1、通过 RNA 芯片检测 25 例听神经瘤的基因突变实验目的:发现更多由于 PCR 技术局限而检测不到的潜在基因突变点,并通过比较不同听神经瘤之间的生物学行为,研究基因突变与肿瘤生物学性状之间的关系。实验方案:1)RNA 提取:从 25 例病人的新鲜听神经瘤组织中提取 RNA;2)cDNA 转换:提取出来的 RNA 逆转录成 cDNA,并通过 PCR 技术扩增3)杂交与 RNA 芯片检测:RNA 芯片含 mRNA 全序列,通过核酸分子杂交原理进行核酸序列分析的,芯片上已知序列的核酸探针通过碱基互补配对来检测分析未知序列,并通过计算机处理杂交信号来确定基因突变点。具体实验流程详见公司材料说明书。第
2、 3 步可能的原理:铺瓦式阵列( Tiled Array)是一种常用的用于检测突变位点的阵列 ,其设计原理可以下列说明:为了检测待测 cDNA 序列 5- TCAGCATXGCCATCG 中 X 位点 ,可以使用下面四个 RNA 探针:3- AGTCGTAACGGTAGC3- AGTCGTAGCGGTAGC3- AGTCGTACCGGTAGC3- AGTCGTATCGGTAGC用这四个探针与待分析序列同时杂交 ,严格控制杂交条件 ,那么完全互补探针的杂交信号最强 ,从而可以确定 X 位点。(参考文献:DNA 芯片技术及其在突变检测中的应用)4)检测结果分析:通过 RNA 芯片技术得到的基因突变点,结合之前 PCR 后基因测序实验获得的 NF2 基因突变,确定其他基因的突变情况。5)比较:根据 25 例听神经瘤组织的生长速度、囊性变否、肿瘤大小进行及基因突变的情况分类比较研究基因突变与肿瘤生物学性状之间的关系。预期结果经 RNA 芯片检测出现大批的基因突变点,听神经瘤的突变基因不局限于 PCR 检测的 NF2 基因,如 P16、TNF 、A(1-3) 、DCC 等基因均可发现较多突变点。 (参考文献:反向点杂方法检测听神经瘤基因突变 ) 。不同的基因突变点与不同的肿瘤生物学性状之间的关系,还需进一步研究。