1、编号 0815219 毕 业 论 文 （ 2012 届本科）题 目： 不同种类、浓度的激素配合使用对 银斑百里香无菌苗生长的影响 学 院： 农业与生物技术学院 专 业： 园 艺 作者姓名： 张 亚 萍 指导教师： 张 春 梅 职称： 副教授 完成日期： 2012 年 6 月 10 日二 一 二 年 六 月农业与生物技术学院园艺专业 2012 届本科生毕业论文2目 录河 西 学 院 本 科 生 毕 业 论 文 （ 设 计 ） 诚 信 声 明.2河 西 学 院 本 科 生 毕 业 论 文 （ 设 计 ） 开 题 报 告.3论 文 进 度 安 排 和 采 取 的 主 要 措 施 .8主 要 参 考
2、资 料 和 文 献 .8不 同 种 类 、 浓 度 的 激 素 配 合 使 用 对 银 斑 百 里 香无 菌 苗 生 长 的 影 响 .10摘 要 .10引 言 .101. 试 验 材 料 与 方 法 .111.1 供 试 材 料 .111.2 培 养 基 配 制 .111.3 培 养 条 件 .111.4 接 种 条 件 及 培 养 方 法 .112.结 果 与 分 析 .112.1 不 同 浓 度 的 NAA 与 6-BA 配 合 使 用 对 银 斑 百 里 香 的 影 响 .112.1.1 NAA 与 6-BA 配 合 使 用 对 银 斑 百 里 香 种 子 发 芽 率 的 影 响.12
3、2.1.2 NAA 与 6-BA 配 比 对 银 斑 百 里 香 无 菌 苗 生 长 的 影 响.132.2 不 同 浓 度 的 2,4-D 和 6-BA 配 合 使 用 对 银 斑 百 里 香 的 影 响 .142.2.1 2,4-D 和 6-BA 配 合 使 用 对 银 斑 百 里 香 种 子 的 影 响 .142.2.2 2,4-D 和 6-BA 配 合 使 用 对 百 里 香 无 菌 苗 生 长 状 况 的 影 响.153.讨 论 与 结 论 .164.参 考 文 献 .17附 录 ： .18河 西 学 院 本 科 生 毕 业 论 文 （ 设 计 ） 题 目 审 批 表.18河 西 学
4、 院 农 业 与 生 物 技 术 学 院 指 导 教 师 指 导 毕 业 论 文 情 况 登 记 表.19河 西 学 院 毕 业 论 文 （ 设 计 ） 指 导 教 师 评 审 表.20河 西 学 院 本 科 生 毕 业 论 文 （ 设 计 ） 答 辩 记 录 表.21致 谢 .22农业与生物技术学院园艺专业 2012 届本科生毕业论文3河西学院本科生毕业论文（设计）诚信声明本人郑重声明：所呈交的本科毕业论文（设计） ，是本人在指导老师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，成果不存在知识产权争议，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究
5、做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：二 O 一 二 年 六 月 十 日农业与生物技术学院园艺专业 2012 届本科生毕业论文4河西学院本科生毕业论文（设计）开题报告论 文 题 目 不 同 种 类 、 浓 度 的 激 素 配 合 使 用 对 银 斑 百 里 香 无 菌 苗 生 长 的 影 响学 生 姓 名 张 亚 萍 所 属 学 院农 业 与 生 物技 术 学 院专 业 园 艺 年 级 2008 级指 导 教 师 张 春 梅 所 在 单 位 河 西 学 院 职 称 副 教 授 开 题 日 期 2011 年 3 月农业与生物技术学院
6、园艺专业 2012 届本科生毕业论文6选题的根据：选题的理论、实际意义并综述有关本选题的研究动态和自己的见解1. 选题的理论、实际意义百里香( Thymus mongolicus)，俗称“ 地椒、地花椒” ，是唇形科半灌木。全球百里香属植物有 400 多个种与亚种，100 多个栽培品种。 中国有 12 种，2 变种，主要分布于我国西北高原，包括甘肃、陕西、青海、宁夏、新疆、北京、东北及河北、山西北部、内蒙古多石山地、黄土丘陵和沙地上(刘军 2010)。百里香属植物为世界名贵香料植物和芳香植物，是国际标准化组织(International Standard Organization，ISO)19
