1、 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB xxxx.xxxxxx2010-发布 1.1.1.1 2010-06-01 实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布xxxx-xx-xx 实施xxxx-xx-xx 发布食品安全国家标准食品中甲醛的测定（征求意见稿）GB xxxx.xxxxxxI前 言本标准代替GB/T 5009.492008 发酵酒及其配制酒卫生标准的分析方法中甲醛的测定方法。本标准与GB/T 5009.492008 中甲醛的测定方法相比，主要修改如下：标准名称修改为食品安全国家标准 食品中甲醛的测定；增加了液相色谱法为第二法；增加了标准的适用范围；修改并完善试样制备
2、步骤；增加了方法的检出限和定量限；增加了附录。GB xxxx.xxxxxx2食品安全国家标准食品中甲醛的测定1 范围本标准规定了食品中甲醛测定的分光光度法和液相色谱法。本标准的第一法和第二法适用于银鱼、面粉、奶粉、奶糖、奶油、乳饮料、腐竹、鱿鱼丝、竹笋、白菜、牛奶、熟肉、发酵酒及配制酒制品等样品中甲醛的测定。第二法除了以上食品外还适用于香菇中甲醛的测定。第一法 分光光度法2 原理样品经水蒸气蒸馏，冷凝收集馏出液。馏出液中的甲醛与乙酰丙酮反应生成黄色物质，于415 nm下测定吸光度值，与标准系列比较定量，得到食品中甲醛的含量。3 试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T
3、6682 规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 冰乙酸（CH 3COOH）：优级纯。3.1.2 乙酰丙酮（C 5H8O2）。3.1.3 无水乙酸铵（CH 3COON H4）。3.1.4 磷酸（H 3PO4）。3.1.5 硫酸（H 2SO4）。3.1.6 氢氧化钠（NaOH ）。3.1.7 可溶性淀粉(C 6H10O5)n。3.1.8 碘（I 2）。3.1.9 硫代硫酸钠（Na 2S2O3）。3.1.10 甲醛溶液（HCHO ）。3.2 试剂配制3.2.1 乙酰丙酮溶液：称取25.0 g无水乙酸铵溶于适量水中，移入 100 mL容量瓶中，加0.4 mL乙酰丙酮和3.0 mL冰乙酸，加水定容至刻度
4、，混匀，移至棕色试剂瓶中，0 4保存，有效期1个月。3.2.2 磷酸溶液（10%）： 量取10 mL磷酸，用水稀释至100 mL，混匀，室温保存。3.2.3 淀粉指示剂（5 g/L）：称取0.5 g可溶性淀粉，加1 mL水，调成糊状，搅匀后缓缓倒入100 mL沸水，调匀，煮沸2 min。临用现配。3.2.4 硫酸溶液（1 mol/L）：量取54mL 硫酸，缓慢注入适量水中，冷却至室温后用水定容至 1000 mL。3.2.5 碘标准滴定溶液（0.1 mol/L）：见GB/T601 的4.9。3.2.6 硫代硫酸钠标准滴定溶液（0.100 mol/L）：见GB/T 601的4.6。GB xxxx.
5、xxxxxx33.2.7 氢氧化钠溶液（1 mol/L）：称取4.0 g氢氧化钠，溶于适量水中，冷却后移入100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。3.3 标准品甲醛（CH 2O，CAS 号为 50-00-0）标准溶液：1000 mg/L，安瓿瓶封装，06保存，使用前恢复至室温，摇匀备用。安瓿瓶打开后应一次性使用完毕。注：甲醛标准溶液也可通过用试剂甲醛配制并标定后使用，具体操作见附录 A。3.4 标准溶液配制甲醛标准工作液（1 mg/L）：准确吸取甲醛标准溶液（1000 mg/L）或经标定的甲醛标准溶液，用水稀释并定容，配制成质量浓度为1 mg/L的甲醛标准工作液。现用现配。4 仪器和设备4
6、.1 分光光度计。4.2 电子天平：感量分别为 0.1 mg 和 1 mg。4.3 水浴锅。4.4 研磨仪4.5 均质器5 分析步骤5.1试样制备固体样品取试样可食部分，进行粉碎和均一化处理，制成匀浆或均匀粉末。液体用均质混合均匀，酒类试样应去除二氧化碳。制备好的试样密闭冷藏或冷冻保存，测定前恢复至室温。5.2 试样提取5.2.1 固体试样称取 5 g10 g（精确至 0.01 g）制备好的试样，置于 500 mL 蒸馏瓶中，加入 10 mL 水和 10 mL 磷酸溶液（10% ），接至水蒸气蒸馏装置中蒸馏，收集馏出液于 200 mL 容量瓶中（容量瓶中预先装有 10 mL水，管子插入液面下，
7、并放在冰浴中），收集近 200 mL，取出，加水定容至刻度，摇匀，备用。同时做空白试验。5.2.2 液体试样准确移取 25 mL 制备好的试样，置于 500 mL 水蒸气蒸馏瓶中，加入 10 mL 磷酸溶液（10%），接至水蒸气蒸馏装置中蒸馏，收集馏出液于 200 mL 容量瓶中（容量瓶中预先装有 10 mL 水，管子插入液面以下，并置于冰浴中），收集约 200 mL，取出，加水定容至刻度，摇匀，备用。同时做空白试验。5.3显色反应准确吸取甲醛标准工作液（1 mg/L）0 mL、0.50 mL 、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL 、8.0 mL、10.0 mL 分别置于 25 mL 带
