肠道菌群在炎症性肠病发病中的作用.pdf

1、15 Wedgwood S ,Black SM. Molecular mechanisms of nitricoxide2induced growth arrest and apoptosis in fetal pulmo2nary arterial smooth muscle cellsJ . Nitric Oxide ,2003 ,9(4) :201.16 Cohen RA ,Adachi T. Nitric2oxide2induced vasodilatation :regulation by physiologic s2glutathiolation and pathologicoxi

2、dation of the sarcoplasmic endoplasmic reticulum calci2um A TPase J . Trends Cardiovasc Med , 2006 , 16 ( 4) :109. 17 Liu B ,Ryer EJ , Kundi R ,et al. Protein kinase C2delta reg2ulates migration and proliferation of vascular smoothmuscle cells through the extracellular signal2regulated ki2nase 1/ 2J

3、 . J Vasc Surg ,2007 ,45 (1) :160.18 Kumar B ,Dreja K , Shah SS , et al. Upregulated TRPC1channel in vascular injury in vivo and its role in humanneointimal hyperplasiaJ . Circ Res ,2006 ,98 (4) :557.19 Takahashi Y ,Watanabe H ,Murakami M ,et al. Upregula2tion of TRPC1 is involved in Angiotensin II2

4、induced vas2cular smooth muscle cell hypertrophyJ . J Mol Cell Car2diol ,2006 ,41 :1039. 20 Sweeney M , Yu Y ,Platoshyn O ,et al. Inhibition of endog2enous TRP1 decreases capacitative Ca2 + entry and attenu2ates pulmonary artery smooth muscle cell proliferationJ . Am J Physiol L ung Cell Mol Physiol

5、 ,2002 ,283 :144.(收 稿 日 期 :2008212213) 综 述 肠 道 菌 群 在 炎 症 性 肠 病 发 病 中 的 作 用刘 重 阳 综 述 ,陈 东 风 审 校(第 三 军 医 大 学 大 坪 医 院 消 化 科 ,重 庆 400042)关 键 词 :肠 道 菌 群 ;炎 症 性 肠 病 ;微 生 态 制 剂中 图 分 类 号 :R574 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :167128348 (2009) 1021251203炎 症 性 肠 病 ( IBD) 包 括 溃 疡 性 结 肠 炎 ( UC) 和 克 罗 恩 病(CD) ,是 一 类 病 因 和

6、发 病 机 制 尚 不 十 分 清 楚 的 肠 道 炎 症 性 疾病 。 现 在 普 遍 认 为 IBD 发 病 机 制 涉 及 遗 传 易 感 性 、 环 境 因 素 、免 疫 异 常 、 肠 道 菌 群 改 变 等 多 个 方 面 ,其 中 肠 道 菌 群 与 IBD 的发 生 发 展 关 系 密 切 ,为 目 前 研 究 热 点 之 一 。 研 究 显 示 ,人 体 肠道 内 数 量 巨 大 的 细 菌 影 响 肠 黏 膜 免 疫 系 统 功 能 ,诱 发 具 有 IBD遗 传 易 感 性 个 体 的 肠 道 产 生 异 常 免 疫 反 应 ,导 致 IBD 发 病 。1 肠 道 菌 群

7、 的 种 类 及 分 布生 理 状 态 下 ,正 常 成 人 肠 道 内 含 有 近 500 种 细 菌 ,主 要 定植 在 结 肠 和 末 端 小 肠 ,主 要 是 由 厌 氧 菌 、 兼 性 厌 氧 菌 和 需 氧 菌组 成 。 肠 道 的 菌 群 主 要 分 为 三 大 类 :第 一 类 为 与 人 体 共 生 的 生理 性 细 菌 ,为 厌 氧 菌 ,是 肠 道 的 优 势 菌 群 ,如 :双 歧 杆 菌 、 类 杆 菌和 消 化 球 菌 ,这 类 细 菌 具 有 营 养 及 免 疫 调 节 作 用 ,为 人 体 所 必需 ;第 二 类 为 与 人 体 共 栖 的 条 件 致 病 菌

