1、1广西食品安全地方标准 食品中氟虫腈及其代谢物残留量测定 高效液相色谱-串联质谱法编制说明一、工作简况（一）任务来源与项目编号、起草单位、主要起草人本检测方法标准的制订工作，是受广西壮族自治区卫生和计划生育委员会委托，由广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心负责研制，项目编号为 2018004。标准主要起草单位为广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心。主要起草人为：秦富、汪文龙、司露露、吴玉杰、吕春秋、罗兆飞、赵永锋、黄大新、郑玲、蔡翔宇，详见表 1。表 1 参加标准项目人员情况研 制人 员 姓名 性别 年龄 职称 职务 专业 单 位投入时间项 目负责人 秦富 男 31 工程师食品检验研究卫生毒理
2、学广西检验检疫局技术中心整个研究过程汪文龙 男 45 副主任技师 食品室副 主任 卫生检验 广西检验检疫 局技术中心 整个研究过程司露露 女 28 工程师（博士） 食品检验 研究 化学 广西检验检疫 局技术中心 整个研究过程吴玉杰 女 40 研究员 业务部主 任 化学 广西检验检疫 局技术中心 整个研究过程吕春秋 男 48 高级工程师 中心主任 海洋化学 广西检验检疫 局技术中心 整个研究过程罗兆飞 男 38 高级兽医 中心副主 任 基础兽医 广西检验检疫 局技术中心 整个研究过程赵永锋 女 41 高级工程师 食品室副 主任 化学 广西检验检疫 局技术中心 整个研究过程黄大新 男 41 工程师
3、 食品检验 研究 化学工艺 广西检验检疫 局技术中心 整个研究过程郑玲 女 44 高级工程师 食品检验 研究 应用化学 广西检验检疫 局技术中心 整个研究过程主要参加人员蔡翔宇 男 29 工程师 食品检验 研究公共安全与其他社会事业广西检验检疫局技术中心整个研究过程2（二）简要起草过程广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心接受制订任务后，成立由实验室专业技术人员组成的研制小组，全面负责标准的研制计划和工作安排。成员由正高 1 人，副高 5人，博士、工程师 4 人共 10 人组成。制订本标准主要依据中华人民共和国标准化法 ，GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写
4、，GB/T 20001.4-2015标准编写规则 第 4 部分：试验方法标准 和 GB/T 27404-2008实验室质量控制规范 食品理化检测等标准或规范。制标小组为做好标准的制定工作，广泛收集国内外有关的检测技术资料、检测标准、限量指标，以及相关的法律、法规，召开了有关座谈会，听取各方建议。在研制过程中，遵循科学性、实用性和前瞻性等原则，尊重客观规律，融合科学理论和标准化方法。考虑到我国食品卫生标准分析方法应逐步与国际接轨，以及分析方法应有较强的可操作性的要求，确定了标准制定的关键环节，对本项目作了以下主要制订：（1）确定了检测项目为氟虫腈及其代谢物氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈（2）限定了
5、检测方法为高效液相色谱-串联质谱法；（3）根据食品安全法和标准制订的要求，规定检测对象和标准验证范围为卫生部发布的国家实施市场准入管理的 28 大类食品中畜禽肉及副产品、水产品、水果、蔬菜、鲜蛋、粮谷类及豆类等食品。二、与我国、我区有关法律法规和其他标准情况的关系新制地方标准与相关法律、法规及相关标准协调一致，没有冲突。氟虫腈及其代谢物的相关检测方法标准见表 2。第一，新制地方标准的检测项目更全面。新制地方标准不仅对食品中氟虫腈原药残留量进行测定，还对食品中氟虫腈代谢物氟虫腈亚砜、氟虫腈砜和氟甲腈的残留量进行测定，符合 GB 2763-2016 对氟虫腈的定义（定义中包含氟虫腈的代谢物） 。而
6、相关的其他检测标准 SN/T 1982-2007、NY/T 1379-2007 和 SN/T 4039-2014 均只检测食品中的氟虫腈原药残留量。第二，新制地方标准的检测范围更宽。新制地方标准不仅适用于蔬菜、水果、粮谷类食品，还适用于畜禽肉、水产品、内脏、鲜蛋以及茶叶等食品。而即将实施的国家标准 GB 23200.115-2018 及行业标准 SN/T 5094-2018 和 SN/T 5095-2018 均仅适用于禽蛋及蛋制品。第三，新制地方标准的灵敏度、准确度和精密度更优。新制地方标准的灵敏度、准确度和精密度等相关指标不仅满足国家标准 GB/T 27404-2008实验室质量控制规范 食
