1、第 28 卷第 3 期 大连海洋大学学报 Vol. 28 No. 32 0 1 3 年 6 月 JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY June 2 0 1 3文章编号 : 20951388( 2013) 03029305以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹生长及消化酶活性的影响杨志刚 ， 阙有清 ， 纪连元 ， 郭子好 ， 成永旭 ， 曾奇韬( 上海海洋大学 水产与生命学院 农业部淡水水产种质资源重点实验室 ， 上海 201306)摘要 : 用塑料围网将一个池塘分隔成 6 个 100 m2的小池塘 ， 每池放养 100 只体质量为 ( 10. 011. 02) g 的
2、中华绒螯蟹 Eriocheir sinensis， 分别投喂配合饲料和杂鱼 ， 每种饲料设 3 个重复 。养殖 180 d 后随机采样 ， 称量体质量 ， 测量壳长和壳宽 ， 计算肝胰腺指数 、性腺指数 、出肉率 、肌肉营养成分和消化道消化酶活性 。结果表明 : 投喂两种饲料的中华绒螯蟹的体质量 、肝胰腺指数 、性腺指数 、出肉率 、壳长 、壳宽及肌肉中的水分 、粗蛋白 、粗脂肪和粗灰分含量均无显著性差异 ( P0. 05) ， 说明以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹的生长无明显影响 ; 配合饲料组蟹胃的类胰蛋白酶和肠的脂肪酶活性显著高于杂鱼组 ( P0. 05) ， 杂鱼组蟹肠的淀粉酶活性显著高
3、于配合饲料组 ( P0. 05) ， 两种饲料对蟹消化道其他各部位消化酶的活性均无显著性影响 ( P0. 05) 。关键词 : 中华绒螯蟹 ; 配合饲料 ; 杂鱼 ; 生长 ; 消化酶活性中图分类号 : S963 文献标志码 : A中华绒螯蟹 Eriocheir sinensis 俗称河蟹 ， 在中国水产养殖业中占十分重要的地位 。目前 ， 河蟹的成蟹养殖仍以投喂杂鱼为主 ， 这种养殖方式易受杂鱼来源和季节的限制 ， 而杂鱼也容易携带寄生虫和病菌 ， 导致蟹病发生 ， 不仅卫生品质难以保障 ， 而且还易污染水体 ， 破坏生态系统 。近年来 ， 越来越多的学者用配合饲料部分或完全替代野杂鱼等作为
4、河蟹养殖的可靠食物来源 ， 河蟹配合饲料也逐渐由实验室研究进入生产应用阶段 1。已有研究表明 ， 虾蟹类消化酶的活性与其摄食的饵料密切相关 25， 研究消化酶的消化能力 ， 不仅可以指导配合饲料的开发和研制 67， 提高动物对营养物质的利用率 ， 降低饲料成本 ， 而且可以为蟹类消化生理学的研究提供基础数据 。杨丽丽等 8研究了以配合饲料替代冰鲜野杂鱼对中华绒螯蟹幼蟹相关消化酶活性的影响 。本试验中 ， 作者研究了以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹成蟹相关消化酶活性的影响 ， 旨在为中华绒螯蟹成蟹养殖中配合饲料的推广应用提供科学依据 。1 材料与方法1. 1 材料试验蟹购自上海崇明县扣蟹养殖基地
5、， 附肢健全 ， 体质量为 ( 10. 011. 02) g。试验用配合饲料由农业部淡水水产种质资源重点实验室提供配方 ( 均为质量分数 ) : 豆粕 22%、菜籽粕 12%、棉粕 6%、特二粉 11%、乌贼膏粉10%、油脂 3%、进口鱼粉 20%、蟹用添加剂16% ( 主要含虾蟹多维 、虾壳粉 、磷脂 、磷酸二氢钙 、沸石粉 、胆碱等 ) ， 委托江苏南通巴大饲料有限公司加工而成 ， 配合饲料含粗蛋白质38. 48%、粗脂肪 7. 19%、水分 10. 89%。试验用杂鱼为捕获的野生冰鲜杂鱼 ， 含 粗 蛋 白 质74. 98%、粗脂肪 6. 59%、水分 80. 19%。类胰蛋白酶 、胃蛋
6、白酶 、淀粉酶和脂肪酶检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所 。收稿日期 : 20121023基金项目 : 上海市科技兴农推广项目 ( 沪农科推字 2011D24 号 ) ; 上海市教育委员会科研创新项目 ( 11YZ151) ; 上海高校创新团队( 第二期 ) 项目 ; 上海高校知识服务平台上海海洋大学水产动物遗传育种中心 ( ZF1206) ; 上海市中华绒螯蟹产业技术体系( D2010100208)作者简介 : 杨志刚 ( 1973) ， 男 ， 博士 ， 副教授 。Email: zgyang shou. edu. cn通信作者 : 成永旭 ( 1964) ， 男 ， 教授 ， 博士生导
7、师 。Email: chengyongxucrablab hotmail. com1. 2 方法1. 2. 1 试验设计与养殖管理 试验在上海市崇明县水产技术推广站特色水产养殖基地进行 。用塑料围网将一个池塘分隔成 6 个 100 m2小池塘 ， 每池放养 100 只蟹 ， 雌 、雄比例为 11， 分别投喂配合饲料和鲜杂鱼 ， 每种饲料设 3 个重复 。水温升至 15 之后开始投喂 ， 日投喂配合饲料量为蟹总质量的 3% 5%， 日投喂杂鱼量为蟹总质量的 10% 15%， 视天气情况及时调整 。养殖早期水位控制在 1 m 左右 ， 每半个月加换水 1 次 ;高温时节水位增加至 1. 3 1.
