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试剂盒使用说明.doc

上传人:wspkg9802 文档编号:6387831 上传时间:2019-04-10 格式:DOC 页数:19 大小:260KB
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资源描述

1、* 质粒小量提取试剂盒产品说明:本产品采用经典的硅胶膜及碱裂法技术,硅胶膜柱可以在高盐、低 pH 值情况下高效可逆的结合 DNA, 而蛋白及其它杂质不被结合而被除去,被结合的核酸在低盐、高 pH 值情况下可被洗脱出来.该试剂盒具有高效、快速、方便之特点,全套操作只需半个小时便可完成。使用本试剂盒可从 15 ml 的过夜培养的菌液中纯化得到 140g 的高纯度质粒 DNA(OD260/OD280 = 1.82.0),此质粒 DNA 可直接用于 DNA 序列分析以及各种酶促反应等。试剂盒组成:产品编号试剂盒组成GS001-1 GS001-2 GS001-3纯化次数 50 次 100 次 200 次

2、RNaseA(10mg/ml) 150l 300l 600l溶液 15ml 30ml 60ml溶液 15ml 30ml 60ml溶液 20ml 40ml 80ml溶液 PB 30ml 50ml 100ml溶液 W 30ml 230ml 340ml溶液 Eluent 5ml 10ml 20mlDNA 纯化柱 50 个 100 个 200 个溶液 W 初次使用前用无水乙醇按 1:1.5 稀释,即含 60%乙醇。用途:提取用于酶切、转化、测序、PCR 等试验用质粒。保存:初次使用本试剂盒时,请将 RNase A 全部加入到溶液中,均匀混合后 4保存。溶液:室温保存,若出现沉淀,请于 37保温溶解,待

3、恢复至室温后使用。其他试剂:室温保存。操作步骤:1. 用 1.5 ml 离心管收集 1.5-5ml 菌液,12000rpm 离心 60 秒,弃上清。(应根据所培养的菌液的浓度确定收集的菌液量)2. 加入 250l 溶液/RNase A 混合液,漩涡振荡使菌液完全重新悬浮。 (菌液重新悬浮对于获得高产量是非常重要的,为使 RNA 被 RNase A 充分降解,让悬浮菌液静置 1-2 分钟3. 250l 溶液,温和反复颠倒混匀 4-10 次,室温放置 1-2 分钟,以获得澄清的裂解液。(不可剧烈混和,否则会使染色体 DNA 断裂.)4. 加入 350l 溶液,反复颠倒混匀 4-6 次, 12000

4、rpm 离心 10 分钟。5. 将上清置于 DNA 纯化柱中,静置 1-2 分钟。6. 12000rpm 离心 60 秒,弃虑液。 (注:此时 DNA 被吸附于 DNA 纯化柱中的硅胶膜上。)7. 加入 500l 溶液 PB,12000rpm 离心 60 秒,弃虑液。注:目的是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱,得到高质量的 DNA。如果所需的 DNA 质量要求不是很高此步可以省去.8. 加入 500l 溶液 W,12000rpm 离心 60 秒,弃虑液。9. 可选做步骤:重复步骤 8,再用 500ul 溶液 W 洗涤柱子一次.1012000rpm 再次离心 60 秒,甩干剩余液体。主要是去除

5、残余酒精,以利于 DNA 溶解。11. 将 DNA 纯化柱置于新的离心管中,加入适量(50-100l)Eluent(60预热)室温放置 2 分钟12000rpm 离心 60 秒,管底即为质粒 DNA。注:溶液 Eluent 可用无菌双蒸水代替,但其 pH 需为 8.0-8.5,加入体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。60预热,目的是提高产量,温度不需很准,5065均可。* DNA 凝胶回收试剂盒产品说明:本试剂盒所带 DNA 纯化柱,具有在高盐、低 pH 值情况下吸附 DNA, 低盐、高 pH 值情况下释放 DNA 的性质.该试剂盒能从各个等级的琼脂糖凝胶中很好的回收 50bp-40

