1、专题一 基因工程第二节 基因工程的基本操作程序【高考目标定位】基因工程的原理及应用 A【重点】基因工程基本操作程序的四个步骤【难点】1.利用 PCR 技术扩增目的基因2.基因表达载体的构建复习课时： 1 课时一、预习检测（见预学案）二、复习过程：模块一：目的基因的获取模块二：基因表达载体的构建师生互动：1.PCR 扩增过程中设置三种温度的作用分别是什么？2.PCR 扩增与 DNA 复制的区别是什么？3.启动子、终止子以及起始密码子、终止密码子所存在的位置及作用？4.将同一种限制酶切割的质粒与目的基因片段混合，加入 DNA 连接酶，两个 DNA 片段连接产物有几种？例题：1.图为某种质粒表到载体
2、简图，小箭头所指分别为限制性内切酶 EcoRI、BamHI 的酶切位点， ampR 为青霉素抗性基因，tct R 为四环素抗性基因，P 启动子，T 为终止子，ori 为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括 EcoRI、BamHI 在内的多种酶的酶切位点。据图回答：（1）将含有目的基因的 DNA 与质粒分别用 EcoRI 酶切，酶切产物用连接酶进行连接后，其中由两个 DNA 片段之间连接形成的产物有 、 、 。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行 。（2）用上述 3 种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原
3、核宿主细胞所含有的连接产物是 ；（3）在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 。模块三：将目的基因导入受体细胞模块四：目的基因的检测与鉴定师生互动：1.目的基因导入植物、动物、微生物的受体细胞分别选取什么细胞？为什么？ 2.目的基因可以在其他物种细胞内表达出同一种产物的原因?例题：利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。下列各项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是 （ ）A棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因 B大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其 mRNAC山羊乳腺细胞中检测到人生长激素 DNA 序列D酵母菌细胞中
4、提取到人干扰素蛋白课堂检测：1.有关基因工程的叙述正确的是 （ ）A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料2.基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ）A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达3.下列关于基因表达载体的叙述不正确的是 （ ）A启动子是与 RNA 聚合酶识别和结合的部位，是起始密码B启动子和终止子都是特殊结构的 DNA 短片段，对 mRNA 的转录起调控作用C标记基因是为
5、了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选D基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别4.(2008 理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。（1）获得耐盐基因后，构建重组 DNA 分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA 连接酶作用于 处。（填“a”或“b”）（2）将重组 DNA 分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。（3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术的核心是 和 。（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。三、总结提升:四、课后作业：世纪金榜相应练习 P175-177 五、课后预习：基因工程的应用
