1、P o u l t r y S c i e n c e收 稿 日 期 : 2 0 0 7 - 0 2 - 2 0鸡 卵 黄 抗 体 ( I g Y ) 是 极 具 开 发 潜 力 的 抗 体 资 源 。自 从 1 9 8 3 年 , K l e m p e r e r 首 次 报 道 鸡 蛋 中 存 在 抗 体以 来 , 人 们 对 卵 黄 抗 体 ( I g Y ) 的 研 究 越 来 越 多 , 认 识越 来 越 深 入 , 应 用 亦 日 益 广 泛 。 母 鸡 受 免 疫 刺 激 后产 生 免 疫 反 应 , 在 输 卵 管 内 卵 黄 成 熟 期 , 血 液 中I g G 可 被 选
2、 择 性 地 转 移 至 卵 黄 中 , 并 且 成 为 卵 黄 中唯 一 的 免 疫 球 蛋 白 类 1 , 这 种 由 血 液 转 移 入 卵 黄 液的 I g G 类 抗 体 即 为 卵 黄 抗 体 ( Y o l k I m m u n o g l o b u -l i n , I g Y ) 。 它 是 一 种 7 S 免 疫 球 蛋 白 , 分 子 量 约 为1 8 0 k D a , 含 两 个 亚 单 位 , 即 6 7 7 0 k D a 的 重 链 和 2 2 3 0 k D a 的 轻 链 2 。 卵 黄 中 I g G 的 含 量 等 于 甚 至 要 高于 母 鸡 血
3、清 中 的 I g G 。 卵 黄 作 为 特 异 性 抗 体 的 来 源有 许 多 优 点 , 如 : 母 鸡 易 于 饲 养 , 费 用 不 高 , 收 集 鸡蛋 方 便 , 无 须 抽 取 动 物 血 液 , 无 损 伤 , 符 合 现 代 动 物保 护 规 则 ; 产 生 有 效 的 抗 体 反 应 所 需 抗 原 量 小 ; 在国 内 , 鸡 是 率 先 实 现 S P F 化 和 产 业 化 的 实 验 动 物 ,有 利 于 规 模 化 生 产 ; 禽 类 与 以 人 为 代 表 的 哺 乳 动 物亲 缘 关 系 较 远 , 有 利 于 疾 病 控 制 , 用 鸡 生 产 人 用
4、的免 疫 球 蛋 白 , 不 会 将 导 致 人 类 疾 病 的 病 原 微 生 物 引入 到 病 人 的 体 内 , 可 以 解 决 治 疗 上 的 后 顾 之 忧 。1 提 取 与 纯 化近 二 十 几 年 来 , 已 建 立 了 许 多 较 为 高 效 而 经 济的 方 法 , 如 盐 析 、 乙 醇 和 聚 乙 二 醇 沉 淀 法 、 疏 水 层 析法 、 辛 酸 沉 淀 法 ( C A 法 ) 等 。 产 量 约 为 每 毫 升 卵 黄 提取 I g Y 5 7 1 5 m g , 纯 度 8 7 % 8 9 % 。 此 外 , 其 它 应 用于 多 克 隆 抗 血 清 制 备 的
5、方 法 也 皆 可 用 于 I g Y 的 制备 。 值 得 一 提 的 是 , 要 纯 化 卵 黄 抗 体 , 单 采 用 一 种 方法 往 往 是 不 够 的 , 常 需 将 多 种 方 法 综 合 应 用 。1 . 1 方 法1 . 1 . 1 盐 析 法 盐 析 破 坏 蛋 白 质 的 水 化 层 , 使 疏 水基 团 暴 露 , 蛋 白 质 的 可 溶 性 随 着 盐 浓 度 的 增 加 呈 对数 下 降 , 蛋 白 质 很 容 易 沉 淀 析 出 。 采 用 盐 析 技 术 提 取和 浓 缩 I g Y 是 一 个 简 单 温 和 的 方 法 。 虽 然 分 离 率 不高 , 但