8、,以 兼 性 需 氧 菌 为 主 ,为肠 道 非 优 势 菌 群 ,如 肠 球 菌 与 肠 杆 菌 ,当 肠 道 菌 群 紊 乱 / 平 衡 失调 时 ,对 人 体 有 害 ;第 三 类 是 病 原 菌 ,多 数 为 过 路 菌 ,长 期 定 植的 机 会 少 ,当 体 内 菌 群 平 衡 时 ,即 便 存 在 ,由 于 数 量 少 ,也 不 会致 病 ,一 旦 数 量 超 出 正 常 范 围 则 致 病 ,如 :变 形 杆 菌 和 假 单 胞菌 。 在 上 段 小 肠 中 ,需 氧 菌 及 G- 细 菌 占 绝 大 多 数 ,回 盲 部 细菌 密 集 ,厌 氧 菌 占 优 势 ,如 类 杆

9、菌 、 双 歧 杆 菌 、 真 菌 、 乳 酸 菌 及 梭状 芽 苞 杆 菌 。 结 肠 中 厌 氧 菌 的 数 量 更 多 ,约 1011 1014 cfu/ g肠 内 容 物 ,优 势 菌 为 类 杆 菌 、 双 歧 杆 菌 和 真 菌 。 另 外 , G- 球 菌 、梭 状 芽 苞 杆 菌 、 肠 球 菌 、 肠 杆 菌 等 也 常 见 于 结 肠 中 1 。 盲 肠 腔内 的 细 菌 约 25 %为 兼 性 厌 氧 菌 ,尤 其 是 肠 杆 菌 属 ,这 种 细 菌 在粪 便 中 约 占 1 %2 。2 IBD 与 肠 道 菌 群肠 道 菌 群 与 IBD 的 关 系 是 近 年 的

10、研 究 热 点 。 实 验 性 结 肠炎 动 物 模 型 均 是 在 有 肠 道 细 菌 时 发 生 的 ,转 基 因 或 敲 除 基 因 方法 造 成 免 疫 缺 陷 的 IBD 动 物 模 型 ,在 肠 道 无 菌 环 境 下 不 会 发生 肠 道 炎 症 ,但 如 重 新 恢 复 肠 道 正 常 菌 群 状 态 ,则 可 出 现 肠 道炎 症 ,提 示 肠 道 菌 群 成 分 的 存 在 对 IBD 发 病 是 不 可 或 缺的 324 。有 研 究 采 用 粪 便 培 养 、 细 菌 分 离 技 术 发 现 CD、 UC 和 袋 囊炎 患 者 厌 氧 菌 浓 度 增 加 ,而 对 照

11、组 不 增 加 。 还 有 研 究 发 现 CD患 者 Ecoli 数 量 增 加 ,而 CD、 UC 和 袋 囊 炎 患 者 肠 道 益 生 菌 数量 明 显 减 少 。 Linskens 等 5 发 现 在 CD 患 者 的 粪 便 菌 中 ,真 杆菌 和 消 化 球 菌 数 量 增 多 ,而 双 歧 杆 菌 数 量 减 少 。 在 溃 疡 性 结 肠炎 患 者 中 ,兼 性 厌 氧 菌 数 量 增 加 。 Seksik 等 6 发 现 CD 患 者 粪便 标 本 中 细 菌 浓 度 明 显 高 于 正 常 对 照 组 ,且 超 过 30 %属 未 定型 菌 种 。 Ohkusa 等 7

12、从 UC 患 者 分 离 并 培 养 出 变 形 梭 状 杆菌 ,上 清 液 具 有 细 胞 毒 性 ,用 含 有 变 形 梭 状 杆 菌 的 上 清 液 给 小鼠 灌 肠 ,小 鼠 发 生 类 似 人 类 UC 样 改 变 。 在 小 鼠 DSS 模 型 也发 现 拟 杆 菌 和 梭 状 芽 胞 杆 菌 的 增 多 ,提 示 肠 道 菌 群 很 可 能 参 与小 鼠 DSS 结 肠 炎 的 发 病 8 。黏 附 侵 袭 性 大 肠 杆 菌 (adherent2invasive escherichia coli ,A IEC)为 目 前 该 领 域 研 究 中 较 受 关 注 的 肠 道 细

