1、环境与手部卫生检验食品学院 11 级食品科学与工程 2 班吴丽娇 周汝 朱浩泽 余昊飞 卢西恩201130600223 201130600228 201130600229 201130600227 201130600220摘 要：微生物多种多样，无处不在。本次试验配制培养基和灭菌，并接种了实验室环境和人体手部表面的微生物，经过 48 的 h 培养，用肉眼观察处在各种环境下的微生物菌落的形态特征。证明了实验室环境和人体手部表面存在多种多样的微生物，让我们意识到“无菌”和灭菌的重要性，建立“无菌概念”和练习掌握一套过硬的“无菌操作技术” 。 关键词：微生物 环境 培养 菌落前 言：我们人体表面和周
2、围环境存在着大量的微生物，特别是在厕所环境中，按照常识，手部在未洗净的情况下会存在大量微生物，厕所中的微生物数量会超过自然环境中的微生物数量，通过培养对其进行初步的观察，可以获得初步的判定。目前应用于微生物检测的技术也层出不穷。例如传统方法、仪器法、免疫学方法、分子生物学方法、生物传感器法等。 1本实验采用传统方法通过琼脂平板培养法从人体手部和厕所的空气中采集样品，然后恒温培养约两天，进行菌落的记数。实验结果表明在我们人体表面和厕所环境中还是有相当部分微生物的。 1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 仪器设备培样皿、三角瓶、试管、烧杯、接种环、酒精灯、记号笔、牛皮纸、灭菌棉签、试管架、废物
3、缸等。1.1.2 试剂药品胰蛋白胨、NaCl、琼脂条、无菌水，NaOH 溶液及 HCl 溶液1.1.3 培养基PCA 琼脂（成分：胰蛋白胨 5.0g；酵母浸膏 2.5g；葡萄糖 1.0g；琼脂 15.0g；蒸馏水 1000mL。pH 7.00.2。 ）1.2 实验方法1.2.1 无菌生理盐水的制备（包括试管无菌水和三角瓶无菌水）用 8.5g 的氯化钠加入 1000ml 的水中配置成浓度为 0.85%的生理盐水，分别装入 250ml 的锥形瓶 90ml（1 瓶）和 25ml 的试管 9ml（10 支） ，盖紧后放入杀菌锅杀菌（121，15min） 、冷却即可。1.2.2 培养基的制备按照上述的配
4、方配制 150ml 的 PCA 培养液于锥形瓶中，杀菌（121，15min）后冷却至 5060备用，取稀释好相应浓度的样液 1ml 注射到培养皿中，然后倒入培养液约为 1520ml（均匀覆盖平板底部约 1cm） ，待平板凝固后即可倒置培养。1.2.3 细菌总数检测1.2.3.1 细菌总数的检测程序菌落总数的检验程序如图 1.实验中称量要准确，稀释时要充分稀释均匀，不产生气泡，取样加样时要准确，使用移液枪和一次性枪头，尽量减少误差，保证结果的准确性 3。检样10g 样品+90ml 生理盐水，混匀10 倍系列稀释选择 23 个适宜样品匀液，各取 1ml 分别加入无菌培养皿每皿加入 1520ml 平
5、板计数琼脂培养基，混匀培养3748h计数各平板菌落总数，计算菌落总数报告图 1 菌落总数的检验程序图1.2.3.2 检测操作步骤a) 手部菌落采样、培养与检测被检人五指并拢，用棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦 10 次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含 10mL 灭菌生理盐水的采样管内送检。样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。此液为 1：10 稀释液。如污染严重，可十倍递增稀释，吸取 1ml 1：10 样液加 9ml 无菌生理盐水中，混匀，此液为 1：100 稀释液。以无菌操作，选择 12 个稀释度取 1ml 样液注入到无菌平皿内，将已融化冷至 45左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，
6、约 15ml，充分混合。待琼脂凝固后，将平皿翻转，置 361 培养 48 h 后计数。结果报告：报告每 25cm2每只手的菌落数。b)环境菌落采样与培养方法打开平皿盖，分别使平板在走廊和实验室桌面的空气中暴露 30min。在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置 371 培养 24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。将已采集样品的培养基在 6 h 内送实验室，细菌总数于 371培养 48h 观察结果，计数平板上细菌菌落数。菌落计算：1) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用 510 倍放大镜检查，不可遗漏。2) 若培养皿上有 2 个或
