1、 2009 年第 67 卷 化 学 学 报Vol. 67, 2009 第 14 期 , 1603 1608 ACTA CHIMICA SINICA No. 14, 1603 1608 * E-mail: Received March 2, 2009; revised April 5, 2009; accepted May 7, 2009. 国家自然科学基金 (Nos. 20603008, 20873037)和湖南省自然科学基金 (No. 06JJ3006)资助项目 研究论文 SERS 标记的金纳米棒探针用于免疫检测 郭红燕 芦玲慧 吴 超 潘建高 胡家文*(湖南大学化学生物传感与计量学国家重
2、点实验室 生物医学工程中心 化学化工学院 长沙 410082) 摘要 报道了基于金纳米棒表面增强拉曼散射 (SERS)的免疫检测 . 将拉曼活性分子对巯基苯甲酸吸附于金纳米棒表面 , 制备出 SERS 标记的金纳米棒探针 . 该探针和蛋白抗体结合形成 SERS 标记抗体 . 通过 SERS 标记抗体、待测抗原和俘获抗体 (固体基底上修饰的抗体 , 即俘获抗体 )之间的免疫应答反应 , 将金纳米棒探针组装到固体基底上 , 形成SERS 标记抗体-抗原-俘获抗体 “三明治”夹心复合体 . 待测抗原浓度越大 , 固体基底上俘获的金纳米棒探针的数目越多 , 从而可通过 SERS 信号的强弱来检测待测抗
3、原的浓度 . 由于金纳米棒的表面等离子体共振 (SPR)峰位置可以在较宽的范围内调控 , 可通过激发光和 SPR的耦合来提高 SERS信号 , 从而提高免疫检测的灵敏度 . 单组分抗原可检出的浓度范围高于 1 10 8mg/mL. 关键词 金钠米棒 ; 巯基聚乙二醇 ; 对巯基苯甲酸 ; 免疫分析 ; 表面增强拉曼散射 SERS Tagged Gold Nanorod Probes for Immunoassay Application Guo, Hongyan Lu, Linghui Wu, Chao Pan, Jiangao Hu, Jiawen*(State Key Laboratory
4、 for Chemo/Biosensing and Chemometrics, Biomedical Engineering Center, and College of Chemistry and Chemical Engineering, Hunan University, Changsha 410082) Abstract An immunoassay detection based on surface-enhanced Raman scattering (SERS) from gold nanorods (NRs) was studied. Raman active molecule
5、 4-mercaptobenzoic acid was adsorbed on gold NRs, forming SERS-tagged gold nanoprobes. Upon adsorption of antibody to the nanoprobes, the antibody was tagged by SERS. Through the immunoassay reactions among the SERS-tagged antibody, detected antigen, and antibody supported on solid substrate (captur
6、e antibody), SERS-tagged antibody-antigen-capture antibody sandwich conjugates were formed on the solid substrate. The higher the concentration of the detected antigen is, the larger the number of the gold nanoprobes on the solid substrate is. Therefore, SERS intensity signals the concentration of t
7、he detected antigen. Because the position of surface plasmon resonance (SPR) of the gold NRs can be tuned in a wide range, one can couple the SPR and the excitation line to maximize the SERS signals and thus the immunoassay sensitivity. The detected concentration for a single antigen component is hi
8、gher than 1 10 8mgmL 1. Keywords gold nanorod; thiolated PEG; 4-mercaptobenzoic acid; immunoassay; surface-enhanced Raman scattering 生物活性物质如抗体蛋白等 , 由于自身可检测的信号比较弱 , 难以定量分析或检测 . 为此需引入外源标记物 , 通过其强的可检测信号来定量或示踪极微量的生物活性物质1. 已有的标记免疫分析包括酶免疫分析2、 化学发光免疫分析3、 电化学免疫分析4和荧光免疫分析5等 . 其中荧光分析以其无污染性及高灵敏度等特点而被广泛应用 , 是最为
9、成熟和普及的标记技术6. 近年来 , 基于量子点荧光的生物标记技术也日益受到重视7. 但1604 化 学 学 报 Vol. 67, 2009 荧光谱峰较宽 , 信号的选择性相对较差 ; 若用荧光分子标记 , 还存在光解和光致褪色现象 , 因而荧光标记技术亦有其局限性 . 基于表面增强拉曼散射 (SERS)的 SERS标记技术是一种光谱标记技术 , 始建立于 20 世纪 80 年代末8. 它利用金或银等贵金属纳米颗粒来增强 /放大表面吸附的拉曼活性分子的拉曼信号 (即 SERS), 以拉曼活性分子的 SERS 信号作为读出示踪信号 . 近年来随着纳米科技的快速发展 , SERS 标记技术已引起了
10、国内外科学家的广泛关注9,10. 首先 , 拉曼光谱具有高度的分子特征性 , 且谱峰窄 , 能减小不同分子间的谱峰重叠 . 其次 , 在多元检测中一种波长的激发光就能激发出不同的拉曼活性分子的谱峰 . 第三 , SERS 信号很少受光漂白的影响 , 可在一定程度上为获得较好的 SERS 信号而延长积分时间 . 第四 , SERS 信号不象荧光分子那样易发生自淬灭现象 , 可通过增加拉曼活性分子数目来提高信号强度 , 从而提高免疫检测的灵敏度 . 目前 , SERS 免疫检测呈现几个基本的发展趋势11. 第一 , 如何解决 SERS 标记免疫探针在固体基底上非特异性吸附造成的“假阳性”问题 .