6、适 用 于 大 量 生 产 , 而 且 价 值 便 宜 , 特 别 适 用 于纯 化 流 程 的 前 期 的 最 终 的 浓 缩 。中 图 分 类 号 : S 8 5 2 . 3 1 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 : 1 6 7 3 - 1 0 8 5 ( 2 0 0 7 ) 0 3 - 0 0 4 1 - 0 3卵 黄 抗 体的 提 纯 及 应 用朱 晓 东1, 陈 大 健2, 郭 永 刚3, 郝 智 慧2, 周 颖 斌2( 1 . 江 苏 京 海 禽 业 集 团 有 限 公 司 , 江 苏 南 通 2 2 6 1 0 3 ; 2 . 青 岛 六 和 药 业 有 限 公 司 ;
7、3 . 郑 州 牧 业 工 程 高 等 专 科 学 校 )摘 要 : 卵 黄 抗 体 因 具 有 价 格 便 宜 、 制 备 方 便 等 其 它 抗 体 无 可 比 拟 的 优 点 , 而 成 为 当 今 生 物 科 学领 域 研 究 的 一 个 热 点 。 卵 黄 抗 体 已 被 越 来 越 广 泛 地 应 用 于 许 多 疾 病 , 尤 其 是 家 禽 传 染 病 的 防 治 , 并 获得 了 显 著 的 效 果 。 此 外 , 它 还 被 应 用 于 免 疫 学 技 术 和 疾 病 的 监 测 等 方 面 , 显 示 出 多 方 面 的 应 用 价 值 。 本文 对 其 提 纯 方 法
8、及 应 用 作 一 综 述 。关 键 词 : 卵 黄 抗 体 ; 提 纯 ; 应 用!作 用 随 着 锌 添 加 水 平 的 上 升 而 增 强 。 对 饲 料 转 化 比而 言 , 添 加 蛋 氨 酸 锌 5 0 m g / k g 时 达 到 最 佳 ; 添 加 效果 在 饲 养 前 、 中 期 优 于 后 期 , 这 可 能 是 由 于 肉 鸡 处在 不 同 生 长 阶 段 , 机 体 对 锌 的 需 要 量 和 调 节 能 力 存在 差 异 。鸡 体 内 某 种 微 量 元 素 的 缺 乏 、 适 当 和 过 量 时 ,对 相 应 元 素 的 利 用 效 率 不 同 。 体 内 某 种
9、 微 量 元 素 缺乏 时 , 相 对 应 的 微 量 元 素 的 利 用 率 会 升 高 , 从 而 缩小 了 有 机 微 量 元 素 与 相 应 无 机 微 量 元 素 之 间 的 差距 ; 反 之 , 体 内 某 种 微 量 元 素 过 量 时 , 相 对 应 的 元 素的 利 用 率 会 下 降 , 可 能 更 容 易 比 较 有 机 微 量 元 素 与无 机 盐 之 间 的 差 距 。综 上 所 述 , 微 量 元 素 氨 基 酸 螯 合 物 在 肉 鸡 养 殖业 上 具 有 明 显 的 效 果 , 是 一 种 具 有 广 阔 发 展 前 景 的营 养 性 饲 料 添 加 剂 。 应
10、 该 加 强 研 制 开 发 工 作 , 改 进生 产 工 艺 , 降 低 生 产 成 本 , 提 供 质 优 价 廉 产 品 , 探 讨理 想 添 加 水 平 和 影 响 因 素 , 加 强 推 广 应 用 工 作 , 促进 养 鸡 业 的 健 康 迅 速 发 展 。 综 述4 1家 禽 科 学 2 0 0 7 . 31 . 1 . 2 乙 醇 和 聚 乙 二 醇 沉 淀 法 乙 醇 与 水 有 很 强的 结 合 力 。 在 蛋 白 质 溶 液 中 加 入 乙 醇 , 可 以 破 坏 水化 层 暴 露 疏 水 性 氨 基 酸 残 基 , 引 起 蛋 白 质 沉 淀 , 特别 在 等 电 点