7、70 年就公布并被世界许多国家承认的香辛料之一（樊明涛等 2001） 。不但可以鲜食、做调味保健品（曹军胜 2002） ，而且全草入药，含有黄酮类成分，是一种广谱性药物，具有行气止痛、防暑避暑、补肝明目、滋胃润肺、利尿排水、抗病毒、杀菌、通经、抗痉挛、驱蠕虫、升血压、刺激白血球等功效，是强力的天然“抗生素”(赵颖等 2009)。由于含有芳香精油，还可用于香水、香皂、化妆品等日用工业品，在医药、传统日用化工及精细化工等领域得到广泛应用。此外，百里香属为旱生植物，多生于沙质坡地、砾石坡地、沙质草地等瘠薄土壤之上，适应性强，冬季可抵御-30以下的低温，夏季能耐受 40以上的高温，具有抗性强、耐旱、耐
8、寒、耐瘠薄、耐风蚀、耐盐碱等优良的生态特性。根系发达，细根如网，繁殖能力强，种群数量大，单株覆盖面积可达 0.8-1.2，常形成大面积的百里香草原，是不可多得的优良地被植物。百里香花期长，花色艳丽，繁殖力强，可建植花坛性质草坪、疏林草坪、游憩草坪，养护管理粗放，更换周期长，在城市园林绿化中具有广阔的应用前景，是将来城市多样绿化地被植物的一个重要发展方面。所以，加强百里香在城市园林绿化应用方面的研究，对于丰富甘肃乃至全国城市园林绿化树种选择具有重要意义。目前，许多国外的百里香品种已经在我国台湾、福建、深圳、武汉、南京、上海和安徽等省市广泛栽培。与国外品种相比，我国本土的野生百里香适应性较强，病虫
9、害较少，栽培成本低，因而是一种开发潜力较大的可持续利用的芳香植物。综上所述，中国野生百里香属植物资源丰富，分布广，经济价值高，兼有较高的食用、农业与生物技术学院园艺专业 2012 届本科生毕业论文7药用和化工应用价值，同时还有香化，绿化和环保等作用。目前对河西地区百里香的生境、分布特点、种质资源等至今还没有人进行过系统调查，品种选育更是空白，生产上采用的品种仍为半野生或农家品种。百里香的栽培非常粗放，对其栽培技术方面的研究甚少。因此，研究河西地区百里香高产栽培技术和在沙产业开发中的应用，可改善生态环境，固土护坡，环境保护等意义重大，应用前景十分广阔。2.研究动态银斑百里香是河西地区普遍生长的一
10、种植物，属于百里香属唇形科半灌木。它资源丰富，经济价值高，兼有较高的食用、药用和化工应用价值，同时还有香化，绿化和环保等作用，市场前景广阔。但是现在对河西地区银斑百里香的研究和应用甚少。为了加快开发利用银班百里香，本文研究了不同种类、浓度的激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响，筛选出了最适宜无菌苗生长的激素配比，为其今后的大面积利用和组织培养奠定基础。2.1 国内的研究动态杨莉等(2010) 以腋芽诱导的百里香（Thymus vulgaris L ）不定芽进行增殖培养条件筛选，采用 NAA 和 6-BA 组合进行试验，结果表明，高浓度的 6-BA 不适合不定芽的增殖，NAA0.25mg/L
11、6-BA0.25mg/L 的组合不仅能使不定芽快速增殖，而且不定芽增殖的综合质量也好，无畸形叶片产生。不定芽增殖最适宜的培养基为 MSNAA0.25mg/L6-BA0.25mg/L，增殖系数高达 5.97。不定芽在不同的培养基上的增殖效果也不一样，在21d 时液体光照的培养基增殖系数达到最大，生物量也达到最大；而固体培养基虽然在35d 时增殖系数高达 19.59。从不定芽增殖的过程中可以看出，在液体光照培养基中培养21d 的不定芽，用来提取精油是比较合适的。在 21d 时，培养基的电导率和 pH 值已不适应不定芽的继续增殖，此时可以通过添加培养基和营养物质来改善不定芽的生长条件，让其继续增殖，
