1、ICS 65.020.40B 61 DB23黑 龙 江 省 地 方 标 准红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育技术规程2018 - XX - XX 发布 2018 -XX - XX 实施黑 龙 江 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB23/T XXXX2018DB23/T XXXX2018I前 言本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：黑龙江大学、鹤岗市林木良种繁育基地。本标准主要起草人：宋福强、唐杰、李海涛、庞丽杰、李冲伟、范晓旭、曹振宇、焦宝东、曹胜利、温育鹏、齐贵臣、赵明。 DB23/T XXXX20181红松褐环乳牛肝
2、菌根化苗木培育技术规程1 范围本标准规定了红松（Pinus koraiensis）褐环乳牛肝（Suillus luteus）菌根化苗木培育的菌剂制备、菌根化苗木培育、幼苗管理、苗木出圃和生产档案。本标准适用于红松褐环乳牛肝菌根化苗木培育。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2772 林木种子检验规程GB/T 8321 农药合理使用准则NY/T 883-2004 农用微生物菌剂生产技术规程DB23/T 389-2001 林木育苗技术规程DB21/T 15
3、69-2007 红松果材兼用林育苗技术规程3 菌剂制备3.1 培养基选择3.1.1 MMN 培养基配方氯化钙0.05 g、磷酸二氢钾0.05 g、氯化钠0.05 g、磷酸氢二铵 0.25 g、七水合硫酸镁0.15 g、三氯化铁（1% ）1 ml2 ml、维生素 B110 mg、葡萄糖10 g、蒸馏水 1000 ml、琼脂15 g20 g。3.1.2 麦芽汁液体培养基配方麦芽汁 6 g、酵母粉 6 g、磷酸二氢钾 0.25 g、七水合硫酸镁 0.3 g、氯化钙 0.2 g、三氯化铁 48 mg、柠檬酸 0.1 g、维生素 B1 2 mg、蒸馏水 1000 ml、pH 5.56.5。3.2 培养基
4、制备3.2.1 MMN 培养基烧杯中加入600 ml蒸馏水，按上述配方的顺序分别加入试剂，加热，所有试剂完全溶解后用蒸馏水定容至1000 ml。将培养基分装到试管中，培养基约占试管总体积的1/5 ，封盖，标记培养基的名称及日期，0.1 MPa、121 高压蒸汽灭菌20 min。将灭菌的培养基冷却至50 时将斜面培养基的试管口放置于一定高度的器具上，斜面长度以不超过斜面的1/2 为宜。其余培养基无菌操作倒入培养皿中制作为平板（每个培养皿约25 ml培养基），等培养基凝固后将平板倒置，待用。3.2.2 麦芽汁液体培养基DB23/T XXXX20182烧杯中加入600 ml蒸馏水，按上述配方的顺序分
5、别加入试剂，试剂完全溶解后用蒸馏水定容至1000 ml。调pH 5.56.5。之后将培养基分装到三角瓶中（不超过三角瓶体积的1/2 ），高压灭菌待用。3.3 一级菌种制备将采集到的褐环乳牛肝子实体进行消毒，切取小部分组织块接种至 MMN 固体平板培养基中培养72 h96 h，之后再将平板中新生长的菌丝接种到新的固体培养基中，如此重复 3 次5 次，直至培养基中菌落形态单一，大小相似，颜色相同则认为是单一菌种。之后将最新培养的菌丝接种至斜面培养基中于 28 环境培养至菌丝长满培养基的 2/3 则认为一级菌种制备成功。于 4 环境下保存，保质期不超过 6 个月。3.4 二级菌种制备将一级菌种再进行
6、无菌操作接入到灭菌后的麦芽汁液体培养基中，于 28 、180 rpm 培养 96 h100 h。3.5 三级菌种（菌剂）制备将二级菌种按照 1:100 的比例接种到大型发酵罐中制备菌根菌剂，备用。生产环境及生产流程按照 NY/T883-2004 规定执行。4 菌根化苗木培育4.1 红松种子采收及处理4.1.1 种子采收与检验选择生长旺盛期、无病虫害、品种优良的红松果树作为母株采种。在种子调制过程中应筛去小粒种子。种子质量检验按照 GB 2772 的规定执行。4.1.2 种子处理种子消毒、贮藏及催芽处理按照 DB21/T 1569-2007 有关规定执行。4.2 育苗地准备4.2.1 播种地的选
7、择土壤肥沃，质地疏松、排水良好，pH 值为 5.56.5 的壤土或沙壤土。4.2.2 整地与土壤处理红松育苗整地宜在秋季进行。平整土地，深翻细耙，翻地深度为 30 cm。土壤消毒使用农药应符合 GB/T 8321 的有关规定。4.2.3 作床苗床应南北走向。采用高床育苗，床高 20 cm25 cm，床面宽 110 c m，床长 10 m，床间步道 50 cm。土壤粉碎，床面应平整，镇压。DB23/T XXXX201834.3 播种育苗4.3.1 播种时间宜春播，适时早播，土壤 5cm 深度处地温稳定在 6 8 时播种。播前 1 d2 d 浇透底水，待土壤干湿度适宜时进行播种。4.3.2 播种量
8、应做好种子检验，鉴定优良度和发芽率。红松种子千粒重为 400 g600 g，种子发芽率达 80%，播种量 740 g/m2 为宜。4.3.3 播种方式床面上横向开沟条播，播幅宽 10 cm，间隔 8 cm，沟深 3cm4 cm，在开好的沟中先撒入菌剂，覆一层薄土，再将种粒按规定的距离顺次摆放沟中，耧平。覆土镇压，覆土量应大，可用圃地表土混沙（体积比 1:1）覆盖。镇压。4.3.4 菌剂用量制备的外生菌根菌剂按 1:5 的比例加入清水后使用。每公顷菌剂用量 750 kg 为宜。5 幼苗管理幼苗管理按照 DB23/T 389-2001 的规定执行。6 苗木出圃6.1 菌根侵染率检测随机挖取不同苗床
9、、不同位置的株高和地径已达标苗木 25 株30 株，每株苗木随机取 10 条须根，用体视显微镜检测菌根侵染率。菌根侵染率=（形成菌根根段数/检测总根段数）100%6.2 出圃苗标准达到附录 A 中的级苗标准即可出圃。6.3 苗木分级见附录 A。6.4 包装运输苗木分级过程中随时剔除病伤株，将分级苗分别以苗根的上起点处为准，对齐摆放，捆绑，每捆100 株。苗捆颠倒放入箱体或袋中，高度不超过 5 层，内加含水填充物，装车后及时外运。7 生产档案应建立生产档案，内容包括：立地条件、苗木名称（包括拉丁名） 、种子来源、菌剂名称、菌剂用DB23/T XXXX20184量、栽植时间、栽植方法、栽植数量、生长状况、资金使用情况等。档案专人管理，记录及时准确，负责人审核存档，长期保存。附 录 A（规范性附录）表 A. 红松菌根化苗木出圃苗分级苗木种类 苗龄 级别株高cm地径cm主根长cm5cm 长级侧根数/个菌根侵染率%级 9 0.040 9 8 75播种苗 2-0级 79 0.0300.040 8 7 70级 20 0.050 17 16 80移栽苗 2-2级 1720 0.0400.050 16 13 75