13、菌 之 一 ,被 认 为与 IBD 的 发 生 密 切 相 关 。 CD 患 者 回 肠 末 端 黏 膜 AIEC 浓 度 较高 ,且 多 见 于 术 后 早 期 复 发 灶 9 ;CD 患 者 肉 芽 肿 细 菌 DNA 中A IEC 阳 性 率 高 达 80 %10 。 此 外 螺 杆 菌 家 族 成 员 也 被 怀 疑 可能 与 IBD 的 发 病 有 关 。 检 测 IBD 患 者 肠 黏 膜 活 检 标 本 的 研 究显 示 肠 肝 螺 杆 菌 DNA 阳 性 率 为 14 % ,而 对 照 组 仅 为 4 %11 。另 一 项 研 究 也 表 明 IBD 组 肠 肝 螺 杆 菌 阳

14、 性 率 为 92 % ,显 著 高于 对 照 组 的 25 %12 。现 有 研 究 认 为 共 生 菌 群 与 宿 主 防 御 反 应 之 间 的 动 态 平 衡在 慢 性 IBD 的 初 期 和 进 程 中 起 关 键 作 用 。 正 常 肠 黏 膜 免 疫 系统 对 肠 道 内 正 常 菌 群 处 于 免 疫 耐 受 状 态 ,肠 道 菌 群 失 调 时 ,肠道 免 疫 系 统 对 肠 道 内 已 发 生 变 化 的 菌 群 不 能 耐 受 。 Duchmann等 13 研 究 组 做 了 一 个 有 趣 的 实 验 ,收 集 活 动 性 IBD 患 者 炎 症肠 段 的 黏 膜 固

15、有 层 单 个 核 细 胞 (L PMC) ,在 体 外 将 L PMC 与 自身 肠 道 内 细 菌 裂 解 液 共 育 后 ,L PMC 发 生 强 烈 的 增 殖 反 应 ,IL22、 IFN2 、 IL210 等 细 胞 因 子 大 量 分 泌 ,而 健 康 者 L PMC 对 自 身肠 菌 裂 解 液 不 发 生 增 殖 反 应 ,说 明 健 康 人 对 自 身 的 肠 菌 存 在 耐1521重 庆 医 学 2009 年 5 月 第 38 卷 第 10 期受 ,IBD 患 者 的 这 种 耐 受 打 破 。肠 道 菌 群 对 肠 道 通 透 性 改 变 的 影 响 也 引 起 了 人

16、 们 的 注 意 。一 些 条 件 致 病 菌 增 加 能 够 损 害 肠 黏 膜 屏 障 ,使 肠 腔 内 细 菌 及 其产 物 等 抗 原 移 位 至 肠 黏 膜 固 有 层 ,激 活 黏 膜 免 疫 ,使 肠 道 黏 膜免 疫 系 统 失 去 对 肠 腔 内 抗 原 的 免 疫 耐 受 ,从 而 诱 发 IBD 发 病 。Madsen 等 14 探 讨 了 先 天 性 IL210 缺 陷 小 鼠 肠 道 通 透 性 增 高 与肠 道 炎 症 的 关 系 ,在 有 菌 环 境 中 的 基 因 缺 陷 小 鼠 2 周 龄 时 肠 道尚 未 有 损 伤 表 现 ,肠 道 通 透 性 即 有 增

17、 高 ,且 肠 黏 膜 内 TN F2 、IFN2 的 浓 度 也 开 始 增 高 ,肠 道 通 透 性 增 高 与 这 两 种 细 胞 因 子浓 度 相 平 行 。 而 置 于 无 菌 环 境 中 的 基 因 缺 陷 小 鼠 肠 道 通 透 性正 常 , TN F2 、 IFN2 浓 度 也 正 常 。 提 示 先 天 性 IL210 缺 陷 的 小鼠 对 肠 道 菌 群 的 黏 膜 免 疫 反 应 先 于 肠 道 炎 症 反 应 发 生 异 常 ,进而 导 致 肠 道 通 透 性 增 加 。3 微 生 态 制 剂 治 疗 IBD近 年 来 ,通 过 使 用 微 生 态 制 剂 来 调 节

18、肠 道 菌 群 治 疗 IBD的 各 种 新 尝 试 取 得 了 可 喜 的 进 展 15217 。 微 生 态 制 剂 包 括 益 生菌 (prohiotics) 和 益 生 元 (prebiotics) ,益 生 菌 (probiotics) 是 指乳 杆 菌 、 双 歧 杆 菌 等 有 益 于 肠 道 健 康 的 活 菌 类 ;益 生 元 (prebi2otics)指 可 选 择 性 刺 激 结 肠 内 一 种 或 若 干 种 细 菌 生 长 和 活 动 、有 益 于 健 康 的 非 消 化 性 食 物 成 分 ,如 菊 粉 、 乳 果 糖 等 。 合 生 元(synbiotics)制