12、以利于后续扩大生产。魏艳等(2007) 以百里香顶芽和腋芽为试材，MS 为基本培养基；MS+6-BA1.5mg/L +IBA0.1 mg/L +0.6% 琼脂+3%蔗糖为增殖培养；l/2MS+IBA0.5 mg/L +0.7%琼脂+2%蔗糖生根培养基，对河北地区百里香进行了组织培养。赵颖等(2009) 为了得到优良水土保持及资源型植物百里香的组织培养快繁技术，以MS 培养基为基础，加入不同浓度的植物激素对百里香的茎尖和嫩枝进行组织培养。结果表明：不同浓度的 6-BA 和 NAA 对百里香芽尖分化与增殖的影响有明显差异，激素用量低于或高于最适浓度时分化率下降，百里香组培芽增殖的最适培养基为 MS
13、+BA0.6mg/L+NAA0.2mg/L。其最适生根培养基为 1/2MS+NAA0.1mg/L。农业与生物技术学院园艺专业 2012 届本科生毕业论文8李晓东等(2009) 试验建立了一种普通百里香的快速繁殖方法。以带腋芽的茎段为外植体，比较了不同浓度的 IAA 和 6-BA 组合对不定芽的诱导和增殖的效果，以及不同浓度的 IBA 和多效唑组合对枝条生根的影响。试验表明：6-BA 可以有效促进普通百里香腋芽（T vulgaris）的增殖，但是高浓度的 6-BA 会使芽畸形，主要表现在叶片畸形和玻璃化现象上。而在培养基中适当降低 6-BA 浓度，可以使芽伸长。如果更换培养基可提高芽增殖效率，不
14、定芽在 MSIAA0.25mg/L 6-BA0.25mg/L 培养基中 28d 质量增加了 30 倍左右，因而在短时间内就可以获得大量普通百里香（T vulgaris）枝条。有关普通百里香（T vulgaris）的组织培养，国内还鲜有报道。刘军(2010)在亚洲百里香不定芽和愈伤组织的诱导实验研究中，以百里香的茎段、叶片等外植体进行体外培养，利用多种不同培养基成功诱导出亚洲百里香(Thymus serpyllumvar. asiat icus Kitag)的不定芽和愈伤组织。从结果来看，愈伤组织的诱导较为困难，特别是继代培养的褐化死亡现象需进行研究。在愈伤组织诱导中 2,4-D 与 NAA 的
15、浓度比在 0.8 1.6 之间时诱导此种百里香的愈伤组织的效果较好；2,4-D 与 NAA 浓度比大于或等于 2 时不能诱导出该种百里香的愈伤组织；2,4-D 与 NAA 的浓度比小于 0.8 时也不能诱导出该种百里香的愈伤组织。员铭等(2007) 在铺地百里香增殖培养基优化研究中，研究了 IBA、6-BA 、蔗糖及活性炭不同含量配合使用对铺地百里香增殖快繁培养的影响，筛选出铺地百里香最佳增殖培养基为 MS+IBA1.0mg/L+6-BA0.1mg/L+蔗糖 20%。沙红(2004)在几种药用芳香植物组织培养快速繁殖的研究中对百里香(Th. serpyllum)进行了组织培养，试验表明：其最佳
16、增殖培养基为 MS+BA1.5mg/L+IBA0.08mg/L，平均增殖倍数 4.24；最佳生根培养基以 1/2MS 培养基为基本培养基，附加 0.5mg/LIBA，2%蔗糖浓度，生根率可达 100%。赵庆臻(2002) 对五脉百里香进行了组培快繁尝试，采用野生带腋芽茎段作为组培材料。虽百里香属植物的组培快繁研究已历时多年，但组培技还未得到广泛应用。魏春雁(1998) 对于兴安百里香叶和嫩茎进行了愈伤组织诱导培养，认为 MS+2,4-D2.0 mg/L 培养基效果最好。1.2 国外的研究状况20 世纪 80 年代，Furmanowa 等（1992）对 Th.vulgaris 进行了组织培养，并
17、获得了再生植株。Mendes.M.L.等 (1999)以百里香(Th.mastichina L.)茎段为外植体，MS 为基本培养基，认为 0.1mg/LBAP 有利于百里香的增殖，1mg/LNAA 有利于生根。农业与生物技术学院园艺专业 2012 届本科生毕业论文93.自己对本试验的见解近十多年来，人们开始采用组织培养的方法获得银斑百里香的无菌幼苗或者诱导愈伤组织，筛选出不同培养目的下的优良激素组合。此方法具有很多的优点：1. 采用组织培养可大大地缩短生产周期；2. 组织培养不受环境条件的影响，可周年生产，提高了产量和经济效益；3. 百里香具有经济价值、营养价值和化工应用价值，同时还有香化，绿