11、SERS 免疫检测的基本方法是标记抗体 , 待测抗原和俘获抗体之间形成“三明治”夹心结构 . 理想情况下 , 探针上的抗体通过抗体和抗原之间的特异性免疫反应连接到俘获抗体上 . 除此以外的吸附为非特异性吸附 , 由此造成假阳性和背景信号升高等 . 通常可利用牛血清白蛋白来封闭固体基底上的空位以减少非特异性吸附 . 第二 , 实现从单组分到多组分检测 . Ni 等12最早尝试了双组分检测 . 国内顾仁敖课题组13也成功地进行了二组分检测 , 并初步进行了三组分检测的尝试11. 第三 , SERS 探针的表面修饰 . SERS纳米探针的表面修饰可以减少标记分子从纳米颗粒表面脱落 , 提高信号的稳定
12、性 , 并能有效减少探针的非特异性吸附问题 . 除此以外 , 探针还应具备水溶性、抗团聚和生物亲和性的特点 . 目前 , 表面修饰的发展趋势是从第一代裸纳米颗粒探针12 15到第二代的 SiO2修饰的探针10, 再到第三代高分子包覆的纳米探针16. 我们在前期的工作中已明确 : 可将胶体的空间稳定理论作为设计制备各类纳米探针的理论依据17, 即将生物亲和性高分子吸附在纳米颗粒 /探针上 , 以其提供的空间稳定来取代探针原来的电荷稳定机制 . 由于稳定机制不同 , 高分子稳定的纳米探针可以耐受高浓度盐等苛性条件而不团聚 , 还可提供水溶性和生物亲和性等诸多优异的性能 . 第四 , 提高免疫检测的
13、灵敏度 . 由前述 SERS 免疫检测的基本方法可知 , 提高免疫检测灵敏度实际上就是要提高 SERS 信号强度 . 因此通常选择具有较大拉曼散射截面的分子作为标记分子 . 除此以外 , 另一个方案是全面借鉴 SERS 领域的研究成果 , 采用具有较强增强能力的纳米颗粒来制备探针 . 如 Porter 等18采用 60 nm的金颗粒来制备 SERS 免疫探针 . Cao 等19和徐等20,21则利用银染色技术来提高 SERS信号 . Cui等22采用表面具有孔洞的银核金壳颗纳米粒子来制备探针 . Ji 等23则采用金核银壳纳米颗粒来制备探针 , 可通过改变 Au/Ag核与壳的厚度从而获得强的
14、SERS 信号 . Sanles-Sobrido等24采用颗粒聚集体来制备探针 . 金纳米棒有着独特的光学性质 , 并且在医学、传感和化学分离等方面有很好的应用前景 , 近年来已成为人们研究的热点25. 金纳米棒有两个等离子体共振 (SPR)吸收带 : 横向 SPR 吸收峰和纵向 SPR 吸收峰 , 其中纵向等离子体吸收峰的位置可以随其长径比的增大而逐渐红移25. 金纳米棒 SPR 的这种可调性使其能作为很好的 SERS基底 . 因为按照 SERS的电磁场增强机制 , 当激发光和 SPR共振时 , 可以最大程度提高单个纳米颗粒的增强能力26. 我们最近的实验和理论计算也证实 : 当金纳米棒纵向
15、 SPR与 632.8 nm的激发光耦合时 , 其增强能力确实比耦合程度小或没有耦合时强27. 因而 , 我们制备了长径比为 2.5 的金纳米棒 , 使其纵向 SPR 和 632.8 nm的激发光耦合 . 并以此金纳米棒来制备 SERS纳米探针 , 进行 SERS 免疫检测研究 . 1 实验部分 1.1 实验试剂 氯金酸、十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB)、硼氢化钠、硝酸银、抗坏血酸 (AA)均为分析纯 , 购自上海国药集团化学试剂有限公司 . N,N-二环己基碳酰亚胺 (DCC)为分析纯 , 购自上海共价化学科技有限公司 . 对巯基苯甲酸 (MBA)、 3,3-二硫代二丙酸 (99%)、 N
16、-羟基丁二酰亚胺 (NHS)购自 Aldrich 公司 . 羊抗鼠 IgG、小鼠 IgG、牛血清蛋白 (BSA), PBS 缓冲液 (pH 7.2)购自北京鼎国生物技术有限责任公司 . -甲氧基 -巯基聚乙二醇 (mPEG-SH, MW 5000)由北京建凯科技有限公司特定合成 . 四氢呋喃 (THF)、丙酮、正己烷购自天津大茂化学试剂有限公司 . 玻璃镀金基底由中国科学院安徽光学精密机械研究所提供 . 先在清洗干净的玻璃片基底上真空镀上 Ni-Cr 层 , 其上再镀上金 . 实验用水为 Mini-Q 超纯水 , 电阻率大于 18.0 Mcm 1. 1.2 3,3-二硫代二丙酸丁二酰亚胺酯 (