8、5 m， 每周加换水 1次 ， 每次为 20 40 cm 或池塘总水量的 1/4 左右 。定期检测蟹池水质 ， 控制水中溶氧在 3 mg/L 以上 ，池塘 pH 为 7. 0 8. 5， 氨 氮 0. 2 mg/L， 亚 硝酸盐 0. 01 mg/L， 硫化氢 0. 001 mg/L。1. 2. 2 样品的采集与分析 养殖试验时间为 2010年 3 月 20 日 9 月 16 日 ， 试验结束时捕获所有蟹 ， 称量体质量 ， 计算饲料系数 ( FCR) ， 从两种饲料的每个重复组中随机取雌 、雄蟹各 20 只 ， 测量壳长 、壳宽 ; 取其肝胰腺 、性腺和肌肉 ， 计算肝胰腺指数 ( HSI)
9、 、性腺指数 ( GSI) 和出肉率 :GSI ( %) = 100G/W，HSI ( %) = 100H/W，出肉率 ( %)= 100M/W，FCR=F/ ( W2W1) ，其中 : G、H、M 分别为性腺 、肝胰腺和全部肌肉的质量 ( g) ; W 为蟹的总质量 ( g) ; F 为养殖期间每个池的总投饵量 ( g) ; W1、W2分别为养殖试验开始和结束时每个池蟹的总质量 ( g) 。根据 AOAC 标准方法测定肌肉中常规生化组成 。同时从每种饲料组随机取蟹 6 只 ， 取肝胰腺 、胃和肠 。将每只蟹各组织用预冷双蒸水分别匀浆 ，于 4 下以 9 000 r /min 冷冻离心 30
10、min， 弃沉淀取上清液 ， 按照试剂盒方法测定消化道不同部位的类胰蛋白酶 、胃蛋白酶 、淀粉酶和脂肪酶活性 。类胰蛋白酶和胃蛋白酶活性定义为 : 在 37条件下 ，pH 为 8. 0 时 ， 每毫克蛋白中含有的酶蛋白每分钟使吸光度变化 0. 003 为 1 个酶活性单位 ( U) 。淀粉酶活性定义为 : 在 37 条件下 ， 以每毫克蛋白与底物作用 30 min， 水解 10 mg 淀粉为 1 个酶活性单位 ( U) 。脂肪酶活性定义为 : 以每克组织与底物反应 1 min 消耗 1 mol 底物为 1 个酶活性单位 ( U) 。1. 3 数据处理采用 SPSS 17 软件对试验数据进行统计
11、分析 ，试验数据用平均值 标准差表示 。采用 Levenes 进行方差齐性检验 ， 两组饲料对中华绒螯蟹各种酶活性的影响用独立样本 T 检验进行分析 ， 对消化道不同部位的酶活性进行单因素方差分析 ( OnewayANOVA) 和 Duncan 多重比较 ， 显著性水平设为0. 05。2 结果2. 1 以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹生长及肌肉营养成分的影响用配合饲料投喂雌 、雄中华绒螯蟹的组分别记为 A配、B配， 用杂鱼投喂雌 、雄中华绒螯蟹的组分别记为 A杂、B杂。从表 1 可见 : 两种饲料组中华绒螯蟹的体质量 、壳长 、壳宽 、肝胰腺指数 、性腺指数和出肉率均无显著性差异 ( P0. 0
12、5) ， 表明使用配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹生长发育没有显著影响 ; 但配合饲料组的饲料系数显著低于杂鱼组( P0. 05) 。从表 2 可见 : 两组饲料组中华绒螯蟹雌 、雄蟹肌肉中的水分 、粗蛋白质 、粗脂肪和粗灰分含量均无显著性差异 ( P0. 05) 。表 1 杂鱼和配合饲料对中华绒螯蟹生长的影响 ( n=60)Tab. 1 The effects of trash fish and formulated diet on growth in Chinese mitten crab Eriocheir sinensis( n=60)组别group体质量 /gbody weight壳长
13、/mmcarapace length壳宽 /mmcarapace width肝胰腺指数 /%HSI性腺指数 /%GSI饲料系数FCR出肉率 /%dressed rateA杂84. 415. 86 53. 612. 64 55. 052. 9 8. 611. 01 2. 471. 3 6. 670. 43a19. 671. 66A配88. 328. 86 53. 771. 81 56. 462. 42 9. 120. 87 2. 210. 91 2. 620. 31b19. 851. 92B杂121. 0910. 91 55. 252. 84 58. 162. 39 6. 150. 78 0.
