1、家兔的氨茶碱静脉注射药代动力学研究【实验目的】1、掌握紫外分光光度法测定兔血中氨茶碱2、掌握药动学参数的计算方法【实验原理】氨茶碱,多用于治疗支气管哮喘,为茶碱与乙二胺的复盐。茶碱是主要的药效成分,而乙二胺则能够提高药物的水溶性。由于其治疗窗相对较窄(10-20 微克/ 毫升) ,大约有 75%的患者在血药浓度超过 25 微克/毫升的时候出现中毒反应。因此,加强患者的氨茶碱的血药浓度监控非常必要。茶碱是一种弱酸,所以可以用有机溶剂在酸性条件下将其从血清里面中提取分离,同时血清蛋白变成沉淀。随后,茶碱可以用碱液从有机溶剂中提取分离。茶碱的最大吸收波长是 274nm,然而,空白血清在该波长处也有显
2、著的吸收,所以使用双波长(274nm 和 298nm)紫外分光光度法来测定兔血中的茶碱浓度。【实验步骤】1、参比溶液的标准曲线取茶碱 5.0g 至 10 容量瓶中,用 10ml NaOH 溶液( 0.1mol/L)溶解并定容至刻度制成 500ug/ml 的储备液。分别取 5.0,10.0,15.0,20.0,25.0 和 30.0ul 的储备液加至装有 500ul 空白血清样品的试管中。最终的生物标准校正浓度范围为 5.0-30.0ug/ml。标准样品通过下述的方法进行测定。绘制以A (A 274-A298)为纵坐标,以浓度为横坐标的标准曲线。2、血清中茶碱浓度的测定取 200ul 的盐酸(
3、0.1mol/L)和 5ml 的氯仿-异丙醇(95:5 )加入 500ul 的 血清样品中。混合均匀后,将混合液用离心机(3000r/min)离心 10min。然后,取氯仿层(3.0ml)转移进入另一试管中,再加入 3.0ml 的氢氧化钠(0.1mol/L)混匀。混合液用离心机(3000r/min)离心 10min。取上清液(约 2.5ml)分别在 274nm 和 298nm 处测定其吸光度 A。空白液为 2.0ml 的蒸馏水和 4.0ml 的氢氧化钠(0.1mol/L)混匀制成。血液中的药物浓度使用茶碱标准曲线的线性回归方程进行计算。3、动物实验1)注射给药:氨茶碱(用两倍体积的 5%的葡萄
4、糖溶液稀释)以 15mg/kg 的剂量通过耳缘静脉在 2min 之内缓慢注射入家兔体内。2)血液取样时间:静脉注射氨茶碱后在不同时间点取血(10, 20,30,45, 60,90,120,150,180,和 240min) 。3)血液取样方法:切割家兔耳缘静脉取血(2-3ml) ,放置 20 分钟后,离心机(5000r/min)离心 10min。上清液即为分析用血清样本。【数据处理】1、绘制兔血中的茶碱浓度和A 的标准曲线2、计算血清样品中茶碱浓度3、计算药动学参数【思考题】1、2、参数计算全用 3p97 处理,到时那个软件会自动生成 9 份数据,分别为 1,2,3三室的三种不同算法算出的结果,大家只要选择以 1/c 为权重的那三份进行比较,选择 AIC 最小即最佳隔室模型来作为你们实验的结果即可。软件生成的曲线图截取非常麻烦,并且那个图不美观,所以蔡老师说直接用 EXCEL 来作图即可。3、个人能力有限,可能存在翻译错误,仅供参考,希望大家自己仔细阅读英语原版!O(_)O