17、DSP)的制备 0.4836 g 3,3-二硫代二丙酸 (2.3 mmol)溶于 50 mL THF中 , 向其中加入 0.575 g (5 mmol) NHS, 在 0 下再加入 1.03 g DCC (5 mmol), 在冰浴条件下搅拌反应 36 h. 过滤除去副产物 N,N-二环己基脲 (DCU), 将滤液旋转蒸发除去 THF. 用丙酮 /正己烷重结晶两次后得到白色固No. 14 郭红燕等： SERS 标记的金纳米棒探针用于免疫检测 1605 体 DSP. 1.3 金纳米棒的制备 实验所用的金纳米棒溶胶采用种子生长法合成28. 第一步种子的制备 : 向 7.5 mL 0.05 molL
18、1CTAB 中加入 0.12 mL 2.037 10 2molL 1HAuCl4溶液 , 轻轻摇匀 . 迅速向其中加入 0.6 mL 0.01 molL 1冰浴冷却的NaBH4溶液 , 剧烈振荡 2 min. 然后将制得的金纳米种子在 40 的水浴中静置老化 2 h 后使用 . 第二步金纳米棒的生长 : 向 30 mL 0.05 molL 1CTAB中加入 40 L 0.01 molL 1的 AgNO3溶液 , 振荡 1 min. 再向其中加入0.74 mL 2.037 10 2molL 1的 HAuCl4溶液 , 轻轻摇匀 . 然后再迅速加入 0.24 mL 0.1 molL 1的 AA 溶
19、液 , 剧烈振荡至溶液变为无色 . 最后加入 0.3 mL 上述金种子 , 轻轻振荡 2 min 后 , 静置 3 h, 让金种子生长成金纳米棒 . 离心 (10000 rmin 1, 12 min)洗涤金纳米棒两次后 , 将纯化后的金纳米棒分散在超纯水中备用 . 1.4 免疫金纳米棒探针的制备 向以上合成的 1 mL 金纳米棒溶胶中加入 10 L 1.0 10 3molL 1MBA, 反应 4 h, 让拉曼活性分子 MBA充分吸附到金纳米棒上 . 在这一步中要仔细控制加入MBA 的量 , 使之只部分占据金纳米棒表面 (约占据 1/2), 为后续抗体吸附预留足够的空位 . 然后向吸附 MBA
20、分子的金纳米棒溶胶中加入过量羊抗鼠 IgG(2 mgmL 1, 分散于 0.01 molL 1, pH 7.2的 PBS缓冲溶液中 ), 室温下反应 1 h. 再向其中加入 6 L 3.425 10 4molL 1的mPEG-SH 来封闭金纳米棒表面剩余空位 . 为防止游离的 MBA、 羊抗鼠 IgG 和 mPEG-SH 的干扰 , 将制备好的免疫金纳米棒探针从溶液中离心分离出来 , 再重新分散在超纯水中备用 . 1.5 SERS 标记抗体 -待测抗原 -俘获抗体“三明治”结构的组装 玻璃镀金基底在使用前依次在超纯水、 乙醇、 丙酮、氯仿、 丙酮、 乙醇和超纯水中超声洗涤 5 min, 烘干后
21、放入 1 10 4molL 1的 DSP 乙醇溶液中 , 室温下浸泡 12 h. 用乙醇洗去基底表面未吸附的 DSP 后 , 氮气吹干 . 将 DSP 修饰的镀金片放入 0.05 mgmL 1羊抗鼠 IgG PBS 缓冲溶液中 , 于 4 下放置 12 h. 用 PBS 缓冲液冲洗基底 , 除去未吸附的抗体 . 再将其浸入 2%的 BSA 溶液中 , 4 下放置 1 h, 封闭表面剩余空位 , 以减少非特异性吸附 . 用大量 PBS 缓冲液清洗基片 , 然后保存在 4 下的 PBS 缓冲溶液中 . 将基片氮气吹干后放在 200 L 不同浓度的小鼠IgG PBS 缓冲溶液 (0.01 molL
