1、 显微鉴别操作方法（2015 版中国药典）显微鉴别法系指用显微镜对中药药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择具有代表性的供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。一、药材（饮片）显微制片1.横切片或纵切片制片 取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成 1020m 的薄片，必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液 12 滴，盖上盖玻片。必要时滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇试液或稀甘油
2、，盖上盖玻片。2.粉末制片 供试品粉末过四或五号筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。必要时，按上法加热透化。3.表面制片 将供试品湿润软化后，剪取欲观察部位约 4mm2，正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。4.解离组织制片 将供试品切成长约 5mm、直径约 2mm 的段或厚约 1mm的片，如供试品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法，若供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，采用硝铬酸法或氯酸钾法。（1）氢氧化钾法 将供试品置试管中，加 5%氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾
3、去碱液，加水洗涤后，取少量置载玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。（2）硝铬酸法 将供试品置试管中，加硝铬酸试液适量，放置至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。（3）氯酸钾法 将供试品置试管中，加硝酸溶液（12）及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。5.花粉粒与孢子制片 取花粉、花药（或小的花）、孢子或孢子囊群（干燥的供试品浸于冰醋酸中软化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加新配制的醋酐与硫酸（9:1）的混合液 13ml，置水浴上加热2
4、3 分钟，离心，取沉淀，用水洗涤 2 次，取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，或加 50%甘油与 1%苯酚各 12 滴，用品红甘油胶取明胶 1g，加水 6ml，浸泡至溶化，再加甘油 7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红 0.1g，加无水乙醇 600ml及樟油 80ml，溶解）适量，混匀，凝固后即得封藏。6.磨片制片 坚硬的动物、矿物类药，可采用磨片法制片。选取厚度12mm 的供试材料，置粗磨石（或磨砂玻璃板）上，加适量水，用食指、中指夹住或压住材料，在磨石上往返磨砺，待两面磨平，且厚度约数百微米时，将材料移置细磨石上，加水，用软木塞压
5、在材料上，往返磨砺至透明，用水冲洗，再用乙醇处理和甘油乙醇试液装片。二、含饮片粉末的制剂显微制片按供试品不同剂型，散剂、胶囊剂（内容物为颗粒状，应研细），可直接取适量粉末；片剂取 23 片，水丸、糊丸、水蜜丸、锭剂等（包衣者除去包衣），取数丸或 12 锭，分别置乳钵中研成粉末，取适量粉末；蜜丸应将药丸切开，从切面由外至中央挑取适量样品或用水脱蜜后，吸取沉淀物少量。根据观察对象不同，分别按粉末制片法制片（15 片）。三、细胞壁性质的鉴别1.木 质 化 细 胞 壁 加 间 苯 三 酚 试 液 1 2 滴 ， 稍 放 置 ， 加 盐 酸 1滴 ， 因 木 质 化 程 度 不 同 ， 显 红 色 或
