1、一些固定剂的配方及性能介绍固定，就是用某种方法以最快的速度将细胞杀死并保持组织及细胞原有的形态结构及其组成。固定在组织制片中极为重要，因为机体死后血液循环停止，细胞逐渐死亡，如不立即处理，则细胞内的酶（水解酶）会使蛋白质分解为氨基酸渗出细胞，使细胞溶解破坏，组织变形，在无冰藏的条件下，更可因其病原微生物的迅速繁殖而腐败，组织结构破坏，不利于形态学的诊断。组织固定的目的为 1、迅速防止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，以保持和细胞与正常生活时的形态相似；2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶解物质，以保持它原有的结构与生活时相仿；3、使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的
2、折光率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察； 4、固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度，便于制片；5、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有的形态结构；经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辨认。为了能够达到固定的目的，固定剂必须具备以下的性质和条件：1、迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织细胞形态不至于有较大变化；2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定；3、使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变；4、在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理，而使固定后的原生质变形；5、尽可能避免使组织膨胀或收缩（
3、不致改变原生质原来的体积）；6、能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或沉淀下来； 7、增加细胞内含物的折光度，易于鉴别，增加媒染作用和染色作用；8、使细胞变硬，适于切片，但又不使材料太坚硬或松脆；9、使组织充分固定，便于保存。 12下面我们介绍中华医学会病理分会推荐的几种常用固定剂的性能 3：1、 4%中性甲醛（10%中性福尔马林）固定液配方：甲醛（40%）100ml，无水磷酸氢二钠 6.5g，磷酸二氢钠 4.0g，蒸馏水 900ml。福尔马林不能使蛋白质及核蛋白凝固，但能保存脂类，可用于高尔基体、线粒体的固定，是糖的保护剂。对大多数抗原物质保存较好，对细胞膜的通透性有影响，可能使某些大分子抗原失去
4、活性。福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩较少。2、乙醇-甲醛（酒精-福尔马林，AF）固定液配方：甲醛（40%）100ml，95%乙醇 900ml。酒精可以凝固蛋白质，但不能沉淀核蛋白，能溶解大部分脂类。酒精渗透速度快，胶水性强。除了固定作用外，还具有硬化和脱水作用。缺点是渗透力差，能使组织收缩，易挥发，容易吸收空气中的水分。酒精是一种还原剂，能被氧化成醋酸，不能与铬酸、锇酸及重铬酸钾等氧化剂配合成固定剂。AF 液兼有脱水作用，对皮下组织中肥大细胞固定好。3、Carnoy 固定液配方：无水乙醇 60ml，氯仿 30ml，冰醋酸 10ml。醋酸，又称乙酸、冰醋酸。固定组织常用 5%的溶液，能沉
5、淀核蛋白，不能沉淀白蛋白、球蛋白，不能保存糖，也不能固定脂质，可使染色体保存较好。其穿透力强，渗透快。其缺点是使组织膨胀，特别对胶原纤维及纤维蛋白，高浓度的醋酸易破坏线粒体和高尔基体。Carnoy 液能固定胞浆和胞核，尤其适宜于染色体等。常用于粮原及尼氏体的固定，对显示 DNA、RNA 的效果好。固定液可防止乙醇的硬化及收缩作用，增加渗透力，特别适合外膜致密不易透入的组织。4、Zenker 固定液配方：升汞 5.0g，重铬酸钾 2.5g，硫酸钠 1.0g，蒸馏水 100ml。升汞（HgCl 2），能使蛋白质及核酸沉淀，对脂类及多糖无固定作用，也不破坏脂类及多糖。其渗透速度快，穿透力较弱，对组织