14、920. 43 6. 480. 35a22. 931. 47B配118. 1312. 86 56. 981. 90 59. 752. 38 6. 540. 62 0. 960. 34 2. 570. 28b22. 151. 62注 : 同列中标有不同小写字母者表示组间有显著性差异 ( P0. 05) ， 标有相同小写字母者表示组间无显著性差异 ( P0. 05) ， 下同 。Note: The means with the different letters within the same column are significant differences at the 0. 05 prob
15、ability level， and the means with the sameletters within the same column are not significant differences， et sequentia.492 大连海洋大学学报 第 28 卷表 2 杂鱼和配合饲料对蟹肌肉营养成分的影响 ( 湿质量 )Tab. 2 The effects of trash fish and formulated diet onmuscle composition of Chinese mitten crab E-. sinensis ( in wet matter) w/%组别
16、group水分moisture粗蛋白质crude protein粗脂肪crude fat粗灰分crude ashA杂77. 350. 52 17. 420. 38 1. 060. 04 1. 960. 24A配77. 120. 38 17. 280. 65 1. 110. 12 2. 010. 12B杂77. 620. 47 17. 890. 26 1. 080. 06 2. 050. 14B配77. 450. 63 17. 680. 52 0. 980. 15 2. 110. 222. 2 以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹类胰蛋白酶和胃蛋白酶活性的影响从图 1 可见 : 两种饲料组中华绒螯蟹的
17、肠和肝胰腺的类胰蛋白酶活性均无显著性差异 ( P 0. 05) ; 配合饲料组蟹胃的类胰蛋白酶活性显著高于杂鱼组 ( P0. 05) ， 也显著高于两种饲料组蟹的肠和肝胰腺的类胰蛋白酶活性 ( P0. 05) 。从图 1 可见 : 两种饲料组中华绒螯蟹的肠 、肝胰腺和胃的胃蛋白酶活性均无显著性影响 ( P0. 05) ; 同种饲料组消化道不同部位的胃蛋白酶相比 ， 杂鱼组蟹肠的胃蛋白酶活性最高 ， 配合饲料组蟹胃的胃蛋白酶活性最高 ， 而两种饲料组蟹肝胰腺的胃蛋白酶活性均最低 。2. 3 以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹脂肪酶和淀粉酶活性的影响从图 1 可见 : 配合饲料组蟹肠的脂肪酶活性显著高
18、于杂鱼组 ( P0. 05) ， 两种饲料组蟹肝胰腺和胃的脂肪酶活性均无显著性差异 ( P0. 05) ; 同种饲料组消化道不同部位的脂肪酶相比 ， 两种饲料组蟹肠的脂肪酶活性均最高 ， 而肝胰腺脂肪酶活性均最低 。从图 1 可见 : 杂鱼组蟹肠的淀粉酶活性显著高于配合饲料组 ( P0. 05) ， 两种饲料组蟹肝胰腺和胃的淀粉酶活性均无显著性差异 ( P0. 05) ; 同种饲料组消化道不同部位的淀粉酶相比 ， 配合饲料组蟹胃的淀粉酶活性最高 ， 杂鱼组蟹肠的淀粉酶活性最高 ， 而两种饲料组蟹肝胰腺的淀粉酶活性均最低 。注 : 标有不同小写字母者表示组间有显著性差异 ( P0. 05) ，
19、标有相同小写字母者表示组间无显著性差异 ( P0. 05) 。Note: The means with the different letters are significant differences at the 0. 05 probability level， and the means with the same letters are not signifi-cant differences图 1 杂鱼和配合饲料对中华绒螯蟹类胰蛋白酶 、胃蛋白酶 、脂肪酶和淀粉酶活性的影响Fig. 1 Effect of trash fish and formulated diet on activ
20、ities of trypsin， pepsin， lipase and amylase in Chinese mittencrab E. sinensis3 讨论3. 1 以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹生长的影响本试验结果显示 ， 在中华绒螯蟹成蟹养殖中以配合饲料替代杂鱼对其壳长 、壳宽 、肝胰腺指数 、性腺指数 、出肉率及肌肉常规生化组成均无显著性影响 。表明本试验所使用的配合饲料和杂鱼均能较好地满足中华绒螯蟹生长发育的营养需求 。阙有清等 9用配合饲料替代杂鱼养殖中华绒螯蟹 231 d，592第 3 期 杨志刚 ， 等 : 以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹生长及消化酶活性的影响其生长发育的