6、kb 的 DNA 带,回收率高达 85%.目的 DNA 带从凝胶上切下来后,经特定的溶液 BD 处理,可将含目的带的琼脂糖溶解完全,然后转移到一个 DNA 回收纯化柱上,经过溶液 PE 快速的洗涤步骤后,DNA 便可用去离子水(或低盐缓冲液)洗脱出来,回收产物可用于PCR、连接、测序、限制性酶切等应用。该试剂盒还适用于 PCR 产物纯化、酶切产物回收及基因组 DNA 纯化。试剂盒组成:产品编号试剂盒组成GS002-1 GS002-2 GS002-3纯化次数 50 次 100 次 200 次溶液 BD 20ml 40ml 80ml溶液 PE 15ml 215ml 320ml溶液 Eluent 2

7、.5ml 5.0ml 10mlDNA 纯化柱 50 个 100 个 200 个溶液 PE 初次使用前用无水乙醇按 1:4 稀释,即含 80%乙醇。保存条件:室温保存大于 24 个月。产品特点:快速15min 内从凝胶中回收 DNA可靠最适宜的缓冲液系统保证了高纯度的 DNA安全无有机溶液抽提质量纯净的 DNA 适用于多种下游应用可以高效的回收小片段 DNA.操作步骤:1. 通过把切取含 DNA 片段的琼脂糖凝胶装在 1.5ml 小离心管中,称其重量近似地确定其体积,每 100mg琼脂糖凝胶相当于 100l 体积, 称量每次切取含 DNA 片段的琼脂糖凝胶加入等体积的溶液 BD。PCR 产物纯化

8、、酶切产物回收及基因组 DNA 则加入等体积的溶液 BD 混匀,进入步骤 3.2. 55-65水浴 7-10 分钟,直至胶完全融化,期间振荡 3 次,琼脂糖必须完全融化。如果体积大于 500l,可适当增加融胶时间,若此时溶液变红,可加 10l 3M NaAC (pH5.0)。3. 将溶液置于 DNA 纯化柱中,静置 2 分钟,12,000rpm 离心 60 秒,若一次加不完,可分两次离心,弃虑液。4. 加入 500 l 溶液 PE(初次使用前用无水乙醇按 1:4 稀释)于离心柱中 12,000rpm, 离心 60 秒,弃虑液.5. 用溶液 PE(初次使用前用无水乙醇按 1:4 稀释)500 l

9、 再洗一遍,12,000rpm 离心 60 秒。12,000rpm 再次离心 2 分钟,以甩干剩余液体。(注:此步对获得较好的 DNA 产量十分重要)6. 将离心柱置于新的离心管中,加入 60预热的溶液 Eluent 25-35l 于纯化柱中(硅胶膜中央),静置 2 分钟,12,000rpm 离心 60 秒,管底即为回收的 DNA。7. 将 DNA 贮存于-20。* PCR 产物及 DNA 片段纯化试剂盒产品说明:本试剂盒所带 DNA 纯化柱,具有在高盐、低 pH 值情况下吸附 DNA, 低盐、高 pH 值情况下释放 DNA 的性质。该试剂盒能很好的回收 50bp-40kb 的 DNA 片段,

10、 回收率高达 85%. PCR 产物或酶切产物经特定的 BD 溶液处理,然后转移到一个 DNA 回收纯化柱上,经过离心吸附, 然后经溶液 PE 快速的洗涤步骤后,DNA 便可用去离子水(或低盐缓冲液)洗脱出来,回收产物可用于 PCR、连接、测序、限制性酶切等应用。该试剂盒可从PCR 扩增体系、酶切和其它水溶液体系中快速回收纯化 DNA,有效去除 PCR 反应体系中的 dNTPs、引物和聚合酶.该试剂盒可以高效的回收小片段 DNA(50bp、100bp).该试剂盒还可以用于从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段。试剂盒组成:产品编号试剂盒组成GS010-1GS010-2GS010-3纯化次数 50 次