8、刻度的具塞刻度试管中，加水定容至 10 mL，配制成浓度分别为 0 mg/L、0.05 mg/L、 0.10 mg/L、0.20 mg/L、0.40 mg/L、0.80 mg/L、1.0 mg/L 的甲醛标准系列工作液。准确移取 5.2 制备的馏出液 10 mL 置于 25 mL 带刻度的具塞试管中。向所有的具塞试管中分别加入 1 mL 乙酰丙酮溶液，盖上管塞后，混匀。将具塞试管在沸水浴中放置 5 min，取出冷却至室温，将显示溶液置于 1 cm 比色皿中，以甲醛标准系列工作液的零点为参比调零，于 415 nm 测定吸光度值。GB xxxx.xxxxxx45.4 标准曲线的制作以标准系列工作液
9、的浓度为横坐标，以其吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。6 分析结果的表述试样中甲醛的含量按式（1）计算：（1）式中：X试样中甲醛的含量，单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg 或 mg/L）；由标准曲线得到的试样馏出液中甲醛的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；0由标准曲线得到的空白馏出液中甲醛的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V试样馏出液的定容体积，单位为毫升（mL）；m试样的取样量，单位为克或毫升（ g 或 mL）；1000单位换算系数。计算结果保留两位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8 其他当试样称样量为10 g时，本方法的检出
10、限为1.0 mg/kg，定量限为 3.0 mg/kg。第二法 液相色谱法9 原理在一定温度条件下，试样中的甲醛与衍生剂 2，4-二硝基苯肼（DNPH ）在一定温度条件下，反应生成甲醛 2，4-二硝基苯腙，净化后，经液相色谱分离，二极管阵列检测器或紫外检测器检测，外标法定量。10 试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。10.1 试剂10.1.1 乙腈（CH 3CN）：色谱纯。10.1.2 正己烷（C 6H14）。10.1.3 硫酸铵（(NH 4)2SO4）10.1.4 无水乙酸钠（CH 3COONa）。10.1.5 冰乙酸（CH 3COOH）。10
11、.1.6 2,4-二硝基苯肼（C 6H6N4O4）。10)(mVGB xxxx.xxxxxx510.2 试剂配制10.2.1 乙腈饱和的正己烷溶液：将等体积的乙腈和正己烷充分振荡混匀后，静置分层，取出上层液体备用。10.2.2 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH 5）：称取2.64 g乙酸钠，以适量水溶解，加入1.0 mL冰乙酸，加水定容至500 mL。10.2.3 2,4-二硝基苯肼溶液（ 0.6 g/L）：称取2,4-二硝基苯肼0.3g，用乙腈溶解并定容至500 mL。10.2.4 衍生液：取等体积的乙酸钠-乙酸缓冲溶液（pH5）和2,4-二硝基苯肼溶液（0.6 g/L）混合均匀，备用。10.3
12、标准品同 3.3。10.4 标准溶液配制甲醛标准工作液（50 mg/L）：准确吸取甲醛标准标准溶液（1000 mg/L ）或经标定的甲醛标准溶液，用水稀释并定容，配制成浓度为 50 mg/L 的甲醛标准工作液。现用现配。11 仪器和设备11.1 高效液相色谱仪（或超高效液相色谱仪）：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。11.2 电子天平：感量为分别为 0.1 mg 和 1 mg。11.3 恒温振荡器。11.4 水浴锅。11.5 离心机：转速4000 r/min。11.6 研磨仪11.7 均质器12 分析步骤12.1 试样制备同5.1。12.2 试样提取和净化12.2.1 固体试样12.2.1.1
13、 提取称取 2.00g（精确至 0.01 g）制备好的试样，置于 50 mL 塑料离心管中，准确加入 20 mL 衍生液，盖紧管盖，涡旋混匀，置于 60 恒温振荡器中，180 r/min 振摇，振摇 1 h 后取出冷却至室温。同时做空白试验。12.2.1.2 净化将提取液以不低于 4000 r/min 离心 5 min，如离心后溶液澄清，过 0.22 m的有机相微孔滤膜，供液相色谱测定。若试样中脂肪含量较高，先加入乙腈饱和的正己烷 10 mL，涡旋混匀，4000 r/min 离心 5 min，弃去上层正己烷，取下层溶液过 0.22 m滤膜上机测定。如离心后溶液浑浊，在提取液中加入 8 g 硫酸