7、3品理化检测中的规定，同时也满足欧盟指令 SANTE 11945 -2015Guidance document on analytical quality control and method validation procedures for pesticides residues analysis in food and feed中的相关要求。第四，新制地方标准采用优化的 QuEChERS 前处理净化方法，相对于其他国家标准或行业标准采用的固相萃取或液液萃取的前处理净化方法，QuEChERS 方法具有快速、方便、高效、经济和安全等特点。表 2 氟虫腈及其代谢物的相关检测标准序号 标准号及标
8、准名称 检测项目 适用范围 检出限1 SN/T 1982-2007 进出口食品中氟虫腈残留量检测方法 气相色谱-质谱法 氟虫腈菠菜、藕、草莓、花生、鸡肉、猪肉、鳕鱼、蜂蜜、板栗、茶叶和酱油0.002 mg/kg2 NY/T 1379-2007 蔬菜中 334 种农药多残留的测定 气相色谱质谱法和液相色谱质谱法 氟虫腈（气相色谱-质谱法） 蔬菜 0.01 mg/kg3SN/T 4039-2014 出口食品中萘乙酰胺、吡草醚、乙虫腈、氟虫腈农药残留量的测定方法 液相色谱-质谱质谱法氟虫腈 苹果、菠菜、圆葱 0.01 mg/kg4 GB 23200.115-2018 鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留量的测
9、定 液相色谱-质谱联用法 氟虫腈及其代 谢物 鸡蛋 未发布5 SN/T 5094-2018 出口禽蛋及蛋制品中氟虫腈残留量的测定 液相色谱-质谱法 氟虫腈 禽蛋及蛋制品 未发布6SN/T 5095-2018 出口蛋及蛋制品中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱法和气相色谱-质谱/质谱法氟虫腈及其代谢物 蛋及蛋制品 未发布三、与国外、国内有关法律、法规和标准情况的说明国家标准“GB 2763-2016 食品中农药最大残留限量”将氟虫腈残留定义为氟虫腈、氟甲腈（MB46513 ） 、氟虫腈砜（ MB46136）和氟虫腈亚砜（ MB45950）的残留之和，以氟虫腈表示。该标准规定了谷物、油料
10、和油脂、蔬菜、水果、糖料和食用菌 6 类食品的最大残留限量为 0.02 mg/kg (玉米为 0.1 mg/kg 除外 )，并规定了相应的检测方法：谷物、油料和油脂、蔬菜参照 SN/T 1982-2007，水果、糖料和食用菌参照 NY/T 1379-2007。其中 SN/T 1982-2007 采用气相色谱-质谱法，检测范围为菠菜、藕、草莓、花生、鸡肉、猪4肉、鳕鱼、蜂蜜、板栗、茶叶和酱油，检出限为 0.002 mg/kg；NY/T 1379-2007 采用气相色谱-质谱法，检测范围为蔬菜，检出限为 0.01 mg/kg。此外，检验检疫行业标准 SN/T 4039-2014 采用液相色谱-质谱
11、/质谱法，检测范围为苹果、菠菜、圆葱，检出限为 0.01 mg/kg。这 3 个检测标准均没有涉及到检测食品中氟虫腈的 3 种代谢物。由此可见：我国目前仅对谷物、油料和油脂、蔬菜、水果、糖料和食用菌 6 类食品中的氟虫腈残留制定了最高限量，对畜禽产品和水产品均没有相关要求；目前只有检测食品中氟虫腈原药残留量的标准方法，而没有针对食品中氟虫腈代谢物氟甲腈、氟虫腈亚砜和氟虫腈砜的检测标准；现有的 3 个检测方法标准的适用范围较局限。而即将实施的国家标准 GB 23200.115-2018 及行业标准 SN/T 5094-2018 和 SN/T 5095-2018 虽然均对食品中氟虫腈原药及其 3
12、种代谢物残留量进行了测定，但其检测范围均局限于禽蛋及其制品。欧盟法规“动植物源性食品和饲料中农药残留最高限量（EC No3965/2005）”中对氟虫腈的定义同样包含氟虫腈的砜化代谢物即氟甲腈（MB46513） 、氟虫腈砜（MB46136）和氟虫腈亚砜（MB45950 ） 。2014 年 10 月欧盟出台法规(EU) No1127-2014，在 EC No3965/ 2005 规定的基础上对水果、蔬菜、畜禽产品和水产品等食品和饲料中氟虫腈的最高残留量进行了修订，如下：Fruit vegetables, Cereals, Nuts, Seeds, Rhizome, Tea, Coffee, He
