1、大鼠四血管阻断全脑缺血模型探讨作者：blue_snowlotus近年来，利用啮齿类动物复制全脑缺血模型，在缺血性脑损伤的研究中，特别是在海马缺血选择性易损性的研究等方面应用较为广泛。该模型的共同特点是缺血能暂时广泛的影响各个脑区，但病理改变多发生在选择性易损区域，这在治疗药物的开发研究上应用较多。我做的是大鼠四血管阻断法全脑缺血模型，因此在此主要探讨大鼠四血管阻断全脑缺血模型。大鼠四血管阻断全脑缺血模型：即双侧椎动脉和双侧颈总动脉阻断，方法有很多，比较公认的是 Pulsinelli 法，适用于脑缺血的急性和慢性实验研究。该方法需要做两步手术，具体方法是：大鼠 10%水合氯醛（300mg/kg,
2、ip）麻醉后，俯卧位固定，在枕骨后切开皮肤，暴露第一颈椎两侧的翼小孔，用尖端直径为 0.5mm 的电凝器插入翼孔，烧灼双侧的椎动脉，造成永久性闭塞。待动物适应 24h 后，在颈部正中切口，暴露双侧颈总动脉，用动脉夹夹闭阻断，10-15min 后松开动脉夹可恢复血流，进行再灌注实验，以大脑皮层、纹状体和海马缺血最为明显。模型制作的关键步骤是凝断双侧椎动脉，有些大鼠翼孔很小，电凝器根本插不进去，可以用牙科微型小磨钻，将翼孔扩大，直视下用电凝器凝断双侧椎动脉，用磨钻扩大翼孔也要注意，容易损伤椎动脉造成出血。另外，电凝针插入翼孔的角度也要掌握好，向外下（约于大鼠脊柱正中线呈 50 度角）插入翼孔，不然
3、容易损伤脊髓。高血糖可加重脑损伤，增加梗塞面积 1.4 倍，所以做手术前大鼠禁食 12h.还可以防止麻醉过程中呕吐物窒息呼吸道。另外在实验过程中需注意控制脑温，因为脑温每降低 10，大脑代谢率可降低 50。一般控制在 370.3。判断模型成功的标准很多，最客观的指标应该是多普勒血流检测仪，探头安置于右侧顶叶皮质，深度 l mm，监测局部脑血流，一般夹闭颈总动脉后脑血流降低大于 5O 为模型成功。国内多用的指标是脑电图的检测，银制电极固定于前囟后，中线旁 2mm，参考电极可置于对侧对称部位，夹闭颈总动脉 30s 后脑电图即有变化，逐渐变为等电位线，以脑电图变为等电位线为模型成功标准。另外还有行为
4、学上的成功标准：1min 后呼吸加快，动物无反应，意识丧失；翻正反射消失；眼球变白。如采用行为学标准来判断模型是否成功，夹闭双侧颈总动脉时需要大鼠在清醒状态下，故一般在第一步手术时，凝断双侧椎动脉前或后，打开颈部正中切口，分离双侧颈总动脉，穿线备用，缝合切口，24h 后大鼠乙醚麻醉后再迅速打开颈部切口，暴露双侧颈总动脉，待大鼠清醒后用微型动脉夹夹闭双侧颈总动脉造成脑缺血，观察大鼠行为学上改变。动物缺血后，血压上升 2.674.0kPa，伴有换气量增加，体温下降。缺血10min、20min、30min 的大鼠发生惊厥比例分别为 0、8和 20（在 24h 内），或 40（在 72h 内）。为了便
5、于分析结果，一般将发生惊厥的动物剔除。大鼠全脑缺血再灌模型的观察指标，最常用的是在全脑缺血 1030min 后，进行再灌注，然后在第七天观察缺血易损区海马 CA1 和纹状体的病理改变。缺血时间与病理学改变成正相关。缺血 10min 的动物，在第三天易损区海马细胞40出现缺血性改变，但纹状体无损害。缺血 20min 的动物，海马 CA1 有85，纹状体 35，新皮质 3545的细胞出现损害。若缺血 30min，则动物死亡率高，全部海马受损，特别在 CA1 更为明显。纹状体在缺血 24h 损伤最严重，而海马新皮质最严重损伤时间可延长到 72h。一般缺血时间以 1015min为宜，然后再灌注。另附图：翼孔与椎动脉走行关系寰椎翼孔椎动脉