6、收缩较小。组织固定后染色质强烈与碱性染料结合，胞质内的结构也能被酸性或碱性染料着色。重铬酸钾是强氧化剂，和合固定材料的浓度为 1-3%，本身不能沉淀蛋白质，但可使蛋白质产生沉淀，未酸化的虽不能沉淀蛋白质，但可使蛋白质变为不溶性，保持与生活状态相仿，能固定类脂体，所以可以固定高尔基体、线粒体、脂肪，能溶解染色体，所以对核染色不良。酸化的使胞质及胞核沉淀呈网状，保存染色体，破坏线粒体。Zenker 固定液能使细胞核和细胞浆染色较为清晰。对细胞质固定好，显示某些细胞质内特殊颗粒有独特优越性，对胰岛和垂体前叶各种细胞的显示效果好，对骨髓等造血器官的固定效果好，红细胞可得到良好保存，对心肌的闰盘保存也有
7、良好效果。5、Bouin 固定液配方：饱和苦味酸水溶液（约 1.22%）75ml，甲醛（40%）25ml，冰醋酸 5ml。苦味酸适合固定材料的浓度为饱和水溶液，能沉淀蛋白，对脂类无作用，不能固定多糖，渗透力弱，对组织收缩明显，不使组织硬化，固定组织容易着色。Bouin 固定液渗透力强，对组织固定均匀且收缩小，染色效果好，核着色鲜明，但细胞质着色差。用于固定大多数器官和组织，适用于结缔组织染色。6、B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：无水醋酸钠 1.25g，升汞 6.0g，蒸馏水 90ml，使用前加入甲醛 10ml。此液临时配制，适于固定胰腺组织，对鉴别胰岛细胞较好。7、丙酮固定液丙酮能使蛋白质沉
8、淀，对多糖无固定作用，对核固定欠佳，渗透力强，使组织剧烈收缩。易挥发，易燃。广泛用于酶组织化学方法中各种酸的固定。在工作及实验中我们也可能用与下面一些固定液 4：1、 Altmann 液 配方：5%重铬酸钾水溶液 10ml，2%锇酸水溶液 10ml。用于固定线粒体，脂肪和白细胞。2、 Aoyama 液 配方：氯化镉 1g，甲醛 15ml，蒸馏水 85ml。适宜于固定高尔基复合体。3、 Champy 液 配方：3%重铬酸钾 70ml，1%铬酸 70ml，2%锇酸 40ml。用于固定线粒体和高尔基复合体。4、 Dafano 液 配方：硝酸钴 1g，甲醛 15ml，蒸馏水 100ml。用于固定高尔基
9、复合体。5、 ECD-G 液 配方：0.05mol/L PB 500ml，0.01mol/L PBS 500ml，Tris14g，浓盐酸少许，ECD10g，25%戊二酫 3.5ml。对蛋白质的固定有良好作用，用于培养细胞免疫细胞免疫电镜的良好固定液。6、 Flemming 液 配方：强渡：1%铬酸水溶液 75ml，2%锇酸水溶液 20ml，冰醋酸 5ml。弱本 1%铬酸水溶液 25ml，1%冰醋酸（用前加入）10ml，蒸馏水 60ml。适宜于高尔基复合体和线粒体的固定，强液用于固定脂肪组织。7、 Goldsmith 液 配方：1%铬酸水溶液 15ml，2%重铬酸水溶液 4ml，冰醋酸 1ml。
10、对鸟类胚胎固定佳。8、 Heidenhain 液 配方：升汞 4.5g，氯化钠 0.5g，蒸馏水 80ml，三氯醋酸 2g，冰酸酸 4ml，甲醛 20ml。对含较厚角质层的组织固定较好，如皮肤，蛔虫、昆虫幼虫等。9、 Houseby 液 配方：甲醛 10ml，蒸馏水 90ml，对苯二酚 7g。对细胞质的微细结构保存好。10、 Kanovsky 液 配方：25%戊二醉醛 10ml，40%甲醛 5ml，0.2mol/L 二甲胂酸钠缓冲液 49ml，无水氯化钠 50mg，蒸馏水 33.5ml。适用于免疫电镜标本的固定，对细胞抗原性和细胞微结构的保存比用戊二酫好。11、 Maximow 液 配方：重铬
11、酸钾 2.5g，升汞 5g，蒸馏水 100ml，中性甲醛 10ml。此液用甲酫代替 Zenker 液中的冰醋酸，对细胞质固定好，也可用于造血器官等组织的固定。12、 Methacarn 液 配方：甲醇 60ml，氯仿 10ml，醋酸 10ml。适用于某些癌基因蛋白质产物和一些抗原的固定，如 P53，PCNA 的固定。13、 Romeis 液 配方：升汞饱和水溶液 50ml，5%三氯醋酸水溶液 40ml，甲醛 10ml(用时加入)。可作为一般固定液应用，也可用于其他固定液固定后的再固定。有利于 Heidenhain 钱苏木精染色，有后媒染作用。14、 Rossman 配方：无水乙醇苦味酸饱和液
