1、生长抑素类似物对人肝癌细胞株 MHCC97生长抑素类似物对人肝癌细胞株 MHCC97Influence of somatostatin analogue on human hepatocellular cancer cell line MHCC97H【Abstract】 AIM: To study the influence of somatostatin analogue octreotide on human hepatocellular cancer cell line MHCC97H and its mechanisms in vivo. METHODS: Tentyseven nud
2、e mice,of hich MHCC97H tumor mass as planted in liver, ere divided into 3 groups randomly: negative control group, lo dose interfered group, large dose interfered group,and raised at similar condition for 35 d the survival time , the eight at the death point ere racorded and the pathologicail change
3、s of livers and lungs ere changed; the expression of matrix metalloproteinases2（MMP2）in hepatocellular carcinoma as detected by immunohistochemical technique. RESULTS: Compared ith the animal models of negative control group, the animal models of interfered groups ere heavier in mean eight at death
4、point and loer in metastasis rate ; hile there as no statistical difference beteen the 2 interfered groups ; the expression of MMP2 in hepatocellular carcinoma of interfered groups as gradually increased than that in control group（P 0.05）; hile there as no statistical difference beteen interfered gr
5、oups. CONCLUSION: Octreotide can improve the living quality of animal models and inhibit the metastasis of human hepatocellular cancer cell line MHCC97H in vivo,hich might be related to the donregulation of the expression of MMP2.【Keyords】 MHCC97H, octreotide, inhibition【摘要】 目的：探讨生长抑素类似物奥曲肽对人高转移潜能肝癌
6、细胞株 MHCC97H的影响及可能机制. 方法： MHCC97H 肿瘤组织种植于裸鼠肝脏建立肝癌动物模型 27只，随机分为 3组：阴性对照组和小、大剂量干预组，同等条件下饲养 35d，记录动物模型生存期，死亡时质量；观察肝脏，肺脏病理改变；免疫组化方法检测肝脏肿瘤组织基质金属蛋白酶 2表达变化. 结果： 奥曲肽干预组动物模型较阴性对照组动物模型死亡时平均体重增加,肝癌转移率下降；干预组间对比未见统计学差异；免疫组化显示干预组肝脏肿瘤细胞 MMP2表达较阴性对照组下调（P 0.05） ；干预组组间比较未见统计学差异. 结论： 奥曲肽可改善荷 MHCC97H细胞裸鼠肝癌模型生存质量，抑制MHCC9
7、7H细胞肺转移，下调肿瘤组织 MMP2的表达是奥曲肽抑制MHCC97H细胞侵袭转移的可能机制之一. 【关键词】 MHCC97H 细胞株；奥曲肽；抑制0引言原发性肝细胞肝癌 PHC根治性切除后 5 a复发率为54.1%61.5%，小肝癌为 43.5%，而局部治疗的转移复发率则更高. 常规化疗及放疗效果不佳，副作用大，基因治疗、生物治疗等作用亦不明显. 因此，深入研究肝细胞癌转移、复发机制和积极探索有效的抗复发转移治疗措施是当前 PHC诊治中的重点和难点.1材料和方法1.1材料主要试剂和仪器:善宁注射液由瑞士诺华公司生产提供. 鼠抗人 MMP2抗体 Antibody Diagnostica Inc
