1、1DNA 的粗提取与鉴定实验目的： 1 初步掌握 DNA 的粗提取和鉴定的原理与方法2 观察提取出来的 DNA 物质原理解析：1 . DNA 粗提取的实验原理： ( 1 ）本实验用鸡血为实验材料的原因是：鸡血的红细胞有 ，细胞核中有 DNA 和蛋白质组成的 因为哺乳动物（如兔子等）血液的红细胞中没有 ，因此不能用哺乳动物的血液为本实验的材料。 ( 2 ）提取 DNA 的原理是：利用 DNA 在 的氯化钠溶液中溶解度最低，形成沉淀析出；再利用 DNA 不溶于 ，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的 DNA 。 ( 3 ）制备鸡血细胞液的原理：用质量浓度为 0.1g /m
2、L 的柠檬酸钠作抗凝剂。用吸管吸去上清液的目的是去掉血浆，留下 ，因为血浆中没有 DNA 。( 4 ) DNA 的析出与获取原理：利用 DNA 在浓度较低的氯化钠溶液中溶解度小的原理，向含有 DNA 的浓度较高的氯化钠溶液中加入 ，稀释氯化钠溶液，使 DNA 的溶解度下降。这时，加上不断的搅拌，溶解度下降的 DNA 逐渐呈 。再通过过滤，滤去蛋白质，就可获得 DNA 的黏稠物了。氯化钠溶液的浓度与 DNA 溶解度之间的关系可用图曲线表示：2 . DNA 鉴定的原理：鉴定所用的试剂为二苯胺。 DNA 与二苯胺作用而显现 。鉴定时溶液颜色的深浅与溶液中 DNA 含量的多少有关。问题讨论：1 提取鸡
3、血中的 DNA 时，为什么要除去血液中的上清液？因为上清液是 ，不含血细胞，而沉于试管底部的鸡血细胞的 中才有 DNA ，所以提取鸡血细胞中的 DNA 时，要除去血液中的上清液。2 步骤 1 和步骤 3 中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗？为什么？不同。步骤 1 中加入蒸馏水是为了得到浓度低于血细胞内部浓度的溶液。这样 会大量渗入血细胞中使血细胞胀破而得到 DNA 。步骤 3 中加入蒸馏水是为了使氯化钠的物质的量浓度达到 DNA 溶解度最低点 。这时， DNA 分子就可以从氯化钠溶液中析出。 3 . DNA 的直径约为 2nm ，实验中出现的丝状物的粗细是否表示一个 DNA 分子直径的大
4、小？实验中出现的丝状物是肉眼可以观察到的，这种丝状物的直径要比 DNA 分子的直径 2nm 大许多倍，所以实验中出现的丝状物的粗细并不表示一个 DNA 分子直径的大小。 4 实验中有 3 次过滤，作用及使用的纱布层数有何区别？步骤 1 中的过滤是为了过滤鸡血细胞液得到含 的滤液，使用的纱布为 1 一 2 2层。步骤 4 中的过滤是为了得到从低浓度的氯化钠溶液中析出的附在纱布上的含 的黏稠物，所以所用的纱布为多层。第三次过滤在步骤 6 中，目的是得到再溶解后的 滤液，所以只要用纱布即可。5 ，实验中有 6 次搅拌，搅拌时应注意些什么？除最后一次搅拌外，前 5 次搅拌均要朝向 ，并且在析出 DNA
5、 、 DNA 再溶解和提取中各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止 DNA 断裂。 6 实验中两次使用蒸馏水的目的分别是什么？第一次使用蒸馏水是在第一步，加水是为了使血细胞 膨胀破裂，加水后必须充分搅拌，不应少于 5min ，使血细胞充分破裂；第二次加蒸馏水是在第三步，加水是为了稀释 NaCl 溶液，使 从 NaCl溶液中析出。 7 实验中有 3 次加 NaCl 溶液，目的分别是什么？在步骤 2 中，当加入 NaCl 后，必须充分晃动烧杯，使两者混合均匀，加速染色质中 DNA 与_分离，使 DNA 充分游离并溶解在 NaCl 溶液中。在步骤 5 中， NaCl 溶液是为了 DNA 的再
6、溶解，不过这时溶液中蛋白质含量已很少。在步骤 8 中，加的 NaCl 溶液的浓度比前 2 次低得多，但还是为溶解 。 8 影响实验效果的因素有哪些？( 1 ）提取核物质时，搅拌充分与否，会影响细胞破裂程度，进而影响到提取的 DNA 的量。 ( 2 ）沉淀 DNA 时，必须用 ，在冰箱内 15 以下至少存放 24h 。( 3 ）用玻璃棒搅拌时，玻璃棒不要直接插入烧杯底部，搅拌要轻缓，以便获得完整的 DNA 分子。巩固练习 A 组一、选择题（请将选择题答案写在题号前）1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是 A 防止凝血 B 加快 DNA 析出 C 加快 DNA 溶解 D 加快凝血2、下
7、列操作中，对 DNA 的提取量影响较小的是A 使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出 DNA 等核物质 B 搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动 C 在析出 DNA 黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增加 D 在用酒精沉淀 DNA 时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却3 含有 DNA 的氯化钠（ 0 . 015mol / L ）溶液中加入二苯胺试剂后，加热煮沸 5min ，溶液呈A 紫色 B 蓝色 C 砖红色 D 红色 4 在“ DNA 的粗提取实验”中，有两次 DNA 的沉淀析出，其依据的原理是 DNA 在物质的量浓度为 0 . 14mol / L 的氯化钠中的溶解度最低
8、DNA 在冷却的体积分数为 95 的酒精中能沉淀析出 A 两次都是 B 第一次是 ，第二次是 C两次都是 D 第一次是 ，第二次是 35 在向溶解 DNA 的 NaCl 溶液中不断加入蒸馏水的目的是A 加快溶解 DNA 的速度 B 加快溶解杂质的速度C 减小 DNA 的溶解度，加快 DNA 析出 D 减小杂质的溶解度，加快杂质的析出6 提取含杂质较少的 DNA 所用的溶液是A 体积分数为 90 的冷却的酒精 B 加热的、体积分数为 95 的酒精C 体积分数为 95 的冷却的酒精 D 加热的、体积分数为 90 的酒精 7 . DNA 的粗提取和鉴定实验，与下列哪项原理无关A . DNA 在 0.