13、rbal, Infusions and Cocoa 均为 0.005 mg/kg；Potatoes, Flowering brassica, Leek or Brussels sprouts 均为 0.01 mg/kg; Onions or Shallots 为 0.02 mg/kg；Tropical root and Tuber vegetables 为 0.05 mg/kg。相对于国家限量标准 GB 276-2016，欧盟对氟虫腈的限量要求更加全面和细化，而且相应的检测标准均涉及到氟虫腈及其代谢物的检测。四、标准的制订原则本标准的制定和起草工作遵循统一性、协调性、适用性、一致性和规范性。第
14、一，本标准与现有标准统一协调，无冲突，无重复，优于现有标准。第二，方法确认和验证严谨、全面，适用性强。本标准选择了尖椒、芒果、苹果、大米、牛肉、猪肝、鸡蛋、虾和茶叶作为试样进行方法确认，覆盖了畜禽肉及副产品、水产品、水果、蔬菜、鲜蛋、粮谷类及茶叶等食品。第三，标准不仅按照国家标准 GB/T 27404-2008实验室质量控制规范 食品理化检测中的规定，同时参考欧盟指令 SANTE 11945-2015Guidance document on analytical quality control and method validation procedures for pesticides re
15、sidues analysis in food and feed 中的相关要求进行制定，具有一致性和规范性。五、各项技术内容的验证及说明51 目标化合物的物理和化学性质1.1 氟虫腈的理化性质氟虫腈纯品为白色固体，熔点 200201，相对密度 1.481.63，蒸气压 3.7310-7 Pa (2.810-7 Pa) (20)，溶解度：丙酮 54.6 g/100 mL、二氯甲烷 2.2 g/100 mL、甲醇 13.8 g/100 mL、己烷和甲苯 0.3 g/mL、水 1.9 mg/L，分配系数（正辛醇 /水）为 4.0，在正常贮存条件下稳定。1.2 氟虫腈的应用氟虫腈属于含氟吡唑类广谱性杀
16、虫剂，活性高，应用范围广，对半翅目、缨翅目、鞘翅目、鳞翅目等害虫显示极高敏感性，可用于水稻、棉花、蔬菜、大豆、油菜、烟叶、马铃薯、茶叶、高梁、玉米、果树、森林、公共卫生、畜牧业等。1.3 氟虫腈的毒理作用大鼠急性经口 LD50 为 100 mg/kg，大鼠急性经皮 LD502000 mg/kg，大鼠急性吸入LC50 为 0.682 mg/L，鲤鱼 LC50 为 0.34 mg/L (96 h)，野鸭经口 LD502150 mg/kg，对兔皮肤无刺激性，对眼睛黏膜无刺激性，Ames 试验呈阴性，无致畸作用。1.4 氟虫腈代谢物的理化性质氟虫腈可以通过氧化、水解和光解反应在动植物体内以及自然环境中
17、代谢生成氟甲腈（MB46513 ）、氟虫腈亚砜（ MB45950）和氟虫腈砜（ MB46136），这些代谢物的的理化性质与氟虫腈相似，其毒性与氟虫腈相当或毒性更高。氟虫腈及其代谢物的化学式及分子结构如表 1-1 和图 1 所示，氟虫腈加 1 个氧原子可被氧化成氟虫腈砜，脱掉氧原子可被还原成氟虫腈亚砜，脱掉氧原子和硫原子可被还原成氟甲腈。1.5 氟虫腈及其代谢物的主要危害世界卫生组织将氟虫腈列为“对人类有中度毒性”的化学品，大剂量食用可导致肝功能、甲状腺和肾脏损伤。使用氟虫腈及其代谢物不仅在农作物产品中残留，而且可以通过食物链或环境残留而进入畜禽动物体内，最终威胁人类健康。因此，我国规定于200
18、9 年 10 月 1 日起禁用氟虫腈。欧盟法律规定，氟虫腈不得用于人类食品产业链的畜禽养殖过程。表 1-1 氟虫腈及其代谢物的物理化学性质名称 氟虫腈 氟虫腈砜 氟虫腈亚砜 氟甲腈英文名称 Fipronil Fipronil-sulfone Fipronil-sulfide Fipronil-desulfinylCAS 号 120068-37-3 120068-36-2 120067-83-6 205650-65-3分子式 C12H4Cl2F6N4OS C12H4Cl2F6N4O2S C12H4Cl2F6N4S C12H4Cl2F6N46分子量 437.150 453.150 421.152