11、条 件 下 , 沉 淀 更 快 速 完 全 , 是 实 验 室 制备 I g Y 的 常 用 方 法 3 。 聚 乙 二 醇 ( P E G ) 是 非 离 子 型水 溶 性 聚 合 物 , 有 很 强 的 亲 水 性 , 即 使 浓 度 很 高 也不 会 引 起 蛋 白 质 变 性 , 沉 淀 蛋 白 质 的 时 间 比 硫 酸 铵或 乙 醇 都 短 , 不 影 响 离 心 处 理 , 并 有 促 进 蛋 白 质 结晶 的 作 用 , 用 P E G 6 0 0 0 沉 淀 卵 黄 的 抗 体 蛋 白 , 1 4 %的 P E G 可 使 I g Y 沉 淀 4 。 此 外 , 还 有 硫
12、酸 葡 聚 糖 法( D S 法 ) 5 、 海 藻 酸 钠 法 ( S D 法 ) 6 及 黄 胶 原 法 ( X a n法 ) 5 等 方 法 。 因 这 些 方 法 的 原 理 与 聚 乙 二 醇 相 似( 都 可 以 破 坏 水 化 层 ) , 这 里 就 不 在 赘 述 。1 . 1 . 3 疏 水 层 析 法 疏 水 层 析 法 是 新 近 发 展 的 纯化 卵 黄 抗 体 的 层 析 技 术 。 将 疏 水 的 烃 基 连 接 到 亲 水多 孔 的 层 析 凝 胶 上 , 在 高 盐 浓 度 下 , 蛋 白 质 分 子 中暴 露 的 疏 水 基 因 和 凝 胶 上 的 烃 基 相
13、 互 作 用 , 吸 附 在柱 上 。 而 当 溶 液 中 盐 浓 度 降 低 , 或 改 变 p H 值 使 之偏 离 等 电 点 , 或 采 用 加 乙 醇 、 甘 油 、 聚 乙 二 醇 等 降 低洗 脱 液 极 性 , 降 低 温 度 , 加 入 去 污 剂 等 干 扰 结 合 的办 法 , 可 将 蛋 白 质 洗 脱 7 , 8 。 所 以 疏 水 层 析 是 在 高 盐条 件 下 使 蛋 白 结 合 上 柱 , 非 常 适 合 于 盐 析 后 的 卵 黄抗 体 进 一 步 分 离 纯 化 。1 . 1 . 4 辛 酸 沉 淀 法 ( C A 法 ) 9 与 前 三 种 方 法 都
14、利用 抗 体 蛋 白 的 亲 水 和 疏 水 性 不 同 , 该 法 是 利 用 抗 体蛋 白 的 化 学 性 质 进 行 分 离 和 纯 化 。 在 低 离 子 强 度 、p H 4 . 2 4 . 5 的 酸 性 条 件 下 , 辛 酸 ( C a p r y l i c A c i d ) 可与 绝 大 多 数 的 卵 黄 蛋 白 反 应 , 形 成 不 可 逆 的 沉 淀 ,唯 有 I g Y 类 抗 体 蛋 白 不 发 生 反 应 , 仍 留 在 上 清 中 ,离 心 除 去 沉 淀 , 将 上 清 的 p H 调 整 到 7 . 0 左 右 , 用硫 酸 铵 使 I g Y 析 出
15、 , 可 得 到 纯 度 8 0 % 以 上 的 I g Y ,该 法 经 济 、 简 便 、 快 速 , 不 损 害 抗 体 活 性 , 回 收 率 高 。1 . 1 . 5 亲 和 层 析 法 亲 和 层 析 法 是 一 种 利 用 抗 体蛋 白 的 生 物 学 活 性 而 进 行 分 离 纯 化 的 方 法 。 它 是 目前 纯 化 抗 体 蛋 白 质 最 有 效 的 方 法 , 又 称 免 疫 吸 附 。将 抗 原 以 稳 定 的 共 价 键 连 接 在 层 析 填 料 上 形 成 固相 化 配 体 , 在 有 利 于 配 体 结 合 的 条 件 下 加 入 样 品 ,液 相 中 相