8、. 1.2方法1.2.1细胞培养人高转移潜能肝癌细胞株 MHCC97H由上海中山医院肿瘤研究所购得，100 mL/L 胎牛血清（fetal calf serum, FCS）加达尔伯克改良伊格尔培养基（dulbeccos modified eagles medium, DMEM）于 50 mL细胞培养瓶内 37，50 mL/L CO2 及饱和湿度下 CO2孵育箱内培养. 1.2.2 动物模型取对数生长期 MHCC97H肝癌细胞株，充分吹打至单细胞悬液，细胞冲洗液冲洗 3次，DMEM调整细胞浓度至 2107/mL，取 0.2 mL于 46 周龄的雄性裸鼠背部皮下注射，实验动物于层流室内饲养 28
9、d，至皮下结节直径约 1 cm，无菌条件下取出肿瘤组织保存于 37含 20 g/L FCS的 DMEM中，粉碎至 2 mm2 mm2 mm. 46 周龄的雄性裸鼠 30只，戊巴比妥钠 45 mg/kg腹腔注射麻醉后，手术野皮肤消毒，左肋缘下斜切口进腹，显露肝左叶，肿瘤组织块 2 mm2 mm2 mm大小，接种于肝左外叶，压迫止血，关腹. 同等条件下，动物模型层流室内饲养 3 d，剔除因麻醉意外、感染及出血死亡动物模型 3只，余动物模型随机分为 3组，动物模型体质量及周龄组间均衡性检验无统计学差异. A组：阴性对照组（等体积生理盐水腹腔注射，n=8） ；B 组：小剂量干预组（Oct 50 g/k
10、g d 腹腔注射，n=9） ；C 组：大剂量干预组（Oct 200 g/kg d 腹腔注射，n=10） ，同等条件下层流室内饲养35 d. 1.2.3标本检测记录每只动物模型生存时间，死亡时体质量，取肝脏，肺脏 40 g/L多聚甲醛，0.1 mol/L 磷酸缓冲液固定 48 h，组织石蜡包埋，HE 染色，免疫组化方法检测对比组间肝脏肿瘤组织MMP2表达变化. 染色结果判定参照 Mattern方法1： 阳性染色深度:未见染色为 0，轻度染色为 1，中度染色为 2，深度染色为 3；阳性细胞百分比:未见染色为 0，染色细胞 25%为 1，25%50%为2， 50%为 3. 将这两方面得分相加，得分
11、02 分判为阴性表达， 2分判为阳性表达，随机选择 10个高倍视野，记数 1000个细胞. 统计学处理： 实验计量结果以 xs表示,计量资料组间比较经 SAS软件进行方差分析及 Dunnett检验，计数资料组间比较采用 Fisher确切概率法. 2 结果人高转移潜能肝癌细胞株 MHCC97H种植于裸鼠皮下，层流室饲养35 d后发现原注射点皮下形成约 1.10.9 cm包块，实验动物呈现衰竭状态. 动物模型建立后，待实验动物自然清醒，观察 3d后，实验动物活动灵敏，觅食积极，并未发现因出血和感染死亡动物. 动物模型建立后 10 d发现阴性对照组动物模型较干预组动物模型活动减少，同时发现对照组动物
12、模型死亡时体重明显减轻（P0.01） ，生存时间组间对比未见统计学差异（P 0.05）,但是大剂量干预组动物模型中位生存期较小剂量干预组延长（26.721.5 d） ，同时小剂量干预组动物模型中位生存期较阴性对照组延长（21.519.3 d）. 肝脏病理改变可见两种类型. A 型肉眼见裸鼠肝体积明显减小，色泽晦暗，质地变硬，表面满布 12 mm大小结节，呈“粟粒”样，与正常肝脏组织分界不清. 镜下见裸鼠肝细胞大量变性坏死，组织结构消失，正常肝小叶结构消失，残存裸鼠肝细胞肿胀，胞浆内气球样改变，水肿明显；肿瘤细胞胞核淡染，异型性明显，聚集成团，呈现“癌巢”状，可见肿瘤细胞侵入管型结构. B 型肉
13、眼见裸鼠肝变化不明显，色泽鲜红，质地柔软，光滑，与正常肝脏组织分界明显. 镜下见坏死区范围明显缩小，肿瘤细胞呈现“癌巢”改变，裸鼠残存肝细胞肿胀坏死明显减轻. 肺脏病理改变：肺泡结构完整，肺泡间质内可见炎性细胞聚集，并可见肺泡间质内肿瘤细胞聚集成团，胞核淡染，异型性明显. 阴性对照组 87.5%动物模型肝脏呈现“A”型形态改变，干预组 77.8%动物模型肝脏肉眼观呈现“B”型形态改变，而且在大剂量干预组出现 B型形态改变的动物比例大于小剂量干预组（44.4%100%）. 肺脏组织连续切片 HE染色判断肝癌肺转移率可见阴性对照组转移率 87.5%，小剂量干预组转移率33.3%，大剂量干预组转移率
14、 10.0%（表 1，P 0.05）. 大剂量干预组 MMP2表达明显下调，阳性表达肿瘤细胞几乎不可见，在小剂量干预组 MMP2表达较大剂量干预组表达上调，可见少量阳性及弱阳性肿瘤细胞，散在分布；在阴性对照组 MMP2表达明显较干预组强，可见阳性及强阳性细胞出现. 而干预组间未见统计学差异（表 2）.表 1组间动物模型一般状况aP 0.05 vs阴性对照. 表 2MMP2,MMP9在肝癌组织中的表达（略）aP 0.05 vs阴性对照.3讨论HCC的高复发高转移特性严重影响 HCC的远期疗效,部分肿瘤在体积很小时就已发生远处转移，临床就诊者多属中晚期，因此如何控制 HCC的高侵袭性，降低复发率和转移率是当今治疗 HCC的重点. SS及其类似物对肿瘤的抑制作用近来受到关注. Oct 为人工合成的生长抑素类似物，临床上发现 Oct对多种实体肿瘤存在抑制作用，包括胃癌，肺癌，胰腺癌等2. 随着临床研究