19、389.086氟虫腈 氟虫腈砜 氟虫腈亚砜 氟甲腈 图 1 氟虫腈及其代谢物的分子结构2 标准溶液的配制及有效期验证2.1 标准品信息氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准品均购自德国 Dr.Ehrensorfer 公司，氟甲腈标准品购自加拿大 Toronto Research Chemicals（TRC）公司，详细信息见表 2-1。表 2-1 四种标准品信息名称 货号 状态 纯度 剂型剂量 生产公司氟虫腈 DRE-C13645000 粉末 98.76% 250 mg/瓶 Dr.Ehrensorfer氟虫腈砜 DRE-C13645500 粉末 98.23% 250 mg/瓶 Dr.Ehrensorf
20、er氟虫腈亚砜 DRE-C13645400 粉末 99.31% 250 mg/瓶 Dr.Ehrensorfer氟甲腈 CDDM-F342205 粉末 99.00% 10 mg/瓶 TRC2.2 标准溶液的配制由于氟虫腈及其代谢物在不同溶剂中的溶解度不同（丙酮 甲醇 乙腈 水） ，因此标准品储备液用丙酮配制，中间液用甲醇稀释配制，更低浓度的次级中间液用乙腈配制，标准工作液用 1:1 乙腈水溶液稀释配制。2.2.1 标准储备液配制分别称取适量（精确至0.0001 g）的每种标准物质至100 mL棕色容量瓶中，用丙酮溶解配制浓度为100 g/mL的标准储备液，转移至棕色瓶加盖密封，保存于-18冰箱内
21、，有效期为12个月。2.2.2 混合标准中间液配制7分别准确移取适量的氟虫腈、氟虫腈亚砜、氟虫腈砜和氟甲腈标准储备液至100 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释配制成浓度为1 g/mL的混合标准中间液，转移至棕色瓶加盖密封，保存于-18冰箱内，有效期1个月。2.2.3 混合标准工作液配制准确移取适量的混合标准中间液，根据需要用1:1乙腈水配制成适用浓度的混合标准工作液，避光保存于4冰箱内，有效期为24 h。2.3 标准溶液有效期验证分别取适量标准品粉末（对照组） 、储存时间为 12 个月的标准储备液（含单标和混标）和储存时间为 1 个月的标准中间液（含单标和混标） ，分别按“2.2”的方法配制成10
22、 ng/mL 标准工作液，每个组设置 3 个平行。在相同条件下同时进样检测，每组单标和每组混标均检测氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈。分析比较不同储存时间的每种单标同时检测四种化合物的峰面积结果，各组氟虫腈单标溶液不仅检出氟虫腈，还检出氟虫腈砜（约占 0.1%）和氟虫腈亚砜(约占 0.5%)；各组氟虫腈砜单标溶液不仅检出氟虫腈砜，还检出氟虫腈亚砜（约占 0.9%） ；各组氟虫腈亚砜单标溶液均只检出氟虫腈亚砜；各组氟甲腈单标溶液均只检出氟甲腈。该结果提示氟虫腈及其代谢物在正常储存条件下稳定，相互之间的转化不明显，配制成混合标准溶液不影响定量。分析比较不同储存时间的标准混合液检测四种化合物的峰
23、面积结果，如表 2-2 所示：存储 1 个月和 12 个月的各个化合物的峰面积与对照组的峰面积比较，差异均没有统计学意义（p 0.05） 。结果表明氟虫腈及其代谢物可以稳定储存于丙酮、甲醇和乙腈等介质中，高浓度的储备液有效期至少为 1 年，标准中间液有效期至少为 1 个月。表 2-2 不同储存时间的标准混合液检测结果储存时间 对照组 1 个月 12 个月化合物名称 Area 1 Area 2 Area 3 Area 1 Area 2 Area 3 P 值 Area 1 Area 2 Area 3 P 值氟虫腈 31226 28121 31492 29220 31241 34312 0.514
24、28701 28320 30957 0.522氟甲腈 42194 41606 45265 38015 40592 42932 0.240 43010 40682 43077 0.609氟虫腈砜 27069 28003 29848 28442 30952 36404 0.219 28422 29062 31780 0.332氟虫腈亚砜 33728 30865 32833 29401 32634 37067 0.826 31629 30929 33999 0.8293 质谱测定条件3.1 仪器设备8选用超高效液相色谱-串联质谱仪进行测定，仪器型号为 ACQUITY UPLC H-CLASS-XEV
25、O TQ-S Micro，2017 年购自美国 Waters 公司。3.2 质谱参数优化使用 1:1 乙腈水溶液分别配制氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈单标，浓度为100 ng/mL。采用 itellstar 自动优化参数功能，对每一个化合物进行自动优化找到各自最佳的离子对参数。然后再次采用手动优化，对化合物的质谱参数进行逐个优化，最终仪器参数如下：离子源为 ESI 源，负离子模式；扫描方式为多反应监测（MRM） ；Capillary为 3.4 kV； Source Temperature 为 150；Desolvation Temperature 为 500；Cone Gas Flow