22、1, pH 7.2)中振荡 2 4 h. 取出后先用大量的 PBS 缓冲溶液充分冲洗基底 , 再用超纯水冲洗 , 并用氮气吹干 . 将小鼠 IgG 修饰的基底浸入标记免疫金纳米棒溶胶中 , 室温下放置 6 h. 取出基底 , 用超纯水充分冲洗后用氮气吹干 , 形成“三明治”夹心结构备用 . 1.6 测试仪器 金纳米棒粒子的形貌表征在 JEM-1230 型 (JEOL 公司 )透射电镜 (TEM)上进行 . 紫外-可见光谱在 UV2300型 (上海天美科学仪器有限公司 )光谱仪上进行 . 基底表面形貌在 JSM-6700F 扫描电子显微镜 (SEM)上进行 . 水力半径在 Zetasizer 3
23、000HS 型 (英国 Malvern 公司 )Zeta电位粒度仪上测定 . SERS 光谱在共焦显微拉曼光谱仪LabRAM HR(法国 Jobin Yvon公司 )上进行 . 激发波长为632.8 nm, 所有光谱均为一次 10 s 积分时间采集 . 2 结果与讨论 2.1 免疫金纳米棒探针的制备和表征 图 1a 为按种子生长法28合成的金纳米粒子的 TEM图 . 由图可见 , 除少数近似为球形的粒子难以从溶胶中离心分离以外 , 绝大多数金纳米粒子为棒状 . 统计约150 个纳米棒 , 计算出其平均长径比 (棒长轴与短轴之比 )约为 2.5. 通过电感耦合等离子体 (ICP)可以测出金纳米棒
24、溶胶中金元素的含量 . 再根据 TEM 图 , 把纳米棒看成一个两端分别为半球状的圆柱体 . 从而计算出溶液中金纳米棒的粒子数密度为 1.12 1012个 /mL. 单个标记分子 MBA所占据的面积约为 20 229. 据此可估算出所需加入 MBA 的量 , 使其约占据金纳米棒表面积的1/2, 以便留出足够的空位来吸附抗体 . 图 1b 为依次吸附 MBA 和抗体后的金纳米棒的 TEM 图 , 和图 1a 相比 , 金纳米棒之间的距离增大 , 溶胶的分散性有了明显改善 . 这是由于大分子蛋白质体积较大 , 当它通过静电 /化学键吸附到金纳米棒上时 , 可能会通过空间位阻阻碍棒与棒之间进一步接近
25、 . 图 1c 为依次吸附 MBA 和抗体 , 表面空位再用 mPEG-SH封闭后的金纳米棒探针的形态 . 由图可看出其分散性有了进一步改善 . 在制备探针时 , 通常也是采用 BSA 来封闭探针颗粒表面的空位 , 以减少探针与固体基底表面的非特异性吸附18. 由于 PEG 链节是不带电的中性基团 , 对蛋白有很强的抗吸附能 力30. 如 Kim 等31将 PEG 接枝到生物素修饰的聚赖氨酸上 , 有效抑制了聚赖氨酸对蛋白的非特异性作用 . 其次 , mPEG-SH 比 BSA 体积小 , 能更有效地封闭空位 . 故我们采用 mPEG-SH 来封闭空位 , 以降低探针的非特异性吸附 . mPE
26、G-SH 以巯基基团吸附到金纳米颗粒表面 , 其直链 PEG 链节则向外伸展到溶液中 . 显然 , 如果PEG 链的长度比探针上吸附的抗体的直径大 , 则会干扰1606 化 学 学 报 Vol. 67, 2009 抗体与待测抗原的结合 . 为此 , 我们采用 mPEG-SH 和抗体分别单独修饰 70 nm 金溶胶 , 并测量其水力半径 . 结果显示 PEG 修饰的金纳米粒子水力半径增大了约 9 nm, 而抗体修饰的金纳米粒子则增大了 50 200 nm 以上 . 说明用 mPEG-SH 封闭空位不会干扰探针上的抗体与溶液中待测抗原的结合 . 图 1 纯态金纳米棒 (a)、 MBA 和羊抗鼠 I
27、gG 修饰的金纳米棒(b)和 MBA, 羊抗鼠 IgG 和 mPEG-SH 修饰的金纳米棒 (c)的TEM 图 Figure 1 TEM images of pure gold nanorods (a), MBA and goat anti-mouse IgG modified gold nanorods (b), and MBA, goat anti-mouse IgG, and mPEG-SH modified gold nanorods (c) 由于 SERS 免疫检测的基本方法是将 SERS 免疫探针与俘获抗体通过待测抗原组装成“三明治”式的夹心结构 , 探针 SERS 信号的强弱反映