14、铵，混GB xxxx.xxxxxx6匀，以不低于 4000 r/min 离心 5 min。转移上清液于 20 mL 于具塞比色管中，下层溶液用 10 mL 乙腈重复萃取一次，离心，合并上清液，用乙腈定容至 20 mL，混匀后，过 0.22 m的有机相微孔滤膜，得到试样溶液，供液相色谱测定。12.2.2 液体试样12.2.2.1 提取吸取 1 mL 制备好的 试样，置于 10 mL 具塞比色管中，加入衍生液定容至 10 mL，盖上塞后，涡旋混匀，60 水浴加热 1 h 后取出冷却至室温。同时做空白试验。12.2.2.2 净化除所用试剂量减半，其它操作按 12.2.1.2 执行。12.3 仪器参考
15、条件12.3.1 色谱柱：C 18柱（柱长250 mm，内径 4.6 mm，粒径5 m），或性能相当的色谱柱。12.3.2 流动相：乙腈-水（50：50， V/V ）。12.3.3 柱温：30 。12.3.4 检测波长：354 nm。12.3.5 流速：1 mL/min。注：若采用超高效液相色谱仪测定，则流速为0.3 mL/min。12.3.6 进样量：20 L。注：若采用超高效液相色谱仪测定，则进样量为5 L。12.4 标准曲线的制作吸取甲醛标准工作液（50 mg/L）0 L、10 L、20 L、100 L、200 L、400 L分别置于10 mL容量瓶中，用衍生液定容至刻度，混匀，配制成浓
16、度分别为0.0 mg/L、0.050 mg/L、0.10 mg/L、0.50 mg/L、 1.0 mg/L、2.0 mg/L的甲醛标准系列工作液，将配置好的标准工作液转移至不同的20ml 具塞试管中，在60 水浴中加热1 h，取出冷却至室温，过0.22 m的有机相微孔滤膜。将标准系列工作液按浓度由低到高依次注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液的液相色谱图参见附录B图B.1。12.5 试样溶液的测定将空白溶液和试样溶液注入液相色谱仪中，得到相应的峰面积，根据标准曲线得到空白溶液和试样溶液中甲醛的浓度。13 分析结果的表述试样
17、中甲醛的含量按式（2）计算：（2）式中：X试样中甲醛的含量，单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg 或 mg/L）；由标准曲线得到的试样溶液中甲醛的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；0由标准曲线得到的空白溶液中甲醛的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V提取液的定容体积，单位为毫升（mL）；m试样的取样量，单位为克或毫升（ g 或 mL）；1000单位换算系数。10)(mVGB xxxx.xxxxxx7计算结果保留两位有效数字。14 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。15 其他本方法甲醛的检出限为0.17 mg/kg，定量限为0.50 mg/kg。G
18、B xxxx.xxxxxx8附录 A 甲醛标准溶液的标定A.1 甲醛标准溶液的配制：吸取2.8 mL甲醛溶液于盛有少量水的1000 mL的容量瓶中，加入0.5 mL硫酸（1 mol/L），加水稀释定容，混匀，05保存。A.2 甲醛标准溶液的标定：吸取10 mL甲醛标准溶液放入碘量瓶中，加90 mL水、加入50 mL碘标准滴定溶液（0.1 mol/L）和20 mL氢氧化钠溶液（1 mol/L） ，摇匀，放置15 min。再加入20 mL硫酸溶液（1mol/L）酸化，用硫代硫酸钠标准滴定溶液（ 0.100 mol/L）滴定至淡黄色，然后加入1 mL淀粉指示剂（5 g/L），继续滴定至蓝色褪去即为终
19、点。同时做试剂空白试验。首次标定后，3个月内无需再次标定。甲醛标准储备液的浓度按公式（B.1）计算： （B.1 ）105)(0cVX式中：X甲醛标准储备液的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；c硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；V0滴定空白溶液消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；V1滴定甲醛溶液消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；150.5 摩尔甲醛的质量，单位为克每摩尔（g/mol）；1000单位换算系数；10滴定时吸取甲醛溶液的体积，单位为毫升（mL）。甲醛衍生物GB xxxx.xxxxxx9附录 B 甲醛标准溶液衍生物的液相色谱图甲醛标准溶液衍生物的液相色谱图见图B.1。图B.1 甲醛标准溶液（1 mg/L）衍生物的液相色谱图甲醛衍生物