26、为 50 L/Hr；Desolvation Gas Flow 为 800 L/Hr。四种化合物的离子对参数和质谱图分别见表 3 和图 3-1， 3.3 质谱参数验证首先，使用 1:1 乙腈水溶液配制浓度分别为 0.10、 0.25、0.5、1.0 和 5.0 ng/mL 的混合标准溶液，待仪器平衡后连续进样，每个浓度进 6 针。结果各个浓度下各个离子对色谱峰的峰形对称，无任何干扰峰。然后，选取苹果、尖椒、大米、茶叶、虾、鸡蛋、牛肉等空白基质进行加标试验，加标浓度为 1 g/kg。结果氟虫腈、氟虫腈砜和氟虫腈亚砜的各个离子对和氟甲腈的定量离子对（387.1/351.1）峰形均较好，响应值也能满足
27、检出限（S/N 10）要求；而氟甲腈的 387.1/282.1 离子对在苹果、尖椒、大米、猪肉等基质中响应较好也无干扰峰，但在鸡蛋和牛肉基质中受基质干扰较大，信噪比小于 3；而387.1/331.0 的峰形较好，无其他干扰峰，其响应值也能满足要求（如图 3-2 所示） 。后来我们发现：将这两种基质的进样液置于 4放置过夜后再次进样，可以消除氟甲腈387.1/282.1 离子对的干扰峰，可能是因为放置过夜后其中的干扰物质变性或沉淀了。但是为了能够在不同样品基质中对氟甲腈准确定性和定量，因此建议氟甲腈同时采集 3 对离子对。表3-1 氟虫腈及其代谢物的监测离子对、碰撞气能量、源内碎裂电压和保留时间
28、分析物 母离子（m/z ） 子离子（ m/z） 锥孔电压(V) 碰撞能(eV) 保留时间(min)氟虫腈 435.0 330.0* 30 12 2.64氟虫腈 435.0 250.0 30 26 2.64氟虫腈砜 451.1 282.1* 30 25 3.06氟虫腈砜 451.1 415.0 30 14 3.06氟虫腈亚砜 419.1 262.1* 30 27 3.07氟虫腈亚砜 419.1 383.1 30 10 3.079氟甲腈 387.1 351.1* 30 10 2.83氟甲腈 387.1 282.1 30 30 2.83氟甲腈 387.1 331.0 30 26 2.83注：“*”为
29、定量子离子。图 3-1 四种化合物的质谱图10图 3-2 鸡蛋（左）和牛肉（右）基质中氟甲腈色谱图（1 g/kg）4 液相色谱条件4.1 色谱柱选择色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 m, 2.1 mm50 mm, Part No: 186002350；柱温: 35。4.2 流动相选择使用1:1乙腈水配制1 ng/mL和10 ng/mL标准混合溶液，每个浓度设置6平行。以乙腈为有机相，0.02%氨水水溶液为水相，泵系统自动灌注10 min，初始流动相平衡30 min后进样。待进样完毕后，以100%乙腈冲洗柱子30 min，然后更换水相为水，泵系统自动灌注10 min，初始
30、流动相平衡 30 min后重复进样。比较分析乙腈 +0.02%氨水水溶液和乙腈+水两组流动相下各检测项目的峰面积，结果以乙腈+水作为流动相时氟虫腈的峰面积明显高于乙腈+0.02%氨水水溶液组，而氟虫腈亚砜、氟甲腈和氟虫腈砜无明显差异，见图4-1。因此本检测方法选择乙腈+ 水作为流动相。11图4-1 不同流动相进样结果比较（A ，1 ng/mL；B，10 ng/mL ）4.3 定容体系优化分别使用1:0、9:1、3:1、1:1、1:3、1:9、0:1乙腈水配制1 ng/mL标准混合溶液，每个定容体系设置6平行。以乙腈为有机相，水为水相，泵系统自动灌注10 min，初始流动相平衡30 min后进样
31、（进样量为5 L）。比较分析不同比例乙腈水作为定容溶液时各检测项目的峰面积，结果如图4-2所示，当定容溶液乙腈水的比例1:1 时，氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈的峰面积无明显差异，当乙腈水比例 50，提示基质效应很强，严重影响定量，需要重新优化样品前处理方法。本研究首先将空白试样按标准前处理方法进行提取、净化后获得空白提取液；用水18配制浓度为 0.5、1.0、2.5、5.0、10 和 20 ng/mL 的标准溶液；然后分别使用空白提取液和乙腈将以上标准溶液稀释 1 倍，即分别获得浓度为 0.25、0.5、1.0、2.5、5.0 和 10.0 ng/mL 的基质标准溶液和溶剂标准溶液；在