6、紫 红 色 。2.木 栓 化 或 角 质 化 细 胞 壁 加 苏 丹 试 液 ， 稍 放 置 或 微 热 ， 显橘 红 色 至 红 色 。3.纤 维 素 细 胞 壁 加 氯 化 锌 碘 试 液 ， 或 先 加 碘 试 液 湿 润 后 ， 稍 放置 ， 再 加 硫 酸 溶 液 （ 33 50） ， 显 蓝 色 或 紫 色 。4.硅 质 化 细 胞 壁 加 硫 酸 无 变 化 。四 、 细 胞 内 含 物 性 质 的 鉴 别1.淀 粉 粒（1 ） 加 碘 试 液 ， 显 蓝 色 或 紫 色 。（2 ） 用 甘 油 醋 酸 试 液 装 片 ， 置 偏 光 显 微 镜 下 观 察 ， 未 糊 化 的
7、淀 粉粒 显 偏 光 现 象 ； 已 糊 化 的 无 偏 光 现 象 。2.糊 粉 粒（ 1） 加 碘 试 液 ， 显 棕 色 或 黄 棕 色 。（ 2） 加 硝 酸 汞 试 液 ， 显 砖 红 色 。 材 料 中 如 含 有 多 量 脂 肪 油 ， 应 先 用乙 醚 或 石 油 醚 脱 脂 后 进 行 试 验 。3.脂 肪 油 、 挥 发 油 、 树 脂（ 1） 加 苏 丹 试 液 ， 显 橘 红 色 、 红 色 或 紫 红 色 。（ 2） 加 90%乙 醇 ， 脂 肪 油 和 树 脂 不 溶 解 （ 蓖 麻 油 及 巴 豆 油 例 外 ） ，挥 发 油 则 溶 解 。4.菊 糖 加 10%
8、 -萘 酚 乙 醇 溶 液 ， 再 加 硫 酸 ， 显 紫 红 色 并 溶 解 。5.黏 液 加 钌 红 试 液 ， 显 红 色 。6.草 酸 钙 结 晶（ 1） 加 稀 醋 酸 不 溶 解 ， 加 稀 盐 酸 溶 解 而 无 气 泡 发 生 。（ 2） 加 硫 酸 溶 液 （ 1 2） 逐 渐 溶 解 ， 片 刻 后 析 出 针 状 硫 酸 钙 结 晶 。7.碳 酸 钙 结 晶 （ 钟 乳 体 ） 加 稀 盐 酸 溶 解 ， 同 时 有 气 泡 发 生 。8.硅 质 加 硫 酸 不 溶 解 。五 、 显 微 测 量系 指 用 目 镜 测 微 尺 ， 在 显 微 镜 下 测 量 细 胞 及 细
9、 胞 内 含 物 等 的 大 小 。1.目 镜 测 微 尺 放 在 目 镜 筒 内 的 一 种 标 尺 ， 为 一 个 直 径18 20mm 的 圆 形 玻 璃 片 ， 中 央 刻 有 精 确 等 距 离 的 平 行 线 刻 度 ， 常 为50 格 或 100 格 （ 图 1） 。2.载 物 台 测 微 尺 在 特 制 的 载 玻 片 中 央 粘 贴 一 刻 有 精 细 尺 度 的 圆 形玻 片 。 通 常 将 长 1mm（ 或 2mm） 精 确 等 分 成 100（ 或 200） 小 格 ， 每1 小 格 长 为 10 m， 用 以 标 定 目 镜 测 微 尺 （ 图 2） 。3.目 镜 测
10、 微 尺 的 标 定 用 以 确 定 使 用 同 一 显 微 镜 及 特 定 倍 数 的 物镜 、 目 镜 和 镜 筒 长 度 时 ， 目 镜 测 微 尺 上 每 一 格 所 代 表 的 长 度 。取 载 物 台 测 微 尺 置 显 微 镜 载 物 台 上 ， 在 高 倍 物 镜 （ 或 低 倍 物 镜 ）下 ， 将 测 微 尺 刻 度 移 至 视 野 中 央 。 将 目 镜 测 微 尺 （ 正 面 向 上 ）放 入 目 镜 镜 筒 内 ， 旋 转 目 镜 ， 并 移 动 载 物 台 测 微 尺 ， 使 目 镜 测 微 尺 的“0”刻 度 线 与 载 物 台 测 微 尺 的 某 刻 度 线 相
11、 重 合 ， 然 后 再 找 第 二 条 重 合刻 度 线 ， 根 据 两 条 重 合 线 间 两 种 测 微 尺 的 小 格 数 ， 计 算 出 目 镜 测 微 尺每 一 小 格 在 该 物 镜 条 件 下 相 当 的 长 度 （ m） ， 如 图 3 所 示 ，目 镜 测 微 尺 77 个 小 格 （ 0 77） 与 载 物 台 测 微 尺 的 30 个 小 格（ 0.7 1.0） 相 当 ， 已 知 载 物 台 测 微 尺 每 一 小 格 的 长 度 为10 m。 目 镜 测 微 尺 每 一 小 格 长 度 为 ： 10 m3077=3.8 m。当 测 定 时 要 用 不 同 的 放 大 倍 数 时 ， 应 分 别 标 定 。4.测 量 方 法 将 需 测 量 的 目 的 物 显 微 制 片 置 显 微 镜 载物 台 上 ， 用 目 镜 测 微 尺 测 量 目 的 物 的 小 格 数 ， 乘 以 上 述 每 一 小 格 的微 米 数 。 通 常 是 在 高 倍 镜 下 测 量 ， 但 欲 测 量 较 长 的 目 的 物 ， 如 纤 维 、导 管 、 非 腺 毛 等 的 长 度 时 ， 需 在 低 倍 镜 下 测 量 。 记 录 最 大 值 与 最 小 值（ m） ， 允 许 有 少 量 数 值 略 高 或 略 低 于 规 定 。