7、 2 个以上的菌落重叠，可分辨时仍以 2 个或 2 个以上菌落计数。1.2.3.3 菌落计数与报告方法a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用 510 倍放大镜检查，不可遗漏。b) 若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠，可分辨时仍以 2 个或 2 个以上菌落计数。空气细菌落菌数（cfu/m 3） =50000N/AT 公式（奥式）式中： A平板面积，cm 2；T平板暴露时间，min；N平均菌落数，cfu/平皿。50000-系数5 分钟在 100cm2 面积上沉降的细菌数相当于 10L 空气所含的细菌数。2 实验结果与分析2.1 细菌
8、总数检测结果分别对环境与手部的微生物进行检验，得到相应的细菌菌落总数具体结果如表2 所示。表 2 环境与手部微生物检验结果环境 手部菌落总数 /皿 7（桌面） 16 18（脏手）菌落总数 /皿 35（走廊） 2 1（干净手）2.1.2 细菌总数的计算与报告根据细菌落菌数（cfu/cm 3）=50000N/ATA=63.6cm3 ，T=30min 因此最后计算结果如表 3 所示表 3 环境与手部微生物计算结果环境 手部菌落总数 cfu/cm3 183（走廊）419 471（脏手）菌落总数 cfu/cm3 917（桌面） 52.4 26.2(干净手) 3 实验结论与讨论3.1 细菌菌落总数的讨论菌
9、 落 总 数 指 一 定 条 件 下 （ 如 需 氧 情 况 、 营 养 条 件 、 pH、 培 养 温 度 和 时间 等 ） ， 每 g（ mL） 检 样 所 生 长 出 来 的 细 菌 菌 落 总 数 。 按 国 家 标 准 方 法 规 定 ，即 在 需 氧 情 况 下 ， 37 培 养 48h， 能 在 普 通 营 养 琼 脂 平 板 上 生 长 的 细 菌 菌 落总 数 。 菌 落 总 数 并 不 表 示 实 际 中 的 所 有 细 菌 总 数 。 菌 落 总 数 作 为 衡 量 食 品 被细 菌 污 染 的 程 度 以 及 判 断 食 品 卫 生 质 量 的 标 志 之 一 ， 反
10、映 了 食 品 在 生 产 过 程中 是 否 符 合 卫 生 要 求 以 及 食 品 成 品 卫 生 质 量 的 优 劣 。 现 今 ， 国 内 外 菌 落 总数 测 定 方 法 基 本 一 致 ， 只 是 在 某 些 具 体 要 求 方 面 稍 有 差 别 。食品行业经常引用的标准是 GB15979一次性使用卫生用品卫生标准 ：装配与包装车间空气中细菌菌落总数应2500cfu/m 3 ；工作台表面细菌菌落总数应20cfu/cm 2；工人手表面细菌菌落总数应300cfu/只手，从实验数据可以看出如下几点：1）从实验数据可以看出，实验室环境中的细菌菌落总数明显大于食品行业应用的标准，不符合卫生标
11、准；2）手部的菌落总数数据不在合理范围内，也不符合卫生标准。3.2 实验结果分析根据实验的原理和目的，结合实验数据，我们得知，控制环境中细菌的菌落总数存在几个问题：空气的洁净程度，如空气中的粉尘粒子，会加大细菌菌落总数；环境中空气的流速也是一个影响因素，应控制在一定范围内；实验人员的操作熟练度和操作失误也对实验结果存在很大影响。造成空气细菌菌落总数超标的可能原因有：1）实验室空气不洁净，污染大；2）培养时间过长，细菌生长过快，菌落蔓延，无法计数。通过手部微生物检测情况，以及与食品行业相关标准的对比可知，食品接触表面的微生物应进行控制。造成手部细菌菌落总数超标的可能原因有：1）小组成员手部擦洗不
12、完全；2）样品均质处理没使细菌充分和均与得分布到待测液中；3）培养时间过长，细菌生长过快，菌落蔓延，无法计数。从实验数据可以看出，实验室环境中的细菌菌落总数明显大于食品行业应用的标准，不符合卫生标准；手部的菌落总数数据不在合理范围内，也不符合卫生标准。所以在食品生产过程中既要保证生产环境的卫生，生产人员也要做好消毒卫生工作，这样才能保证食品的卫生安全。4 检验报告样品名称 实验室走廊空气及手部收样日期2014.3.12 样品编号0312样品状态描述表面有少量黏液 样品数量10g检验项目 菌落总数 大肠菌群 霉菌和酵母菌数 沙门氏菌志贺氏菌 金黄色葡萄球菌 副溶血性弧菌 溶血性链球菌检验依据 G
13、B4789.2-2010检验环境条件室温 26 检验地点 华农大食品学院 613实验室检验仪器名称、型号及编号数显电热恒温培养箱结果 菌落总数 cfu/cm3 走廊 183 桌面 917 脏手平均 450 干净手平均39.3本实验结果仅对所送样品负责参考文献格式：参考文献为论文时：作者姓名. 论文题目. 期刊名称，发表年,卷（期）：起止页码如： 1 韩路，王海珍，曹新川. 植物化感作用及其在农业生产中的应用. 新疆环境保护，2000, 22（2）：088-092。参考文献为著作时：主编者姓名. 著作名. 出版地：出版社, 出版年,起止页码如：2 黄年来. 中国食用菌百科M. 北京：中国农业出版社, 1993,89-97