18、化和环保等作用；此外， 银斑百里香可采用枝、茎、叶、根和种子等作为外植体； 国内外对不同地区的百里香都有研究，但河西地区的银斑百里香的资源丰富，但研究尚未展开，其它百里香品种的研究现状为基础研究与应用研究脱节（张继等 2010） 。鉴于此，对银斑百里香的资源有待开发利用，尤其在组织培养方面的研究即培养基的优化研究应备受重视。农业与生物技术学院园艺专业 2012 届本科生毕业论文10论文的主要内容、基本要求及其主要的研究方法：1.论文主要内容1.1 试验材料与方法1.1.1 试验材料银斑百里香(T.vulgarisSilver Posie ) 种子（于 2011 年 9 月采自张掖市大满乡） 。
19、1.1.2 试验验方法以 MS 培养基为基本培养基，NAA 设 0.1mg/L、0.15mg/L、0.2mg/L、0.25mg/L 四个浓度，6-BA 设 0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L 四个浓度，2,4-D 设0.3mg/L、0.6mg/L、0.9mg/L、1.2mg/L 四个浓度。研究不同种类、浓度的生长激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响。接种 7d 后检查，移除被污染培养基，统计生长情况。1.2 结果与分析1.2.1 不同浓度的 NAA 与 6-BA 配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响1.2.2 不同浓度的 2,4-D 和 6-BA 配合使用对银斑
20、百里香无菌苗生长的影响1.3 结论与讨论2.论文基本要求2.1 试验实施试验设在河西学院生命科学实验楼组织培养实验室内，试验于 2011 年 3 月下旬- 2011 年 12 月结束。2.2 选题要求（1）选题后，认真查阅相关文献，阅读领会毕业论文的内容和要求，制定试验计划、工作计划和进度表，做好各种准备工作。（2）定期向指导教师汇报工作进展情况，遇到的疑难问题争取及时得到教师的指导。（3）毕业论文打印要字迹清楚，撰写要符合本专业毕业论文撰写规范。3.论文主要研究方法组织培养的方法；农业与生物技术学院园艺专业 2012 届本科生毕业论文11论文进度安排和采取的主要措施：1. 2010 年 5
21、月至 2011 年 2 月，查找相关资料2. 2011 年 3 月至 2011 年 4 月，文献综述撰写；3. 2011 年 4 月至 2011 年 6 月，实验设计；4. 2011 年 9 月至 2011 年 11 月，实验实施；5. 2011 年 11 月至 2011 年 12 月，毕业论文初稿的撰写；6. 2012 年 6 月，论文答辩。主要参考资料和文献：曹军胜.百里香保健酱油的研制J. 中国酿造, 2002 ,29-30.段继功.红枸杞百里香保健茶J. 中国土特产 , 1994,(6):32.FURMANOWAM，OLSZOWSKAO Micropropagation of Thym
22、eJ In：BajajYPS（Ed ） Bioteclmology in Agricultureand Forestry, 1992(2);230-243.黄健,马莉,姚雷等,七种百里香精油的主成分分析及其化学型J. 上海交通大学学报( 农业科学版), 2009,27(3) :207-209 .李晓东,王永飞,马三梅等,普通百里香的组织培养与快素繁殖J. 湖北农业科学, 2009,48(6):1294-1297.刘军.亚洲百里香不定芽和愈伤组织的诱导J. 内蒙古科技与经济, 2010,207(5) :56-57.刘云斌.百里香天然资源及其园林应用J. 林业实用技术, 2005,(2):43-44.Mendes.M.L,In vitro cloning of Thymus mastichina L.J.Field grown Plants ActaHorticulture, 1999,502:303-306.樊明涛,陈锦屏.百里香提取物抑菌特性的研究J. 微生物学报, 2001,41(4):499-504.沙红.几种药用芳香植物组织培养快速繁殖的研究A硕士学位论文 C. 新疆:新疆农业大学,2004.魏春雁.百里香研究M. 长春:吉林科学技术出版社 , 2004:12-89.
