1、1实验一 显微镜调试使用一、实验名称显微镜调试使用二、实验目的1 清楚普通光学显微镜的结构、原理，熟练掌握其操作方法。2 能够使用显微镜观察微生物的形态、大小等。三、实验内容与实验步骤（一） 显微镜的结构显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置的主要作用是使整个光学系统坚固在一个光轴直线上，而且可精确地调节各光学部件之间的距离，使显微镜能产生清晰的物像。其组成包括：镜座和镜臂；镜筒；物镜转换器；载物台；调焦装置的粗调节器和细调节器。光学系统是显微镜最主要的部分，起分辨和放大目的物的作用。其组成包括：接目镜；接物镜；聚光器；反光镜；光源。显微镜的使用原则是先低倍后高倍，镜检细菌需用油浸接
2、物镜。（二）操作步骤1 观察前的准备(1)显微镜的安置 置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘约 3-4cm。镜检时姿势要端正。取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。切忌用单手提拎；且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图或记录。(2)光源调节 安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度，而使用反光镜采集自然光源或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及使用物镜的放大倍数选用凹面或凸面反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀、亮度适宜。(3)目镜间距调节 根据使用者的个人情况，调节双筒显微镜的目镜，双筒显
3、微镜的目镜间距可以适当调节，而左目镜上一般还配有曲光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的不同观察者。(4)聚光器数值孔径的调节 调节聚光器虹彩光圈与物镜的数值孔径值相符或略低。有些显微镜的聚光器只标有最大数值孔径值，而没有具体的光圈数刻度。使用这种显微镜时可在样品聚焦后取下一目镜，从镜筒中一边看着视野，一边缩放光圈，调整光圈的边缘与物镜边缘相切或略小于其边缘。因为各物镜的数值孔径值不同，所以每转换一次物镜都应该进行这种调节。 在聚光器的数值孔径值确定后，若需改变光照强度，可通过升降聚光器或改变光源的亮度来实现，原则上不应再通过虹彩光圈的调节。当然，有虹彩光圈聚光器高度及照明光圈强度的使
4、用原则也不是固定不变的，只要能获得良好的观察效果，有时也可以根据不同的具体情况灵活运用，不一定拘泥不变。2显微观察在目镜保持不变的情况下，使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下，进行显微观察时应遵循从低倍到高倍再到油镜的观察程序，因为低倍数物镜视野相对大，易发现目标及确定检查的位置。(1)低倍镜观察 将标本玻片置于载物台上，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处在物镜正下方。向下移动 10 倍物镜，使其接近标本，用粗调节器慢慢升起镜筒，使标本在2视野中初步聚焦，再使用细调节器调节到图像清晰。通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部分，找到合适的目的物，仔细观察
5、并记录所观察到的结果。在任何时候使用粗调节器聚焦物像时，必须养成先从侧面注视小心调节物镜靠近标本，然后用目镜观察，慢慢调节物镜离开标本进行准焦的习惯，以免因一时的误操作而损坏镜头及玻片。 (2)高倍镜观察在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节器使物像清晰，利用推进器移动标本仔细观察并记录观察到的结果。在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高
6、、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头及玻片。3显微镜用毕后的处理 (1)上升镜简，取下载玻片。(2)用擦镜纸清洁其他物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件。(3)将各部分还原，反光镜垂直于镜座，将物镜转成“八” 字形，再向下旋。同时把聚光镜降下，以免接物镜与聚光镜发生碰撞。四、实验环境1样品取自实验室运行的活性污泥系统。2仪器或其他用具显微镜、擦镜纸、载玻片、盖玻片、纱布等。五、设计实验数据表格（提示：表格可以相同）样品来源 观察结果提示：可以有几个选择：活性污泥、上清液举例：活性污泥提示：可能观察到：钟虫、草履虫等，可参考书后的
7、图绘画于此处。外观形状：六、 实验过程与分析（提示：此项同学不可雷同）提示：此处同学们一定要用自己的语言说一下实验过程中犯的错误以及解决办法，可选举例中的 1-2 个错误。举例：按上述操作看不到目的物时，可能有两种情况：一是接物镜镜头下降还不到位；二是抬起镜头时速度过快，用力不均，以至眼睛捕捉不住一闪而过的物像。此时，需按上述步骤重新操作。首先是用粗调节器在低倍镜下找到模糊影像，再用细调节器调焦距，使物像清晰，然后旋转回转板，在高倍镜下观察。安装错误。另外，应特别注意不要因在下降镜头时用力过猛，或调焦时误将粗调节器向反方向转动而损坏镜头及载玻片。七、实验结果总结(提示：此项同学不可雷同）实验结
8、果填于上述表格内。1思考题 3(1)什么是物镜的同焦现象?它在显微镜观察中有什么意义?提示：此处同学们一定要用自己的语言说 , 不可雷同。 在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头及玻片。(5)根据你的实验体会，谈谈应如何根据所观察样品的大小，选择不同的物镜进行有效的观察。提示：此处同学们可从自身体会谈谈，比如大则用小倍数物镜，和样品距离可稍大等等。