12、90ml，甲醛 10ml。对糖原固定好。15、 Verhoeff 液 配方：甲醛水溶液 10ml，95%酒精 48ml，蒸馏水 36ml，苦味酸 1g。用于固定眼球。16、 4%对苯醌 配方：对苯醌 4g，0.05mol/L PBS 100ml。对抗原保存好，但对细胞超微结构有影响，一般应与醛类固定液混合使用。17、 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.3）配方：多聚甲醛 40g，0.1mol/L 磷酸缓冲液 1000ml。该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定 224h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。18、 PLP
13、 液（过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液 配方：过碘酸钠，赖氨酸盐酸盐（或盐酸赖氨酸），多聚甲醛，蒸馏水。配制方法：（1）贮存液 A（0.1mol/L 赖氨酸-0.5mol/l Na3PO 4,pH7.4）：称取赖氨酸盐酸盐 1.827g 溶于 50ml 蒸馏水中，得 0.2mol/L 的赖氨酸盐酸盐溶液，然后加入 Na2HPO4至 0.1mol/L，将pH 调至 7.4，补足 0.1mol/L 的 PB 至 100ml，使赖氨酸浓度也为0.1mol/L,4冰箱保存，最好两周内使用。此溶液的渗透浓度为300mOs mmol/L/kg。（ 2）贮存液 B（8%多聚甲醛溶液）：称 8g多聚甲醛加入
14、100ml 蒸馏水中，配成 8%多聚甲醛液（方法见前）。过滤后 4冰箱保存。（3）临用前，以 3 份 A 液与 1 份 B 液混合，再加入结晶过碘酸钠（NaIO 4），使 NaIO4终浓度为 2%。由于AB 两液混合，pH 从约 7.5 降至 6.2，故固定时不需再调 pH 值。固定时间为 618h。该固定剂较适于富含糖类的组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。其机制是借助于过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基，通过赖氨酸的双价氨基与醛基结合，从而与糖形成交联。由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成，抗原决定簇位于蛋白部分，故该固定剂有选择性地使糖类固定，这样既稳定了抗原，又不影响其在
15、组织中的位置关系。19、 甲 醛 -醋 酸 钠 （ 钙 ） -升 汞 液 配 方 ： 甲 醛 10ml，醋 酸 钠 或 醋 酸 钙 2g， 升 汞 6g， 蒸 馏 水 90ml。 用 于 固 定 胰 腺组 织 ， 对 鉴 别 胰 岛 细 胞 效 果 好 。20、 甲 醛 -钙 液 配 方 ： 甲 醛 10ml， 无 水 氯 化 钙 1g，蒸 馏 水 90ml。 特 别 适 用 于 固 定 脂 肪 组 织 和 组 织 化 学 染 色 。21、 甲 醛 -生 理 盐 水 配 方 ： 甲 醛 10ml， 生 理 盐 水 90ml。 就 用 广 泛 的 一 种 固 定 液 ， 可 保 护 脂 类 和 细 胞 核 。 在 酸 性 染色 或 三 重 染 色 之 前 可 作 二 次 固 定 。22、 甲 醛 -溴 化 铵 液 配 方 ： 甲 醛 15ml， 溴 化 铵 2g，蒸 馏 水 85ml。 为 脑 组 织 的 良 好 固 定 液 ， 可 用 于 镀 银 和 镀 金 染色 。23、 乙 醚 -洒 精 液 配 方 ： 95%洒 精 49.5ml， 乙 醚 49.5ml， 冰 醋 酸 1ml。 固 定 液 渗 透 性 强 ， 固 定 效 果 好 ， 用 于 细 胞涂 片 等 固 定 。