19、剂 是 益 生 菌 与 益 生 元 的 混 合 制 剂 ,或 加 入 维 生素 、 微 量 元 素 等 。 既 可 发 挥 益 生 菌 的 生 理 性 细 菌 活 性 ,又 可 选择 性 地 增 加 这 种 菌 种 的 数 量 ,使 益 生 菌 作 用 更 显 著 持 久 。 Kato等 18 观 察 微 生 态 制 剂 治 疗 10 例 活 动 期 UC 患 者 ,UCDA I 与安 慰 剂 组 比 较 明 显 下 降 。 Madsen19 尝 试 应 用 以 双 歧 杆 菌 为 主的 3 种 活 菌 的 微 生 态 制 剂 治 疗 UC 患 者 ,其 作 用 也 得 到 了 肯定 。 Gu

20、slandi 等 20 使 用 酵 母 菌 治 疗 UC ,对 于 激 素 治 疗 无 效 的患 者 在 使 用 美 沙 拉 嗪 的 同 时 使 用 酵 母 菌 ,治 疗 的 24 例 患 者 中17 例 获 得 了 临 床 缓 解 ,提 示 酵 母 菌 能 有 效 地 治 疗 UC。 Borruel等 21 用 益 生 菌 培 养 CD 患 者 黏 膜 标 本 ,24h 后 观 察 CD4 细 胞数 目 与 对 照 组 比 较 明 显 减 少 ,提 示 益 生 菌 可 降 低 黏 膜 CD4 细胞 。4 总 结 与 展 望现 有 研 究 表 明 ,肠 道 菌 群 失 调 与 IBD 发 病

21、高 度 相 关 ,表 现为 致 病 菌 滋 生 、 益 生 菌 缺 失 ,但 目 前 还 不 清 楚 微 生 态 失 调 是IBD 的 继 发 事 件 ,还 是 IBD 的 发 病 原 因 。 随 着 肠 道 黏 膜 免 疫 系统 及 IBD 遗 传 易 感 性 研 究 的 不 断 完 善 ,期 待 今 后 将 逐 步 揭 示IBD 与 微 生 态 失 调 之 间 的 关 系 。 益 生 菌 制 剂 作 为 一 种 安 全 有效 、 无 不 良 反 应 的 治 疗 方 法 ,应 用 于 临 床 治 疗 IBD 的 前 景 充 满希 望 ,但 仍 存 在 一 些 问 题 ,如 目 前 针 对 微

22、 生 态 制 剂 治 疗 IBD 还缺 乏 大 样 本 、 随 机 、 双 盲 、 对 照 的 临 床 试 验 ,益 生 菌 治 疗 时 机 选择 、 剂 量 、 疗 程 、 安 全 性 等 还 不 明 确 ,而 且 并 非 所 有 的 IBD 都 对微 生 态 制 剂 敏 感 。参 考 文 献 :1 Kanauehi O ,Mitsuyama K ,Araki Y ,et al. Modification ofintestinal florain the treatment of inflammatory bowel dis2easeJ . Curr Pharm Des ,2003 ,9 :

23、333.2 Marteau P ,Poehart P ,Dore J ,et al. Comparative study ofbaeterial groups within the human ceeal and fecal mcro2biotaJ . Appl Environ Microbiol ,2001 ,67 :4939.3 Sellon R K , Tonkonogy S ,Schultz M ,et al. Resident enter2ic bacteria are necessary for development of spontaneouscolitis and immun

24、e system activation in interleukin2102de2ficient miceJ . Infect Immun ,1998 ,66 :5224.4 Taurog JD , Richardson J A ,Croft J T ,et al. The germfreestate prevents development of gut and joint inflammatorydisease in HLA2B27 transgenic ratsJ . J Exp Med ,1994 ,180 :2359.5 Linskens R K , Huijsdens XW , S

25、avelkoul P H , et al. Thebacterial flora inflammatory bowel disease : current in2sights in patho2genesis and the influence of antibioticsand probioticsJ . J Scand Gastroenterol ,2001 ,36 (234) :292.6 Seksik P ,Rigottier2Gois L , Gramet G ,et al. Alterations ofthe dominant faecal bacterial groups in