21、各项指标也均无显著性差异 ， 但养成蟹可食部分脂肪酸的组成因饲料油脂成分的不同有一定差异 。邱仁杰等 10用 3 种不同油脂配比的配合饲料养殖中华绒螯蟹 115 d， 均未发现蟹生长异常 。林永贺等 11和梁海鸥等 12在青石斑鱼 Epi-nephelus awoara 和军曹鱼 Rachycentron canadum 的养殖过程中 ， 也发现以配合饲料替代杂鱼后鱼生长的速度较快且肌肉品质进一步改善 。上述研究表明 ， 配合饲料配制科学 、营养全面 ， 如果能正确投喂 ， 完全可以用于养殖主要以鲜活饵料为食物来源的蟹或鱼 。朱晓鸣等 13研究发现 ， 中华绒螯蟹对不同饵料具有一定的选食性 ，
22、 通常更偏食于动物性饵料 ， 特别是具有腥鲜味的动物性饵料 ， 这也是传统的中华绒螯蟹养殖中一直以杂鱼为主要饵料的重要原因 。笔者在饲料配制的过程中特别关注了诱食剂的筛选和应用 ， 试验用配合饲料已具备和杂鱼相似的诱食性 。饲料的营养水平决定了养殖动物肌肉的营养成分 ， 两种饲料蛋白质含量差异较大 ， 杂鱼和配合饲料的蛋白质分别占干质量的 74. 98% 和38. 48%， 用两种饲料投喂中华绒螯蟹 ， 其肌肉粗蛋白质水平却无显著性差异 ， 表明试验用配合饲料的蛋白质水平及平衡的氨基酸组成满足了中华绒螯蟹肌肉生长对蛋白质的需求 ， 在此基础上 ， 再提高饲料蛋白质水平 ， 对中华绒螯蟹肌肉蛋白
23、质沉积不具正向效应 。杂鱼组雌蟹和雄蟹的饲料系数分别比配合饲料组高 2. 54 和 2. 52 倍 ， 根据杂鱼 ( 2. 65元 /kg) 和配合饲料的价格 ( 6. 12 元 /kg) 计算可得 ， 用配合饲料替代杂鱼养殖中华绒螯蟹成蟹 ， 每生产 1 kg 雌蟹或雄蟹 ， 可节约饲料成本 1. 64 元或1. 44 元 。3. 2 以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹消化酶活性的影响甲壳动物消化酶活性取决于动物的消化生理特性和所摄食的饵料 ， 其中饵料营养素的质和量是影响甲壳动物消化酶活性的关键因素 1416。江洪波等 17发现 ， 饵料蛋白质对中华绒螯蟹仔蟹的肝胰腺类胰蛋白酶具有显著的促进作
24、用 ， 并根据仔蟹类胰蛋白酶 mRNA 丰度的变化 ， 指出蛋白质对类胰蛋白酶活性的影响是通过基因转录水平的差异而实现 。徐维娜等 18研究发现 ， 饲料蛋白质和脂肪水平显著影响克氏原螯虾 Procambarus clarkii 肠道 、肝胰腺的蛋白酶活性和脂肪酶活性 ， 并随着饲料蛋白质水平的增加 ， 克氏原螯虾通过提高消化道内蛋白酶的活性 ， 促进蛋白质的消化吸收 。Lee 等 19研究发现 ， 凡纳滨对虾 Litopenaeus vanmamei 摄食蛋白质含量为 30% 的饲料时 ， 消化道内蛋白酶的活性最高 ， 高于或低于这个蛋白质含量 ， 蛋白酶的活性均降低 。本试验结果显示 ，
25、配合饲料组蟹的胃类胰蛋白酶活性显著高于杂鱼组 ， 而配合饲料的粗蛋白质含量却低于杂鱼组 。这与徐维娜等 18对克氏原螯虾的研究结果不一致 。Le Vay 等 20对日本囊对虾的研究发现 ， 配合饲料含有某些特殊的蛋白质 ， 从而引起其幼体消化道类胰蛋白酶活性增加 ， 这可能也是本试验中配合饲料组蟹胃的类胰蛋白酶活力显著高于杂鱼组的原因 。杨丽丽等 8对中华绒螯蟹幼蟹类胰蛋白酶的研究也得到与本研究相似的结果 。本试验中 ， 配合饲料组蟹的肠脂肪酶活性显著高于杂鱼组 ， 可能是因为脂肪酶活性随饲料中脂肪含量的增加而增强 。这与迟淑艳等 21对凡纳滨对虾的研究结果相似 。对比发现 ， 肠脂肪酶活性显
26、著高于肝胰腺中脂肪酶活性 ， 这表明中华绒螯蟹脂肪酶主要来源于肠道 ， 这与薛俊增等 22的研究结果一致 。本试验中 ， 两种饲料组蟹的肝胰腺和胃淀粉酶活性无显著性差异 ， 但杂鱼组肠淀粉酶活性显著高于配合饲料组 ， 这与杨丽丽等 8的研究结果不同 ， 可能是因为成蟹和幼蟹消化酶的分泌有一定差异 ， 也可能是因为杂鱼组淀粉酶活性随着饵料蛋白质水平的增加而升高 23。参考文献 : 1 陈立侨 ， 李二超 中华绒螯蟹营养需求的研究现状和进展 J 饲料工业 ， 2009， 30( 10) : 16 2 董云伟 ， 牛翠娟 ， 杜丽 饲料蛋白水平对罗氏沼虾 ( Macrobra-chium rosen