28、待测抗原浓度的高低 . 因而 , 探针在制备过程中和在“三明治”夹心结构中应保持分散态 , 避免团聚 . 如果探针纳米颗粒团聚 , 则探针之间的耦合会进一步提高 SERS 信号强度26, 造成“假阳性” , 即待测抗原浓度出现正偏差 . 我们利用紫外-可见吸收光谱来监测探针制备过程 . 图 2 曲线 a 为纯态金纳米棒溶胶的紫外-可见吸收光谱 . 金纳米棒的紫外-可见吸收谱有两个 SPR 共振吸收带 : 位于低波数段的横向 SPR 吸收峰和位于长波数处的纵向 SPR 吸收峰25. 通过增大长径比 , 可将金纳米棒纵向SPR 峰位置从可见光区调至近红外光区 . 我们在以前的工作中证实 : 纵向
29、SPR 与 632.8 nm 的激发光耦合程度越大 , SERS 信号越强27. 本实验中就选用长径比为 2.5的金纳米棒 , 通过其 SPR和拉曼光谱仪 632.8 nm的激光耦合来提高 SERS 信号 . 图 2b, 2c 和 2d 显示 , 金纳米棒上依次吸附 MBA、 抗体和 mPEG-SH 后 , 其纵向峰 SPR峰位置稍红移 . 但在长波数方向没有出现新的聚集体的吸收峰 , 说明无团聚现象 . 图 2e 是离心清洗后的免疫探针 (除去未吸附的杂质 )的紫外-可见光谱 . 离心后弃去上层清液会损失一部分金纳米棒 , 导致纵向 SPR吸收峰的强度降低 . 同时纵向和横向 SPR吸收峰强
30、度的比例比离心前有所下降 , 其原因尚不清楚 . 若免疫探针发生团聚 , 则在纵向 SPR 长波数方向出现明显的新吸收峰 , 因而从图 2e 可判断免疫探针没有团聚 . 我们在实验中仔细控制探针的制备条件 , 并采用紫外-可见光谱监测 , 选用非团聚的探针用于后面的免疫检测 . 图 2 纯态金纳米棒 (a), MBA 修饰的金纳米棒 (b), MBA 和羊抗鼠 IgG 修饰的金纳米棒 (c), MBA, 羊抗鼠 IgG 和 mPEG-SH修饰的金纳米棒 (d)和 (d)中的金纳米棒经离心清洗后重新分散在超纯水中 (e)的紫外-可见光谱 Figure 2 UV-vis spectra of pu
31、re gold nanorods (a), MBA modified gold nanorods (b), MBA and goat anti-mouse IgG modified gold nanorods (c), MBA, goat anti-mouse IgG, and mPEG-SH modified gold nanorods (d) and the gold nanorods that were centrifugation-purified from (d) and then redispersed in ultrapure water (e) 2.2 “三明治 ”结构的表面状
32、态表征和 SERS 免疫检测 我们采用 DSP 来修饰镀金基底 . 它通过二硫键断裂 , 形成 Au-S 键组装在金基底上 . 其活性酯键则可以和抗体上的 NH2反应 , 从而将抗体组装在金基底上 . 用No. 14 郭红燕等： SERS 标记的金纳米棒探针用于免疫检测 1607 DSP 处理的基底有利于抗体在基底表面的直立排列 , 从而更好地捕捉待测抗原 . 图 3a 是抗体修饰后的金基底 , 图中插图是未经任何修饰的空白基底 . 图 3b 是俘获抗 图 3 DSP-抗体修饰的金基底 (图中插图是空白的金基底 )(a), DSP-抗体-抗原修饰的基底 (b), 抗原浓度为 10 4mgmL1
33、时“三明治”结构 (图中插图是抗原浓度为 0 时的情况 ) (c)和抗原浓度为 1 10 mgmL 1时“三明治”结构的 SEM 图 (d) Figure 3 SEM images of (a) DSP-goat anti-mouse IgG modified gold substrate (the inset is the SEM image of bare Au substrate without any modification), (b) DSP-goat anti-mouse IgG-mouse IgG modified gold substrate, (c) sandwich st