26、patients withCrohn s disease of the colonJ . Gut ,2003 ,52 :237.7 Ohkusa T ,Okayasu I ,Ogihara T ,et al. Induction of ex2perimental ulcerative colitis by fusobacterium varium iso2lated from colonic mucosa of patients with ulcerative coli2tisJ . Gut ,2003 ,52 :79.8 Hans W , Scholmerich J , Gross V ,

27、et al. The role of theresident intestinal flora in acute and chronic dextran sul2fate sodium2induced colitis in mice J . Eur J Gastroen2terol Hepatol ,2000 ,12 (3) :267.9 Darfeuille2Michaud A ,Boudeau J ,Bulois P , et al. High2prevalence of adherent2invasive Escherichia coli associatedwith ileal muc

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31、ice develop a primary intestinal permeabilitydefect in response to enteric microfloraJ . Inflamm Bow2el Dis ,1999 ,5 (4) :262.15 Damaskos D , Kolios G. Probiotics and prebiotics in in2flammatory bowel disease :microflora on the scopeJ . BrJ Clin Pharmacol ,2008 ,65 (4) :453.16 Katz J A. Advances in

32、the medical therapy of inflammato2ry bowel disease J . Curr Opin Gastroenterol , 2002 , 18(4) :435.17 Kanauchi O ,Mitsuyama K ,Araki Y ,et al. Modification ofintestinal flora in the treatment of inflammatory boweldiseaseJ . Curr Pharm Des ,2003 ,9 (4) :333.18 Kato K ,Mizuno S ,Umesaki Y ,et al. Rand

33、omized placebo22521 重 庆 医 学 2009 年 5 月 第 38 卷 第 10 期controlled trial assessing the effect of bifidobacteria2fer2mented milk on active ulcerative colitisJ . Aliment Phar2macol Ther ,2004 ,20 :1133.19 Madsen KL . The use of probiotics in gastrointestinal dis2easeJ . Can J Gastroenterol ,2001 ,15 :817.

34、20 Guslandi M , Giollo P , Testoni PA. A pilot trial of saccha2romy2ces boulardii in ulcerative colitis J . Eur J Gastro2enterol Hepatol ,2003 ,15 (6) :697.21 Borruel N , Carol M , Casellas F ,et al. Increased mucosaltumour necrosis factor alpha production in Crohn s dis2ease can be downregulated ex

35、 vivo by probiotic bacteriaJ . Gut ,2002 ,51 :659.(收 稿 日 期 :2009201206) 综 述 HBV 特 异 性 CTL 在 病 毒 清 除 和 肝 脏 损 伤 中 的 作 用王 沂 芹 1综 述 ,吴 玉 章 2审 校(第 三 军 医 大 学 :1. 新 桥 医 院 肾 内 科 ,重 庆 400037 ;2. 基 础 部 全 军 免 疫 研 究 所 ,重 庆 400038)关 键 词 :乙 型 肝 炎 病 毒 ;细 胞 毒 性 T 淋 巴 细 胞 ;病 毒 清 除 ;肝 脏 损 伤中 图 分 类 号 :R512. 62 ;Q26 文

36、献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :167128348 (2009) 1021253203乙 型 肝 炎 患 者 体 内 的 病 毒 清 除 依 赖 于 机 体 针 对 病 毒 的 特异 性 T 细 胞 应 答 122 。 乙 型 肝 炎 病 毒 (hepatitis B virus , HBV)特 异 性 细 胞 毒 性 T 淋 巴 细 胞 (cytotoxic T lymphocyte ,CTL)识别 M HC2 类 分 子 与 细 胞 内 合 成 的 病 毒 蛋 白 肽 复 合 物 ,抗 原 递呈 细 胞 是 HBV 感 染 细 胞 或 被 病 毒 感 染 后 凋 亡 的 细 胞 。

37、 CTL通 过 对 病 毒 相 关 抗 原 表 位 的 识 别 、 活 化 ,经 穿 孔 素 、 颗 粒 酶 依 赖的 途 径 杀 伤 感 染 肝 细 胞 ,或 通 过 Fas/ FasL 途 径 启 动 靶 细 胞 的凋 亡 ,以 及 通 过 细 胞 因 子 如 IFN2 等 的 非 细 胞 杀 伤 途 径 抑 制 病毒 的 复 制 。 因 此 在 效 应 细 胞 水 平 ,CTL 的 应 答 可 以 通 过 两 条不 同 的 途 径 清 除 病 毒 :或 者 是 杀 伤 感 染 的 细 胞 ,或 者 是 清 除 感染 细 胞 内 的 病 毒 而 不 杀 伤 细 胞 。 近 年 来 研 究