11、 100 次 200 次溶液 BD 20ml 40ml 80ml溶液 PE 15ml 215ml 320ml溶液 Eluent 2.5ml 5.0ml 10mlDNA 纯化柱 50 个 100 个 200 个说明书 1 1 1溶液 PE 初次使用前用无水乙醇按 1:4 稀释,即含 80%乙醇。保存条件:室温保存大于 24 个月。产品特点:快速10min 内从 PCR 产物中回收 DNA可靠最适宜的缓冲液系统保证了高纯度的 DNA安全无有机溶液抽提质量纯净的 DNA 适用于多种下游应用可以高效的回收小片段 DNA(50bp).注意事项:1. 溶液 PE 初次使用前请用无水乙醇按 1:4 稀释,即

12、含 80%乙醇。2. 溶液 Eluent (10 mM Tris/HCl , pH8.5)可用无菌双蒸水代替,但其 pH 需为 8.0-8.5,加入体积视回收DNA 量的多少及用户对浓度要求而定。60预热,目的是提高产量,温度不需很准,50-65均可。 操作步骤:1. 确定 PCR 反应产物体积,将 PCR 产物转移至一个 1.5ml 离心管中,加入等体积的 BD 溶液, 旋涡混匀,然后进入步骤 2.(如果用于从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段则先进行步骤 a 和步骤 b 再进入步骤 2)a. 通过把切取含 DNA 片段的琼脂糖凝胶装在 1.5ml 小离心管中,称其重量近似地确定其体积,每 10

13、0mg 琼脂糖凝胶相当于 100l 体积, 称量每次切取含 DNA 片段的琼脂糖凝胶加入等体积的溶液 BD。b. 55-65水浴 7-10 分钟,直至胶完全融化,期间振荡 3 次,琼脂糖必须完全融化。如果体积大于 500l,可适当增加融胶时间,若此时溶液变红,可加 10l 3M NaAC (pH5.0)。3. 将溶液置于 DNA 纯化柱中,静置 2 分钟,12,000rpm 离心 60 秒.4. 加入 500 l 溶液 PE(初次使用前用无水乙醇按 1:4 稀释)于离心柱中 12,000rpm, 离心 60 秒,弃虑液.5. 用溶液 PE(初次使用前用无水乙醇按 1:4 稀释)500 l 再洗

14、一遍,12,000rpm 离心 60 秒。6. 12,000rpm 再次离心 2 分钟,以甩干剩余液体。(注:此步对获得较好的 DNA 产量十分重要)7. 将离心柱置于一新的离心管中,加入 60预热的 30-100l 溶液 Eluent 于纯化柱中(硅胶膜中央),静置 2 分钟,12,000rpm 离心 60 秒,管底即为回收的 DNA。8. 将 DNA 贮存于-20。 效果图* Gzol Reagent(RNA 提取试剂) CatNo. GS004-1 50ml;CatNo. GS004-2 100ml产品说明TRIzol 是目前最常用的 RNA 提取试剂.采用异硫氰酸胍一步法提取总 RNA

15、 原理,在短时间内提取高质量的总RNA。方便从人、动物、植物和细菌组织提取总 RNA,可同时处理大量样本,提取的 RNA 没有 DNA 和蛋白的污染,可用于 RT-PCR、Northern Blot、Dot blot、Nuclease protection assays、cDNA 合成等下游应用。保存室温下可稳定保存 1 年,为保证试剂质量,建议保存在 2-8的环境下。实验所需试剂但未提供的物品 氯仿 异丙醇 75%乙醇(用 DEPC 处理过的水配制) 无 RNA 酶的水或 0.5% SDS 溶液调配无 RNA 酶的水,将水加入无 RNA 酶的玻璃瓶中,加入 DEPC 至 0.1% (v/v)

16、。放置过夜并高压灭菌。SDS 溶液必须用 DEPC 处理过并经高压灭菌的水配制。预防 RNA 酶污染:在抽提 RNA 过程中任一环节的不正确操作都可能导致 RNA 酶的污染。由于 RNA 酶的活性很难完全抑制,预防其污染是十分必要的。在实际的操作中应遵循以下指南:* 全程佩戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌,可能污染 RNA 的抽提并成为 RNA 酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。 * 使用灭菌的,一次性的塑料器皿和自动吸管抽提 RNA,避免使用公共仪器所导致的 RNA 酶交叉污染。例如,使用 RNA 探针的实验室可能用 RNA 酶 A 或 T1 来降低滤纸上的背景,因而