32、相同条件下进行检测，最后分别建立基质标准曲线和溶剂标准曲线。要求每种化合物标准曲线的线性相关系数均0.9900，然后计算基质效应 ME。结果显示，氟虫腈及其代谢物在茶叶、大米、鸡蛋、尖椒、芒果、牛肉、苹果、虾和猪肝中的基质效应范围为-21.94.5（见表 6-1 和表 6-2） ，提示个别样品对氟虫腈及其代谢物的基质效应明显。表 6-1 氟虫腈和氟虫腈砜在不同样品中的基质效应氟虫腈 氟虫腈砜样品名称 曲线类型 R2 线性方程 ME R2 线性方程 ME基质 1.0000 y=3012.09 x+60.87 -8.4 0.9999 y=3304.08 x+232.74 -4.9茶叶溶剂 0.99
33、96 y=3289.79 x+334.6 / 0.9996 y=3473.1 x+354.12 /基质 0.9992 y=3347.7 x-287.72 -6.8 0.9997 y=3482.55 x-252.18 -3.4大米溶剂 0.9990 y=3593.19 x+296.51 / 0.9998 y=3606 x+115.08 /基质 0.9995 y=3541.82 x-145.33 0.0 0.9999 y=3460.5 x+169.05 -4.6鸡蛋溶剂 0.9995 y=3540.6 x+213.06 / 1.0000 y=3627.67 x+81.23 /基质 0.9999 y
34、=3986.95 x-237.47 -11.8 0.9997 y=3770.77 x+72.12 -10.6尖椒溶剂 0.9999 y=4521.58 x-211.24 / 0.9999 y=4216.16 x-78.03 /基质 0.9997 y=3842.91 x-99.84 -2.4 0.9995 y=3995.78 x-309.97 3.7芒果溶剂 0.9996 y=3936.18 x+396.09 / 0.9995 y=3854.62 x+325.92 /基质 0.9998 y=3615.57 x-229.63 -13.3 1.0000 y=3592.55 x+19.24 -13.2
35、牛肉溶剂 0.9999 y=4171.48 x-102.65 / 0.9998 y=4141.24 x-121.66 /基质 0.9989 y=3880.96 x-140.26 -10.1 0.9992 y=3605.9 x+67.56 -12.3苹果溶剂 1.0000 y=4318.61 x-53.7 / 1.0000 y=4113.04 x-95.99 /基质 0.9991 y=4029.19 x+133.52 -10.3 0.9998 y=3851.47 x+372.7 -16.7虾溶剂 1.0000 y=4491.44 x+32.12 / 0.9998 y=4624.3 x-281.9
36、6 /基质 0.9988 y=3858.65 x-411.67 -13.0 1.0000 y=3500.46 x+90.69 -18.1猪肝溶剂 0.9998 y=4435.96 x-163.89 / 0.9998 y=4271.96 x-196.53 /表 6-2 氟虫腈亚砜和氟甲腈在不同样品中的基质效应氟虫腈亚砜 氟甲腈样品名称 曲线类型 R2 线性方程 ME R2 线性方程 ME茶叶 基质 0.9998 y=3658.16 x+281.08 -0.4 0.9999 y=5405.05 x+273.79 -3.319溶剂 0.9993 y=3673.22 x+421.9 / 0.9996
37、y=5587.22 x+339.67 /基质 0.9998 y=3577.53 x-213.08 -1.8 0.9995 y=4843.39 x-463.19 -5.9大米溶剂 0.9992 y=3641.68 x+284.77 / 0.9995 y=5147.1 x+461.37 /基质 0.9999 y=3607.25 x+17.57 2.3 0.9998 y=4953.37 x-121.89 -1.9鸡蛋溶剂 0.9992 y=3527.7 x+371.47 / 0.9998 y=5050.19 x+266.32 /基质 0.9991 y=3702.72 x+345.27 -12.3 0
