1、http:/辛 基 -琼 脂 糖 凝 胶 HP 使 用 说 明货 号 ： S9290规 格 ： 25ml保 存 ： 4 30 保 存 ， 保 质 期 3 年 。产 品 简 介 ：辛 基 -琼 脂 糖 凝 胶 HP 是 将 辛 基 键 合 在 琼 脂 糖 凝 胶 上 形 成 的 一 种 可 利 用 疏 水 相 互 作 用 来实 现 目 标 产 品 纯 化 分 离 的 疏 水 类 介 质 。 用 于 生 物 大 分 子 和 乙 肝 疫 苗 的 纯 化 分 离 。辛 基 -琼 脂 糖 凝 胶 HP为 白 色 球 状 凝 胶 ， 无 嗅 、 无 味 、 无 肉 眼 可 见 杂 质 。理 化 指 标 ：
2、项 目 指 标配 基 R-O-CH2 -CH(OH)-CH2 -O- (CH2 )7 -CH3基 质 交 联 琼 脂 糖形 状 球 形粒 径 2 4 4 4 m蛋 白 质 吸 附 容 量 （ HSA） 1 5 -2 0 mg/ml最 高 流 速 (2 5 ) 最 高 1 0 0 cm/h*耐 压 0 .1 5 MPa工 作 温 度 4 4 0 pH 适 用 范 围 2 1 4 （ 短 时 间 ， 在 位 清 洗 ） ； 3 1 2 （ 长 时 间 ）化 学 稳 定 性 以 下 溶 液 中 稳 定 ：1 mol/L NaOH； 7 0 %EtOH； 3 0 %异 丙 醇 ； 0 .5 %SDS；
3、6 mol/L 盐 酸 胍 ； 8 mol/L 尿 素 ； 3 mol/L(NH4 )2 SO4*柱 子 ： 内 径 50mm、 柱 长 30cm。 柱 床 高 15cm,25 , 流 动 相 为 0.1mol/LNaCl。使 用 说 明 ：辛 基 -琼 脂 糖 凝 胶 HP是 一 种 疏 水 层 析 介 质 ， 利 用 样 品 中 组 分 疏 水 性 的 不 同 进 行 分 离 。 用http:/于 生 物 大 分 子 的 纯 化 分 离 。操 作 流 程 ：1、 装 柱（ 1） 让 所 有 的 材 料 和 试 剂 达 到 室 温 。 配 制 初 始 缓 冲 液 （ 平 衡 液 ） 和 洗
4、脱 缓 冲 液 。（ 2） 根 据 柱 子 大 小 取 所 需 量 的 凝 胶 ， 清 洗 掉 20%乙 醇 ， 抽 干 ， 用 初 始 缓 冲 液 （ 按 凝 胶 ：缓 冲 液 =3： 1 的 比 例 ） 配 成 匀 浆 。（ 3） 将 柱 内 及 柱 子 底 端 用 水 或 缓 冲 液 润 湿 并 保 持 一 小 段 液 位 （ 液 面 略 高 于 滤 膜 ） ， 务 必使 底 端 无 气 泡 。（ 4） 用 玻 璃 棒 引 导 匀 浆 沿 着 柱 内 壁 一 次 性 倒 入 柱 内 ， 注 意 勿 使 产 生 气 泡 。 打 开 柱 子 出液 口 ， 使 凝 胶 在 柱 内 自 由 沉
5、降 ， 连 结 好 柱 子 顶 端 柱 头 。（ 5） 打 开 蠕 动 泵 ， 让 缓 冲 液 用 使 用 时 流 速 的 1.33倍 的 流 速 流 过 ， 使 柱 床 稳 定 。 用 23倍 柱 体 积 的 缓 冲 液 平 衡 柱 子 。2、 平 衡让 平 衡 缓 冲 液 以 一 定 流 速 流 过 柱 子 ， 到 流 出 液 电 导 和 pH 不 变 。 平 衡 缓 冲 液 一 般 是 高 盐浓 度 的 缓 冲 液 ， 如 0.020.05mol/L的 PBS 加 12.5mol/L(NH4)2SO4等 。3、 上 样（ 1） 样 品 用 平 衡 液 配 制 ， 浑 浊 的 样 品 要