17、某些非一次性的物品(如自动吸管)可能富含 RNA 酶。* 在 TRIzol 中,RNA 是隔离在 RNA 酶污染之外的。而对样品的后续操作会要求用无 RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在 150C 的烘箱中烘烤 4 小时。塑料器皿可以在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 分钟,用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。RNA 抽提操作步骤注意:用 TRIzol 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外,所有的操作应该在在 1530C 的条件下。实验所需试剂但未提供的物品:* 氯仿* 异丙醇* 75%乙醇(用 DEPC 处理

18、过的水配制) * 无 RNA 酶的水或 0.5% SDS 溶液调配无 RNA 酶的水,将水加入无 RNA 酶的玻璃瓶中,加入 DEPC 至 0.1% (v/v)。放置过夜并高压灭菌。SDS 溶液必须用 DEPC 处理过并经高压灭菌的水配制。1. 匀浆化作用a. 组织用 glass 或强力匀浆器搅匀组织样品,每 50100mg 组织加 1ml 的 TRIzol。匀浆化时组织样品容积不能超过TRIzol 容积的 10%。b. 单层生长的细胞直接往直径 3.5 cm 的培养板中加入 1ml 的 TRIzol 溶解细胞,通过移液管分次移出细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的 T

19、RIzol 量(每 10cm2 加 1ml)。当 TRIzol 量不足时可导致抽提的RNA 中污染有 DNA。c. 悬浮生长的细胞通过离心来沉淀细胞。在 TRIzol 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每 510106 的动 物细胞,植物或酵母菌细胞或每 1107 细菌加 1ml 的 TRIzol。在加入 TRIzol 前应避免洗涤细胞,因为那样会增加 mRNA 降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。可选方案:当样品富含蛋白质,脂肪,多糖或是细胞外物质例如肌肉,脂肪组织和植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在 28C 的条件下以 12,000g 的离心力离心 10

20、 分钟,移除匀浆中不溶解的物质,余下的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量 DNA,而上层的超浮游物含有 RNA。在来自于脂肪组织的样品中,大量的脂肪漂在最上层因而应该除掉。在每一个个案中,将清亮的匀浆溶液转移到一干净的试管中加入氯仿并继续进行下述的分离步骤。2. 分离阶段将匀浆样品在 15 -30C 条件下孵育 5 分钟以使核蛋白体完全分解。每 1ml TRIzol 加 0.2ml 氯仿。盖紧样品管盖,用手用力摇晃试管 15 秒并将其在 30C 下孵育 23 分钟。在 28C 下以不超过 12,000g 的离心力高速冷冻离心 15 分钟。离心后混合物分成三层:下层苯酚-氯仿层,中间层,上

21、层无色的水样层。RNA 无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加 TRIzol 容量的 60%。3. RNA 的沉淀将水样层转移到一干净的试管中,如果希望分离 DNA 和蛋白,有机层同样要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀 RNA。最初均化时的每 1ml TRIzol 对应 0.5ml 异丙醇。将混合的样品在 15 -30C 条件下孵育10 分钟并在 28C 下以不超过 12,000g 的离心力高速冷冻离心 10 分钟。RNA 沉淀在离心前通常不可见,形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。4. RNA 的漂洗移去上层悬液。用 75%的乙醇洗涤 RNA 沉淀一次,每 1ml 的

22、TRIzol 至少加 1ml 的 75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在 28C 下以不超过 7,500g 的离心力高速冷冻离心 5 分钟。5. RNA 的再溶解在操作的最后,简单干燥 RNA 沉淀(空气干燥或真空干燥 510 分钟)不要在真空管里离心干燥 RNA。尤为重要的是,不能让 RNA 沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。 部分溶解的 RNA 样品其 A260/280 比值100l/1107 细胞),充分吹打直至没有细胞团块,取 100l 放入 eppendorf 管中;贴壁细胞消化后处理同上。d体液及其它液体性样本:尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取 1-10ml,3,000rpm