38、.9994 y=5460.32 x+295.49 -15.0尖椒溶剂 1.0000 y=4222.12 x+66.69 / 0.9999 y=6424.69 x+50.29 /基质 0.9998 y=3933.55 x-215.81 4.5 0.9990 y=5716.03 x-562.77 1.1芒果溶剂 0.9991 y=3765.73 x+546.11 / 0.9993 y=5653.02 x+673.22 /基质 1.0000 y=3497.01 x-3.24 -13.9 0.9997 y=5021.18 x-333.28 -14.9牛肉溶剂 0.9999 y=4059.28 x-13
39、2.84 / 0.9999 y=5901.18 x-129.11 /基质 0.9996 y=3415.73 x+181.03 -16.3 0.9983 y=4860.37 x-722.86 -21.9苹果溶剂 1.0000 y=4081.67 x+24.98 / 0.9999 y=6219.72 x+72.4 /基质 0.9997 y=3722.99 x+376.08 -14.5 0.9997 y=5802.82 x+569.63 -13.0虾溶剂 0.9999 y=4356.59 x+154.59 / 0.9999 y=6671.59 x-143.51 /基质 0.9999 y=3375.3
40、 x-158.6 -19.1 0.9965 y=5339.49 x-1122.69 -15.4猪肝溶剂 0.9997 y=4171.05 x-49.29 / 0.9999 y=6310.04 x-249.7 /7 加标回收试验选择尖椒、苹果、芒果、大米、鸡蛋、虾、牛肉、猪肝和茶叶共9种基质进行加标实验分析不同添加水平的回收率和相对标准偏差。依据实验室质量控制规范 食品理化检测(GB/T 27404-2008)标准中附录 F，选择方法检测低限、最高残留限量和一中间浓度点进行三水平加标试验，具体方案如下：尖椒、苹果、芒果试样加标浓度为0.5、2.0和10 g/kg； 大米、鸡蛋、虾、牛肉、猪肝试样
41、加标浓度为1.0、4.0和20 g/kg；茶叶试样加标浓度为2.5、10和50 g/kg 。7.1 样品加标和预处理分别称取尖椒、苹果、芒果试样 10 g 于 50 mL 离心管，按 0.5、1.0、2.0、5.0、10和 20 g/kg 浓度水平 加标，其中 0.5、2.0 和 10 g/kg 浓度分别设置 6 平行，涡旋振荡 1 min 后，静置 20 min。分别称取大米、鸡蛋、虾、牛肉、猪肝试样 5 g 于 50 mL 离心管，按1.0、2.0、4.0、10、20 和 40 g/kg 浓度水平加标，其中 1.0、4.0 和 20 g/kg 浓度分别设置 6 平行，然后各管加入 5 mL
42、 水振荡混合 1 min，静置 20 min，期间振荡 2-3 次，促使肉类、虾和猪肝呈乳糜状。称取茶叶试样 2 g 于 50 mL 离心管，按 2.5、5.0、10、25、50 和 100 g/kg 浓度水平加标，其中 2.5、10 和 50 g/kg 浓度分别设置 6 平行，然后各管加入 8 mL 水振荡混合 1 min，静置 20 min。207.2 试样提取及净化 按标准前处理净化方法。7.3 定量曲线设置用 1:1 乙腈水溶液配制浓度为 0.125、0.25、0.5、1.0 、2.5、5 和 10 ng/mL 的标准工作液，使用溶剂外标法进行定量（低浓度定量用前面 5 个点，中浓度用
43、中间 5 个点，高浓度用后面 5 个点）。7.4 结果分析结果如表7-1 至表7-4 所示，氟虫腈及其代谢物氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈在0.520 g/ kg（尖椒、苹果、芒果）、1.040 g/kg（大米、牛肉、猪肝、虾、鸡蛋）和2.5100 g/ kg（茶叶）各个加标浓度范围内线性相关性良好，R 20.9978。氟虫腈在这9种基质中低、中、高3个加标浓度的回收率为75.5112.6，相对标准偏差为1.513.6；氟虫腈砜在9种基质中低、中、高3个加标浓度的回收率为89.5115.1，相对标准偏差为0.99.0；氟虫腈亚砜在这9种基质中低、中、高3个加标浓度的回收率为92.7112.4，相