6、离 心 和 过 滤 后 上 样 。（ 2） 一 般 情 况 是 让 目 标 产 品 结 合 在 柱 子 上 ， 用 平 衡 液 洗 去 杂 质 ， 再 选 择 一 种 洗 脱 液 洗下 目 标 产 品 。（ 3） 介 质 对 样 品 组 分 吸 附 的 程 度 取 决 于 样 品 的 疏 水 性 质 、 流 动 相 的 离 子 强 度 和 温 度 。盐 浓 度 大 、 温 度 高 或 样 品 组 分 疏 水 性 强 ， 介 质 对 组 分 吸 附 牢 。4、 洗 脱疏 水 介 质 可 用 减 小 盐 浓 度 进 行 洗 脱 。 加 表 面 活 性 剂 或 有 机 溶 剂 可 加 强 洗 脱 。
7、 最 常 用 的 洗脱 液 是 低 盐 浓 度 缓 冲 液 ， 如 0.020.05mol/L的 PBS。5、 再 生http:/一 般 用 低 盐 浓 度 的 缓 冲 液 洗 ， 洗 10 倍 以 上 柱 体 积 ， 接 着 用 结 合 蛋 白 的 平 衡 液 洗 到 平 衡 ，可 再 次 使 用 。若 有 失 活 蛋 白 质 或 脂 类 物 质 在 再 生 时 洗 不 掉 ， 可 用 在 位 清 洗 （ CIP） 除 去 。6、 在 位 清 洗（ 1） 对 于 以 离 子 键 结 合 上 去 的 蛋 白 ， 可 以 用 2M Nacl去 除 。（ 2） 对 沉 淀 蛋 白 、 对 以 疏
8、水 性 结 合 的 蛋 白 或 脂 类 ， 可 用 1M NaOH 去 除 。（ 3） 对 强 疏 水 性 结 合 的 蛋 白 、 脂 类 等 ， 用 410倍 柱 体 积 的 70%乙 醇 或 30%异 丙 醇 清 洗 ，但 要 注 意 有 机 溶 剂 的 浓 度 以 梯 度 的 方 式 逐 渐 增 加 ， 否 则 容 易 产 生 气 泡 。清 洗 完 毕 后 ， 用 至 少 3 倍 缓 冲 液 平 衡 柱 子 。7、 注 意在 装 柱 、 使 用 和 保 存 柱 子 的 时 候 ， 要 避 免 柱 子 流 干 ， 气 泡 进 入 。8、 去 热 源用 0.5M的 氢 氧 化 钠 清 洗 柱
9、 子 56 小 时 或 用 0.1M的 氢 氧 化 钠 24小 时 。 或 用 以 下 方 法 步骤 去 除 ：（ 1） 2倍 柱 体 积 的 70%乙 醇 ；（ 2） 2倍 柱 体 积 50mM Tris-Hcl pH7.5；（ 3） 1倍 柱 体 积 4M尿 素 ；（ 4） 3倍 柱 体 积 的 Tris缓 冲 液 +0.1M Nacl；以 上 缓 冲 液 都 在 无 热 源 的 双 蒸 水 中 配 制 。9、 消 毒用 0.51M NaOH室 温 下 洗 810倍 柱 体 积 ， 初 始 缓 冲 液 平 衡 柱 子 。注 意 事 项 ：产 品 应 密 封 贮 存 在 4 30 （ 保 存 溶 液 为 20% 乙 醇 +0.1M 醋 酸 钠 ） ， 通 风 、 干 燥 、 清 洁的 地 方 。 不 能 冷 冻 。 用 过 的 柱 子 贮 存 在 4 （ 20% 乙 醇 ） 。http:/