23、离心 2min,留下沉淀及约 100l 上清,充分震荡悬浮沉淀,取 100l 放入 eppendorf 管中;2处理好的样本中,加入 RB1 液 1ml,充分颠倒混匀直至完全溶解,室温放置 5min。3加入氯仿 200l,充分颠倒混匀 1min,成均一的乳糜状,离心 5min。4将上清液小心转移到 RNase-free 的 1.5ml eppendorf 里(离心分层后,可以吸取上层无色液体约为350l,注意不要吸取任何中间层物质)。5加入 RB2 液 350l,充分颠倒混匀 1min。6将混匀后的液体吸入或直接倒入内套管,离心 1min。7弃去外套管中液体,内套管中加入 500 l 洗液,离

24、心 1min。再重复此过程洗一次。8取出内套管,弃去外套管中液体,仍然套回内套管,不加洗液,离心 1min。9将内套管移入新的 eppendorf 管中,在膜中央加入洗脱液(或 pH7.0 的 DEPC 处理水)25-50l,室温静置 1min,离心 1min,获得总 RNA。注意事项1. 重要提示:RB1 具有强烈腐蚀性,操作时要戴手套和防护眼镜,最好在通风柜中进行,若不慎沾染,立即用大量清水冲洗,必要时到门诊处理。2. 离心速度均为 12,000rpm-14,000rpm,室温离心(有条件可 4离心)。以 eppendorf 5417 离心机为例,12,000rpm13,362g,其它类型

25、离心机转速应达到相近的 g 数。3. 首次使用时在洗液瓶中加入 45ml 无污染的分析纯无水乙醇,用后拧紧瓶盖。氯仿自备。4. 避免环境中 RNA 酶污染,操作要戴手套,所有枪头和 eppendorf 管以 DEPC 水处理。5. 血液抽取后应在 4 小时内提取 RNA。冻存的血液 RNA 大部分丢失,不能用于提取。6. 尽量保证在膜中央加入洗脱液 25l-50l,低于 25l 将不能保证充分浸润吸附膜。7. 洗脱液 pH7.0 时会明显降低 RNA 的洗脱效率,而国内实验室用水大多呈偏酸性,自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为 pH7.6。* 基因组 DNA 快速提取试剂盒 适用范围

26、:全血、骨髓、细胞、组织、体液产品简介:本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸,再以特异性结合 DNA 的离心吸附柱吸附 DNA,通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份,然后通过洗脱得到高纯度的基因组 DNA.离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附 DNA,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。本试剂盒可从 1l-200l 全血中提取到 3-35 g DNA.产品特点:简

27、单快速:30 分钟内即可获得超纯的基因组 DNA。超纯高质:获得的 DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物. 保存条件:室温,保质期 2 年。试剂盒组成:产品编号试剂盒组成GS003-1 GS003-2纯化次数 50 次 200 次溶液 XY1 100ml 4100ml溶液 XY2 35ml 270ml漂洗液 WP 30ml 120ml溶液 XY3 15ml 230ml溶液 Eluent 5ml 20ml纯化柱 50 个 200 个注:溶液 XY3 初次使用前用无水乙醇按 1:3 稀释,即含 75%乙醇。注意事项

28、:1. 离心速度均为 12,000rpm-14,000rpm,室温离心。2. 首次使用时在洗液瓶中加入 45ml 无水乙醇。3. 加 XY1 液 100l 后,要漩涡振荡或上下来回颠倒,确保形成均一的细胞悬液,此步骤非常重要,否则此后 DNA 易聚集成团,难以被充分裂解,降低得率。4. 提取微量 DNA 样本时,振荡后静置时间可以延长至 20min,中间振荡数次;5. 样本单次提取的限量是:全血200l,培养细胞2106,组织 10mg。样本裂解物加入内套管中离心1min 结束后,如管中仍有液体,表明样本超量或裂解不完全,导致吸附膜阻塞,应减少样品用量;6. 尽量保证在膜中央加入洗脱液 30-