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35、lated feed ongrowth and digestive enzyme activities in Chinesemitten crab Eriocheir sinensisYANG Zhi-gang， QUE You-qing， JI Lian-yuan， GUO Zi-hao， CHENG Yong-xu， ZENG Qi-tao( Key Laboratory of Freshwater Aquatic Genetic Resources， Ministry of Agriculture， College of Fisheries and Life Science， Shang
36、hai Ocean University，Shanghai 201306， China)Abstract: A feeding experiment with triplication for each feed was carried out for 180 days to elucidate the effectsof replacement of trash fish with formulated feed on growth and digestive enzyme activity in Chinese mitten crab Eri-ocheir sinensis Chinese
37、 mitten crab with initial body weight of ( 1001102) g were cultured in six 100 m2pondsseparated by plastic net at a rate of 100 individuals per pond At the end of the experiment， body weight， carapacelength， carapace width， hepatopancreas index ( HIS) ， gonadsomatic index ( GSI) and dressed rate wer
38、e meas-ured， and muscle compositions and enzyme activities were determined The results showed that there was no signifi-cant influence on body weight， carapace length， carapace width， HIS， GSI and dressed rate ( P005) in differentdiet treatments No significant changes in moisture， and contents of mu
39、scular crude protein， crude fat and ash werefound in different treatments ( P005) ， indicating that replacement of trash fish with formulated diets had no sig-nificant influence on growth of Chinese mitten crab( P005) The crab fed the formulated diets had significantlyhigher trypsin activity in stom
40、ach and lipase activity in intestine than the crab fed the trash fish did( P0 05) ，while the crab fed the trash fish showed significantly higher amylase activity in intestine than the crab fed the formu-lated diets did( P005) ， without significant difference in digestive enzyme activity in other digestive organs in dif-ferent treatments ( P005) Key words: Eriocheir sinensis; formulated diet; trash fish; growth; digestive enzyme activity792第 3 期 杨志刚 ， 等 : 以配合饲料替代杂鱼对中华绒螯蟹生长及消化酶活性的影响