34、ructure assembled at mouse IgG concentration of 1 10 4mgmL 1(the inset shows the SEM image for the case without addition of mouse IgG), and (d) sandwich structure assembled at mouse IgG concentration of 1 10 mgmL 1体 (即修饰在金基底上的抗体 )和抗原反应后基底的SEM 图 . 由图可见 , 抗原在金基底上呈岛状分布 . 图 3c 和 3d 是经免疫反应组装出的 “三明治” 夹心结构
35、的 SEM图 . 当无抗原时 , 金基底上几乎看不到金纳米棒探针(图 3c 中插图 ), 说明非特异性吸附不明显 . 随着抗原浓度的增加 , 金基底上开始出现金纳米棒探针 (图 3c). 在高浓度抗原条件下 , 探针在基底上的数目较多 , 分布比较均匀、分散 , 较大程度上减少了棒与棒之间的聚集 /耦合 (图 3d). 图 4 是镀金基底上组装的 SERS 标记抗体-待测抗原-俘获抗体“三明治”夹心结构的 SERS 光谱图 . 实验中采用一系列不同浓度的待测抗原来组装“三明治”夹心结构 . 从图中可看出 , 随着抗原浓度的增大 , MBA 的SERS信号逐渐增强 . 因而 , SERS信号变化
36、说明抗原-抗体的结合属于特异性吸附 . 与 SEM观察一致 , 当抗原浓度为 0, 图中的 SERS 信号很弱 . 说明用 mPEG-SH 封闭探针表面剩余空位 , 确实可以有效抑制非特异性吸附 . 在同样的实验条件下 , 当用 BSA 封闭空位的探针做检测时 , 其非特异性吸附要强一些 . 这可能是由于 BSA 表面有大量的官能团可与基底作用 . 图 5 是 SERS 峰 1073 cm 1的积分面积与抗原浓度的关系图 . 由图可见 , 能检出的抗原浓度范围高于 1 10 8mgmL 1. 图 4 不同浓度小鼠 IgG 组装出的“三明治”结构的 SERS 光谱 Figure 4 SERS s
37、pectra of the sandwich structures assembled at varying mouse IgG concentrations 3 结论 我们以具有较大拉曼散射截面的对巯基苯甲酸作为 SERS 标记分子 , 以金纳米棒来制备免疫探针 , 制得了 SERS 标记抗体-待测抗原-俘获抗体的“三明治”夹 1608 化 学 学 报 Vol. 67, 2009 图 5 SERS 信号强度与抗原浓度的关系图 Figure 5 Integrated SERS intensity of the peak at 1073 cm 1as a function of mouse Ig
38、G concentration 心结构 . 通过金纳米棒的 SPR 和激发光的耦合来优化SERS 信号 , 单组分抗原的 SERS 免疫检测浓度范围高于 1 108mg/mL. References 1 Diamandis, E. P.; Christopoulos, T. K. In Immunoassay, Eds.: Diamandis, E. P.; Christopoulos, T. K., Academic Press, San Diego, CA, 1996. 2 Duan, C. M.; Meyerhoff, M. E. Anal. Chem. 1994, 66, 1369.
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