29、100l,低于 30l 将不能保证吸附膜被充分浸润;室温放置 2min 可以洗脱绝大部分 DNA,如果是要求全部回收(如微量 DNA 提取),则放入 55-60水浴 5min。7. 洗脱液 pH8.0 时会明显降低 DNA 的洗脱效率,而国内实验室用水大多呈偏酸性,自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为 pH8.5(10mM Tris-HCl)。8. 提取的 DNA 可以放在 4或-20保存数周,长期应在-80分装保存,避免反复冻融。操作方案:1. 样本预处理抗凝全血及骨髓:(1)取 1-200l 放入 1.5ml eppendorf 管中,加 1ml 溶液 XY1,漩涡振荡或上下来回颠

30、倒混匀 5-10 次,离心 1min,充分吸弃上清,留下底部细胞团块;(2)再加 500l 溶液 XY1, 漩涡振荡或上下来回颠倒悬浮, 然后 5000rpm, 离心 1 分钟,弃上清,留下底部细胞团块;(3)加 100l 溶液 XY1,漩涡振荡或上下来回颠倒混,确保形成均一的细胞悬浮液;(如果从鸟类、两栖类或更低级的动物中提取基因组 DNA,因其血液中红细胞有核,血液用量勿超过 10 l).培养细胞:悬浮细胞(2106)离心后吸去上清留下细胞团块,加入 XY1 液 100l,漩涡振荡或上下来回颠倒混,确保形成均一的细胞悬液;贴壁细胞倒去培养上清后,加 XY1 液(100l/2106 细胞),

31、静置2min,轻轻晃动形成细胞裂解液,取 100l 放入 eppendorf 管中;组织块:加 XY1 液(100l/10mg 组织)研磨组织,收集悬液 50l-100l 放入 eppendorf 管中(也可采用液氮中捣碎或匀浆的方法);体液及其它液体性样本:尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取 1-10ml,离心 1min,吸弃上清,加入XY1 液 100l,漩涡振荡或上下来回颠倒混,确保形成均一的细胞悬液(细胞密度较大的样本参照培养悬浮细胞处理);痰液用粗头吸管直接吸取约 100l,放入 eppendorf 管中;头发:连毛囊拔取后,剪取近发根处约 5mm,放入 eppendorf 管中;

32、 其它:如咽拭子、血迹斑块、沾染布片、烟头、邮票等,直接剪取可能的痕迹沾染部分(直径1cm),放入 eppendorf 管中,加 XY1 液 100l 浸泡 5min。2. 加入 600l 细胞核裂解液 XY2, 漩涡振荡悬浮沉淀, 室温放置 10 分钟,12000rpm,离心 2 分钟。3. 将上清转移至核酸纯化柱中,室温放置 2 分钟,12000rpm,离心 2 分钟,弃滤液。4. 加 500l 漂洗液 WP 于柱中, 12000rpm,离心 1 分钟,弃滤液。5. 加 500l 溶液 XY3 于柱中, 12000rpm,离心 1 分钟,弃滤液。6. 重复步骤 4。7. 12000rpm

33、再离心 2 分钟,以便去除干乙醇。8. 将纯化柱置于一新 1.5ml 小离心管中, 加 30-100l 溶液 Elutent 于柱中央,室温放置 2 分钟, 12000rpm, 离心 2 分钟, 得到基因组 DNA 溶液。 * 血液基因组 DNA 快速提取试剂盒(离心法)产品简介:本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸,再以特异性结合 DNA 的离心吸附柱吸附 DNA,通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份,然后通过洗脱得到高纯度的血液基因组 DNA.离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附 DNA,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的

34、基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。从 1l-200l 全血中可以提取到 3-35 g DNA.本试剂盒可用于新鲜血液及冷冻血保存液基因组 DNA 的提取.产品特点:简单快速:30 分钟内即可获得超纯的基因组 DNA。超纯高质:获得的 DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物.试剂盒组成:产品编号试剂盒组成GS006-1 GS006-2纯化次数 50 次 200 次红细胞裂解液 RS