44、对标准偏差为0.812.4；氟甲腈在这9种基质中低、中、高3个加标浓度的回收率为70.097.7，相对标准偏差为0.76.6。结果表明本方法检测各类食品中氟虫腈及其代谢物残留量的灵敏度、准确度和精密度均能满足欧盟指令SANTE 11945-2015Guidance document on analytical quality control and method validation procedures for pesticides residues analysis in food and feed的相关要求。表 7-1 不同添加浓度氟虫腈的加标回收率和相对标准偏差0.5a/1b/2.5c
45、 g/kg 2 a/4b/10c g/kg 10a/20b/50c g/kg样品名称 R2 线性方程Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% Rec/% RSD/%茶叶 c 0.9992 y=3055.54 x+317.82 85.1 4.1 81.2 4.0 84.0 2.7大米 b 0.9999 y=3461.81 x+81.02 112.6 2.5 91.7 6.6 98.3 4.1鸡蛋 b 0.9999 y=3801.42 x+96.76 95.2 4.7 94.7 4.2 102.3 1.9尖椒 a 0.9999 y=3951.86 x+109.63 88.9 6.5 88.0
46、 13.6 85.9 6.8芒果 a 0.9994 y=4294.53 x+29.88 109.2 3.5 95.7 7.7 101.7 4.1牛肉 b 0.9985 y=3718.42 x+413.56 86.5 2.8 80.0 2.8 87.0 5.5苹果 a 0.9996 y=4250.52 x+246.09 100.7 5.8 96.5 1.5 97.3 2.7虾 b 0.9978 y=4499.81 x-579.21 75.5 6.6 84.6 4.8 88.3 3.4猪肝 b 1.0000 y=3832.46 x-33.64 89.6 4.5 84.8 2.5 84.5 2.22
47、1表 7-2 不同添加浓度氟虫腈砜的加标回收率和相对标准偏差0.5a/1b/2.5c g/kg 2 a/4b/10c g/kg 10a/20b/50c g/kg样品名称 R2 线性方程Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% Rec/% RSD/%茶叶 c 0.9998 y=4036.79 x+291.45 107.3 3.3 103.9 3.4 99.5 5.0大米 b 0.9997 y=4389.16 x-133.88 113.6 3.3 104.2 0.8 101.6 1.6鸡蛋 b 0.9999 y=4398.62 x+361.43 100.8 3.7 89.5 4.0 94.0
48、 4.4尖椒 a 0.9997 y=4897.35 x-187.34 108.7 3.1 109.2 2.9 109.1 2.7芒果 a 0.9991 y=5039.32 x-34.98 112.1 3.3 107.4 4.9 112.4 3.1牛肉 b 0.9998 y=4361.17 x+291.9 96.5 5.2 90.4 2.5 92.4 2.6苹果 a 0.9998 y=4611.13 x+224.28 102.6 9.0 103.4 3.6 101.6 4.0虾 b 0.9984 y=5355.98 x-490.27 103.9 6.5 101.9 2.5 100.7 2.4猪肝
49、 b 0.9999 y=5000.86 x-184.42 115.1 0.9 108.5 4.8 114.4 3.1表 7-3 不同添加浓度氟虫腈亚砜的加标回收率和相对标准偏差0.5a/1b/2.5c g/kg 2 a/4b/10c g/kg 10a/20b/50c g/kg样品名称 R2 线性方程Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% Rec/% RSD/%茶叶 c 0.9999 y=4065.38 x+243.42 109.9 3.1 103.5 2.7 109.6 2.5大米 b 1.0000 y=3984.62 x-49.16 99.1 3.2 92.7 2.2 94.8 2.6鸡蛋 b 0.9999 y=4055.07 x+150.98 112.1 3.2 107.1 0.8 112.4 2.2尖椒 a 1.0000 y=4382.39 x+35.17 105.8 5.3 96.8 4.2 99.8 3.6芒果 a 0.9995 y=4354.78 x+284.75 95.6 4.3 99.4 1.2 103.3 2.2牛肉 b 0.9998