9、14mol / L NaCl 溶液中的溶解度最低 B . DNA 易被龙胆紫染成紫色C 在 DNA 溶液中加入二苯胺，加热后产生蓝色D 加入 95 的冷酒精， DNA 会从溶液中析出8 下列图示中能反映 DNA 溶解度与 NaCl 溶液浓度之间关系的是9、下列关于 DNA 粗提取与鉴定的说法正确的是 A、氯化钠的浓度越低，对 DNA 的溶解度越大B、人体的血液不可代替鸡血进行该实验C、柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂D、利用 DNA 易溶于酒精的特点可除去 DNA 中的部分杂质10 对三次过滤的叙述不正确的是A 第一次过滤后，核物质存在于滤出的固体物中B 第二次过滤时使用多层纱布， DNA
10、存在于纱布上的黏稠物中 C 第三次过滤后， DNA 存在于滤液中，可进一步除去非 DNA 物质D 上述 B 、 C 均正确11 在 DNA 的粗提取实验中，提取鸡血细胞中的核物质和析出 DNA 粘稠物的操作过程均用到蒸馏水，其作用在于A 前者使血细胞破裂， 后者稀释氯化钠溶液 B 前者用来溶解血细胞，后者用来溶解 DNA C 前者用来分离细胞核，后者用来保护 DNA D 前者防止细胞核破裂，后者使 DNA 析出巩固练习 B 组 1 在“ DNA 的粗提取和鉴定实验”中有五次用玻璃棒搅拌。( l ）第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液是为了_;( 2 ）第二次搅拌加 2mol / L 的 NaCl 溶
11、液的滤液是为了使其与 DNA _; 4( 3 ）第三次搅拌加蒸馏水至 0 . 14mol / L 的 NaCl 溶液是为了_( 4 ) 第四次搅拌放入 2mol / L NaCl 溶液中纱布上的黏稠物是为_(5 ) 第五次搅拌体积分数为 95 的酒精为了_.2.关于 DNA 粗提取的实验材料的选择，研究者经过多次实验效果的比较，最终选择鸡血做实验材料。请据图回答问题：(1)鸡血细胞中红细胞含_，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中_细胞数目较多，可以提供丰富的_。(2)实验前由老师制备血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因_。(3)生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，若它
12、们按实验要求完成实验步骤后，结果是_,这是因为这些动物和人类一样，红细胞中都没有_，但若改用动物肝脏做实验材料，实验能顺利进行。这是因为_。(4)若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加_程序，使细胞更易分离。3、下图示“DNA 的粗提取和物理性状观察”实验装置：( l ）实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血细胞液中含有较高含量的 。( 2 ）在图 A 所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是，通过图 B 所示的步骤取得滤液，再在溶液中加入 2 mol / LNaCl 溶液的目的是；图中 C 所示实验步骤中加蒸馏水的目的是。4下面为格里菲斯用肺炎双球菌在小鼠身上进行的转化实验：
13、将无毒性的 R 型活细菌注射入小鼠体内，小鼠不死亡；将有毒性的 S 型活细菌注射入小鼠体内，小鼠死亡；将加热杀死的 S 型细菌注射入小鼠体内，小鼠不死亡；将无毒性的 R 型活细菌和加热杀死的 S 型细菌混合注射入小鼠体内，小鼠死亡，并在小鼠体内发现活的 S 型细菌，分析回答：5（1）实验说明 对小鼠无毒害作用；实验说明在小鼠体内 在加热杀死的 S 型细菌的作用下可以转化为 。（2）该实验可以得出这样一个结论：在加热杀死的 S 型细菌型中，必然含有促成这一转化的 。（3）这一实验并不能证明 DNA 是遗传物质，若想证明 DNA 是遗传物质这一结论，应怎样设计实验： 。课题：DNA 的粗提取与鉴定
14、（参考答案）A B B C C C B C B A A1 . ( l ）加速细胞破裂（ 2 ）混合均匀（ 3）稀释 NaCI 溶液，析出含 DNA 的黏稠物 ( 4 ）使黏稠物尽可能多地溶于溶液中（ 5 ）提取含杂质较少的 DNA2 .(1)含红细胞核 红 DNA (2)鸡血细胞中 DNA 相对含量高 (3)很难提取到 DNA 成熟红细胞中无细胞核 肝细胞中有细胞核 (4) 研磨3、 ( l ) DNA ( 2 ）使血球破裂、使滤液中的 DNA 溶于浓盐溶液、使 DNA 析出。26 （1）加热杀死的 S 型细菌、无毒的 R 型活细菌、有毒性的 S 型活细菌（2）物质（3）将 S 型细菌 DNA 提取出来，注入 R 型细菌内，将会得到有毒性的 S 型细菌