35、80ml 480ml裂解液 LS 35ml 265ml漂洗液 PE 15ml 320ml洗脱液 Eluent 5ml 20ml纯化柱 50 个 200 个注:漂洗液 PE 初次使用前用无水乙醇按 1:3 稀释,即含 75%乙醇。操作步骤1. 加 1ml 红细胞裂解液 RS 于 1.5ml 小离心管中,然后加入血液 1-200l 加有抗凝剂的血液,漩涡振荡或上下来回颠倒混匀, 5000rpm, 离心 1 分钟,弃上清.注:如果从鸟类、两栖类或更低级的动物中提取基因组 DNA,因其血液中红细胞有核,血液用量勿超过 10l。2. 加 500l 红细胞裂解液 RS, 漩涡振荡或上下来回颠倒混匀, 50

36、00rpm,离心 1 分钟,弃上清。注:若红细胞溶解不完全,则沉淀物发红,可再加 300l 红细胞裂解液 RS,漩涡振荡混匀,5000rpm, 离心 1 分钟。3. 加入 100l 红细胞裂解液 RS, 完全悬浮沉淀。4. 加入 600l 裂解液 LS, 漩涡振荡或上下来回颠倒混匀后, 室温放置 10-15 分钟。5. 将上清转移至核酸纯化柱中,室温放置 2 分钟,12000rpm,离心 2 分钟,弃滤液。6. 加 500l 漂洗液 PE 于柱中, 12000rpm,离心 1 分钟,弃滤液。7. 重复步骤 6。8. 12000rpm 再离心 2 分钟,以便去除干乙醇。9. 将纯化柱置于一新 1

37、.5ml 小离心管中, 加 30-100l 洗脱液 Eluent 于纯化柱中央, 室温放置 2 分钟, 12,000rpm14,000rpm, 离心 2 分钟, 得到 DNA 溶液。注:洗脱缓冲液体积不应少于 30l,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20,以防 DNA 降解。DNA 浓度及纯度检测得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯

38、度。DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50 g/ml 双链 DNA、40 g/ml 单链 DNA。OD260/OD280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。储存条件:该试剂盒置于室温(15-25)干燥条件下,可保存 24 个月. * 组织基因组 DNA 提取试剂盒(离心法)产品简介:本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸,再以特异性结合 DNA 的离心吸附柱吸附 DNA,通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份,然后通过洗脱得到高纯度的基因组

39、 DNA.离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附 DNA,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。产品特点:简单快速:30 分钟内即可获得超纯的基因组 DNA。超纯高质:获得的 DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物.试剂盒组成:产品编号试剂盒组成GS007-1 GS007-2纯化次数 50 次 20

40、0 次缓冲液 ZS 25ml 100ml裂解液 LS 35ml 270ml漂洗液 PE 15ml 230ml洗脱液 Eluent 5ml 20ml纯化柱 50 个 200 个注:溶液 DZPE 初次使用前用无水乙醇按 1:3 稀释,即含 75%乙醇。组织基因组 DNA 提取操作步骤: 1.将样品研磨成匀浆后(100l 缓冲液 ZS/10mg 组织),取 100l 放入 1.5 ml 离心管中,或用液氮研磨成粉末后取 10mg 放入 1.5 ml 离心管中,加 100l ZS 漩涡振荡混匀,确保形成均一的悬浮液,室温放置 5 分钟。 2.加入 600l 裂解液 LS, 漩涡振荡悬浮沉淀, 室温放

41、置 10 分钟,12000rpm,离心 1 分钟。 3.将上清转移至核酸纯化柱中,室温放置 2 分钟,12000rpm,离心 2 分钟,弃滤液。 4.加 500l 漂洗液 PE 于纯化柱中, 12000rpm,离心 1 分钟,弃滤液。 5.重复步骤 4。 6.12000rpm 再离心 2 分钟,以便去除干乙醇。 7.将纯化柱置于一新 1.5ml 小离心管中, 加 30-100l 洗脱液 Eluent 于纯化柱中央,室温放置 2 分钟.12000rpm,离心 2 分钟,得到 DNA 溶液。注:洗脱缓冲液体积不应少于 30l,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗

