响(30、 45、60 90g-1),对经济增长和代谢产物的积累进行了研究。 60g-l蔗糖浓度的增加导致增加,生物量浓度有一个减少以最高水平的 90gl-1
11、。产品积累并没有表现出任何区别使用蔗糖水平。这样的结果显示这个合成 SC-1 不是有限的碳源。结论摘要本文报道的数据表明,细胞摘要茄科茄属植物 chrysotrichum养老金培养的生产抗真菌 SC-1 的化合物。累积的 SC-1 达到最大值的后期培养,如果有 2%的接种剂,并与一个完全的 MS 媒介在蔗糖浓度介质 30 - 45gl-1。结果表明,这些体外细胞悬浮培养可以成为一种很有前途的补充,亲相应的抗真菌代谢产物的一种植物已经被人类植物学选择和代表重要的流行的补救措施。这里的信息正在进行的报道被用于 10 公升生物反应器 s.chrysotrichum 细胞的培养,正如我们现有的特定问题的相关调查细胞培养与工业化大规模生产的生产SC-1。图 4。前者的影响大小对增长(A),并 SC-1 积累 (B)的 s . chrysotrichum 细胞悬浮培养:( )2%,( )接种量为 3%,()的 5%。结果提出是SD。致谢作者们希望感谢 Gabriela Rojas 这位细胞悬浮培养的启蒙者; 以及Pilar Nicasio and Miguel Mart nez在高效液相色谱(HPLC)和样品的制备上的技术支持。