38、发 现 , HBV 特 异性 CTL 通 过 释 放 细 胞 因 子 清 除 HBV 可 能 起 更 为 重 要 的 作用 ,使 传 统 的 细 胞 杀 伤 途 径 占 主 导 地 位 的 学 说 受 到 了 挑 战 。1 HBV 特 异 性 CTL 与 感 染 肝 细 胞 内 病 毒 的 清 除长 期 以 来 , HBV 特 异 性 CTL 对 感 染 肝 细 胞 的 溶 解 、 破 坏被 认 为 是 清 除 乙 肝 病 毒 所 必 须 ,但 近 来 这 个 观 点 受 到 了 质 疑 。首 先 ,病 毒 特 异 性 CTL 在 体 内 的 溶 细 胞 效 率 比 体 外 实 验 低 。体

39、外 检 测 CTL 的 溶 细 胞 功 能 活 性 时 ,将 敏 感 的 靶 细 胞 围 绕 在效 应 细 胞 周 围 ,效 应 细 胞 只 需 要 识 别 相 应 的 抗 原 ,然 后 行 使 溶细 胞 功 能 即 可 。 然 而 在 体 内 ,情 况 截 然 不 同 :特 异 性 的 CTL 先被 诱 导 ,然 后 进 入 血 液 循 环 ,通 过 层 层 组 织 屏 障 ,最 终 停 留 在 感染 的 部 位 ;接 着 ,这 些 CTL 接 触 感 染 的 细 胞 ,识 别 表 达 在 肝 细胞 表 面 的 病 毒 抗 原 ,杀 伤 感 染 的 细 胞 ;之 后 ,再 去 识 别 和 杀

40、 伤 另外 感 染 的 细 胞 ,同 时 它 们 还 承 受 着 激 活 诱 导 的 凋 亡 的 巨 大 压力 。 其 次 ,人 类 肝 脏 大 约 有 1011个 肝 细 胞 ,它 们 都 可 能 被 HBV感 染 3 ;人 体 内 大 约 有 1012 个 淋 巴 细 胞 ,其 中 HBV 特 异 性CTL 前 体 细 胞 的 频 率 最 多 不 会 超 过 10 - 4 4 。 假 使 绝 大 多 数 肝细 胞 被 感 染 (很 常 见 ) ,体 内 所 有 的 HBV 特 异 性 CTL 在 同 一时 间 进 入 肝 脏 (很 少 见 ) ,那 么 每 个 HBV 特 异 性 的 CT

41、L 必 须识 别 和 杀 伤 1 000 个 感 染 的 肝 细 胞 。 在 这 种 情 况 下 ,很 难 想 象对 病 毒 的 清 除 仅 仅 依 赖 于 对 感 染 细 胞 的 溶 解 破 坏 。 最 后 ,如 果乙 肝 病 毒 的 清 除 需 要 以 肝 细 胞 的 破 坏 为 代 价 ,那 么 HBV 感 染患 者 的 死 亡 率 应 该 很 高 ,但 是 临 床 上 绝 大 多 数 患 者 都 能 够 痊愈 。 因 此 ,体 内 HBV 的 清 除 不 能 完 全 依 赖 于 特 异 性 CTL 对感 染 肝 细 胞 的 破 坏 。 然 而 ,这 仅 是 理 论 上 的 推 论 ,需

42、 要 完 善 的实 验 给 予 证 明 。黑 猩 猩 HBV 感 染 模 型 是 体 外 HBV 感 染 的 最 佳 模 型 ,不仅 发 病 过 程 与 人 类 急 性 自 限 性 肝 炎 相 似 ,而 且 在 感 染 黑 猩 猩 的肝 组 织 内 能 够 检 测 到 cccDNA (covalently closed circular DNAcccDNA) 。 Guidotti 等 5 研 究 了 两 只 黑 猩 猩 HBV 感 染 模 型 ,在 实 验 中 ,两 只 黑 猩 猩 都 表 现 为 典 型 的 急 性 自 限 性 肝 炎 的 临 床经 过 。 重 要 的 发 现 是 ,在 疾