42、脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20,以防 DNA 降解。DNA 浓度及纯度检测得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50 g/ml 双链 DNA、40 g/ml 单链 DNA。OD260/OD280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并

43、不表示纯度低。注:所用的组织量不要多于 10mg。储存条件:该试剂盒置于室温(15-25)干燥条件下,可保存 24 个月.* 培养细胞基因组 DNA 提取试剂盒(离心法)产品简介:本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸,再以特异性结合 DNA 的离心吸附柱吸附 DNA,通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份,然后通过洗脱得到高纯度的基因组 DNA.离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附 DNA,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、

44、PCR、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。产品特点:简单快速:30 分钟内即可获得超纯的基因组 DNA。超纯高质:获得的 DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物.试剂盒组成:产品编号试剂盒组成GS008-1 GS008-2纯化次数 50 次 200 次缓冲液 XS 25ml 100ml裂解液 LS 35ml 270ml漂洗液 PE 15ml 230ml洗脱液 Eluent 5ml 20ml纯化柱 50 个 200 个注:溶液 JYPE 初次使用前用无水乙醇按 1:3 稀释,即含 75%乙醇。培

45、养细胞基因组 DNA 提取操作步骤: 1.用 1.5 ml 离心管收集 0.5-1.0ml 菌液,12000rpm 离心 60 秒,弃上清。 2.加 100l 缓冲液 XS, 漩涡振荡或上下来回颠倒混匀,完全悬浮沉淀,室温放置 5 分钟,以便下一步裂解充分。 3.加入 600l 裂解液 LS, 漩涡振荡悬浮沉淀, 室温放置 10 分钟。 4.将上清转移至核酸纯化柱中,室温放置 2 分钟,12000rpm,离心 2 分钟,弃滤液。 5.加 500l 漂洗液 PE 于纯化柱中, 12000rpm,离心 1 分钟,弃滤液。 重复步骤 5。 6.12000rpm 再离心 2 分钟,以便去除干乙醇。 7

46、.将纯化柱置于一新 1.5ml 小离心管中, 加 30-100l 洗脱液 Eluent 于纯化柱中央,室温放置 2 分钟,12000rpm,离心 2 分钟,得到 DNA 溶液。 注:洗脱缓冲液体积不应少于 30l,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20,以防 DNA 降解。DNA 浓度及纯度检测得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

47、DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50 g/ml 双链 DNA、40 g/ml 单链 DNA。OD260/OD280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。储存条件:该试剂盒置于室温(15-25)干燥条件下,可保存 24 个月.* 植物基因组 DNA 快速提取试剂盒(离心法)产品简介:本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸,再以特异性结合 DNA 的离心吸附柱吸附 DNA,通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份,然后通过洗脱得到高纯度的基因组

48、DNA.离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附 DNA,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。从 100mg 植物组织中可以提取到 3-35 g DNA.产品特点:简单快速:30 分钟内即可获得超纯的基因组 DNA。超纯高质:获得的 DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物.试剂盒组成:产品编号试剂盒

49、组成GS009-1 GS009-2纯化次数 50 次 200 次裂解液 PLS 35ml 270ml漂洗液 PE 15ml 230ml洗脱液 Eluent 5ml 20ml纯化柱 50 个 200 个注:溶液 PE 初次使用前用无水乙醇按 1:3 稀释,即含 75%乙醇。植物基因组 DNA 提取操作步骤: 1.将样品研磨成匀浆后(700l 裂解液 PLS/100mg 组织),转移至 1.5 ml 离心管中,或用液氮研磨成粉末后取 100mg 放入 1.5 ml 离心管中,加 700l 裂解液 PLS 漩涡振荡混匀. 2.室温放置 10 分钟,12000rpm,离心 2 分钟。 3.将上清转移至核

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