1、实验七 pH 对酶活性的影响一、目的要求1. 了解 pH 对酶活性的影响2. 掌握试验 pH 对酶活性影响的原理及方法二、原理酶的活力受环境的 pH 的影响极为显著。通常只在一定的 pH 范围内才表现它的活性。一种酶活性表现最高时的 pH 值为该酶的最适 pH，低于或高于最适pH 时，酶的活性渐次降低。不同酶的最适 pH 不同本实验以枯草杆菌 淀粉酶来说明 pH 对酶活性的影响。三、试剂与器材试剂：l. 0.5 可溶性淀扮溶液，新鲜配制。2. 淀粉酶稀释液。3. 0.2 M 磷酸氢二钠溶液：称取 Na2HPO42H2O 35.51 克，溶于水，定容至 1 00 ml。4. 0.1M 柠檬酸溶液
2、：称取 C6H8O7H2O 21.01 克，溶于水中，定容至 l000 ml。 5碘碘化钾溶液器材：1. 试管及试管架2恒温水浴锅3吸管 10ml 2 支, 5ml 8 支，2 ml 2 支4. 白瓷调色板 l 块四、操作1取 8 支试管，编号，用移液管按下表比例添加 0.2 M 磷酸氢二钠溶液和 0.1 柠檬酸溶液，制备 pH 为 4 .47.2 的缓冲液。试管号码 0.2 M 磷酸氢二钠(ml)0.1 柠檬酸溶液(ml)pH1 4.41 5.59 4.42 4.93 5.07 4.83 5.36 4.64 5.24 5.80 4.20 5.65 6.32 3.68 6.06 6.93 3.
3、07 6.47 7.73 2.27 6.88 8.70 1.30 7.22取 9 支试管，编号，将上述 8 种缓种液分别吸取 3 ml，分别加入相应号的试管中（第 18 号） 。第 9 号试管加 pH 5.6 的缓冲液 3 ml。然后再向各试管添加 0.5 可溶性淀粉溶液 2 ml。将 9 支试管放入 37 恒温水浴中预热 510 分钟。3向第 9 号试管添加 淀粉酶稀释液 2ml，摇匀，仍在 37 温水浴中保温。 1 分钟后，每隔 15 秒钟自第 9 号试管中取出一滴混合液，置白瓷板空穴中，以碘碘化钾溶液试之，检验淀粉水解的程度，待结果呈橙黄色时，取出试管记下酶作用的时间（自加入酶液时开始）
4、 。注意：掌握第 9 号试管的水解程度是本实验成效的关键。4. 以上 l 分钟的间隔，依次向第 l 8 号试管加入。淀粉酶稀释液2ml ，摇匀，并仍在 37 恒温水浴中保温。然后，按紧 9 号管酶作用的时间，依次将各管取出，并立即加入碘碘化钾溶液 2 滴，观察各管呈现的颜色，并说明之。五、思考题： 1. pH 对酶活性影响的机理 2. 掌握试验 pH 对酶活性影响的原理及方法3. 如果要定量测定 pH 对酶活性影响方案如何设计？实验七 酶的激活剂和抑制一、目的要求1. 了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响2. 掌握试验激活剂、抑制剂对酶活性影响的原理与方法二、原理酶的活性常受某些物质的影响，有些物
5、质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。激活剂和抑制剂影响酶作用的需要量很少，常有特异性。本实验以唾液淀粉酶为例，说明氯离子对该酶的激活作用以及铜离子对该酶的抑制作用。三、试剂与器材试剂：l. 0.5 %可溶性淀粉溶液，新鲜配制。2. 1%NaCl 溶液。3. 0.5% CuSO45H2O 溶液。4. 唾液淀粉酶液：实验者先有清水漱口后，取唾液 lml，稀释 100 倍左右。5. 碘一碘化钾溶液。器材：1. 试管及试管架2. 恒温水浴锅3. 吸管 5ml 1 支，lml 4 支四、操作1. 取 3 支试管，编号后各加入 3ml 0.5 可溶性淀粉溶液及 1 ml 稀释唾液1 号试管加 lml 1氯化钠溶液。第 2 号试管加 lml 0.5 硫酸铜溶液，第 3 号试管加 lml 蒸馏水。2. 将上述 3 支试管，放入 37 恒温水浴中保温 1015 分钟后取出（保温时间因唾液淀粉酶活力而异，重做一次，以求明显之结果）。冷却后分别加入 45 滴碘一碘化钾溶液。观察比较三支试管颜色的深浅，并解释之。五、思考题：1. 回忆激活剂与抑制剂的分类。2. 掌握激活剂，抑制剂对酶活性影响的方法。3. 如果定量测定激活剂抑制制对酶活性的影响方案如何制定？