43、病 高 峰 期 ,即 转 氨 酶 升 高 、 肝 脏 损 伤的 前 几 周 ,两 只 黑 猩 猩 血 液 和 肝 组 织 中 的 HBV DNA 就 已 经消 失 了 5 。 在 转 基 因 鼠 模 型 中 一 系 列 的 实 验 证 明 ,这 种 抗 病 毒过 程 是 非 肝 细 胞 破 坏 性 的 ,是 通 过 细 胞 因 子 实 现 的 6 。 预 先 给转 基 因 鼠 注 射 IFN2 和 TNF2 抗 体 后 ,抗 病 毒 效 应 消 失 ,并 且肝 组 织 病 变 没 有 减 轻 ;给 转 基 因 鼠 输 入 穿 孔 素 缺 失 的 CTL 和FasL 缺 失 的 CTL 后 ,没

44、 有 引 起 肝 脏 炎 症 表 现 ,同 时 抗 病 毒 效应 存 在 。 因 此 ,病 毒 DNA 的 清 除 与 细 胞 因 子 IFN2 密 切 相关 。 那 么 ,IFN2 是 否 是 HBV 特 异 性 CTL 产 生 的 呢 ? 进 一 步的 实 验 表 明 ,将 野 生 型 的 CTL 输 入 IFN2 和 TN F2 受 体 被 敲除 的 转 基 因 鼠 ,证 明 是 输 入 的 CTL 产 生 的 IFN2 抑 制 了 HBV的 复 制 ,而 不 是 CTL 招 募 来 的 炎 症 细 胞 分 泌 的 IFN2 。 这 些结 果 有 力 地 证 明 HBV 特 异 性 CT

45、L 在 清 除 肝 细 胞 内 HBV 的同 时 不 伴 有 感 染 肝 细 胞 的 损 伤 。那 么 具 有 抗 病 毒 活 性 的 究 竟 是 哪 些 细 胞 因 子 呢 ? 它 们 在肝 细 胞 中 抑 制 HBV 复 制 是 通 过 何 机 制 呢 ? Pasquetto 等 7 用转 基 因 鼠 的 肝 细 胞 建 立 一 个 永 生 细 胞 系 ,详 细 研 究 了 细 胞 因 子抑 制 肝 细 胞 中 HBV 复 制 的 机 制 。 该 细 胞 系 的 特 点 是 :表 达 成熟 肝 细 胞 的 基 因 ; HBV 病 毒 能 够 在 这 些 细 胞 中 持 续 复 制 并 且对

46、 抗 病 毒 细 胞 因 子 敏 感 ,能 够 反 应 体 内 的 情 况 。 实 验 发 现 :在IFN2 、 IFN2 、 IFN2 3 种 细 胞 因 子 中 , IFN2 可 以 单 独 抑 制HBVDNA 的 复 制 ;当 IFN2 和 TN F2 共 同 使 用 时 ,它 们 可 以产 生 抑 制 HBVRNA 的 协 同 效 应 。 Robek 等 8 研 究 发 现 , IFN可 以 诱 导 清 除 感 染 肝 细 胞 内 含 HBV RNA 颗 粒 ,从 而 打 破HBV 复 制 循 环 ,这 个 过 程 是 蛋 白 激 酶 依 赖 途 径 的 。 因 此 细 胞因 子 可

47、以 直 接 作 用 于 肝 细 胞 ,通 过 细 胞 内 机 制 抑 制 HBV 复制 。 IFN2 是 通 过 何 途 径 抑 制 病 毒 复 制 呢 ? 研 究 发 现 IFN2可 以 诱 导 核 蛋 白 La autoantigen 的 裂 解 ,导 致 HBV RNA 不 稳定 9210 ;另 一 研 究 发 现 , IFN2 可 以 诱 导 合 成 iNOS ,从 而 抑 制病 毒 复 制 11 。 既 然 HBV 特 异 性 CTL 能 通 过 分 泌 抗 病 毒 细 胞因 子 抑 制 HBV 的 复 制 ,那 么 这 个 效 应 对 HBV 复 制 模 板 共 价闭 合 环 状 DNA 是 否 也 有 作 用 呢 ? Wieland 等 12 在 急 性 肝 炎黑 猩 猩 模 型 中 探 讨 了 这 个 问 题 。 研 究 结 果 发 现 在 病 毒 清 除 早3521重 庆 医 学 2009 年 5 月 第 38 卷 第 10 期