16、应 的 I g Y 便 与 固 相 抗 原 结 合 , 吸 附 在 柱 子上 。 用 缓 冲 液 洗 去 杂 质 后 , 改 用 解 析 液 洗 脱 。 解 析 液可 使 用 较 剧 烈 的 非 特 异 蛋 白 变 型 缓 冲 液 , 如 p H 2 3的 甘 氨 酸 缓 冲 液 、 4 8 M 尿 素 、 6 M 盐 酸 胍 、 3 MN a S C N 、 3 . 5 M M g C l2等 , 使 蛋 白 构 型 改 变 破 坏 配 体间 的 结 合 , 使 用 这 类 洗 脱 方 法 要 特 别 注 意 防 止 蛋 白质 变 性 , 尽 快 中 和 或 除 去 变 型 剂 。 总 之
17、, 亲 和 层 析 可获 得 生 物 活 性 特 异 的 高 纯 度 I g Y , 甚 至 可 从 复 杂 的混 合 物 中 一 步 提 纯 目 的 I g Y 1 0 。1 . 2 各 种 综 合 提 取 方 法 的 比 较 卵 黄 抗 体 的 纯 化实 际 是 各 种 方 法 的 综 合 应 用 。 各 种 综 合 提 取 方 法 在提 取 率 、 脂 类 残 留 、 纯 度 、 安 全 性 、 经 济 、 是 否 适 用 于工 业 化 生 产 等 方 面 都 各 具 优 缺 点 。 P E G 法 、 盐 析 法产 率 低 的 原 因 是 沉 淀 抗 体 和 其 它 杂 蛋 白 时 ,
18、 抗 体 损失 较 多 , 而 采 用 水 溶 法 , 使 抗 体 尽 可 能 多 留 在 水 相中 , 去 除 沉 淀 后 , 再 用 盐 析 等 其 它 办 法 纯 化 浓 缩 , 最终 可 得 到 高 纯 度 的 I g Y 。 各 种 方 法 对 I g Y 生 物 活 性的 影 响 是 另 一 个 重 要 的 指 标 。 但 研 究 者 所 采 用 的 测定 I g Y 活 性 的 方 法 不 同 , 数 据 间 的 差 异 较 大 。 A k i t a用 免 疫 扩 散 法 ( R I D 法 ) 测 定 I g Y 活 性 , 结 果 表 明X a n 法 对 I g Y 的
19、活 性 稍 有 影 响 外 , 其 它 方 法 对 其 影响 不 大 。 在 N a C l 浓 度 大 于 1 . 5 M 时 , I g Y 会 发 生 聚合 , 从 而 影 响 抗 体 的 活 性 , 故 在 提 纯 工 艺 中 , 尽 量 避免 高 浓 度 N a C l 。 海 藻 酸 钠 是 一 种 药 用 缓 释 剂 , 所 以在 制 备 注 射 用 卵 黄 抗 体 时 , 若 用 S D 法 , 则 会 诱 导机 体 产 生 免 疫 反 应 , 影 响 应 用 效 果 。 采 用 有 机 溶 剂抽 提 法 的 弊 病 是 绝 大 多 数 有 机 溶 剂 存 在 残 留 , 从
20、而产 生 安 全 性 的 问 题 。 对 于 P E G 是 否 具 有 毒 性 , 目 前不 详 。 还 有 许 多 方 法 的 获 得 率 很 高 , 如 硫 酸 葡 萄 聚糖 法 , 但 其 成 本 较 高 , 不 适 合 工 业 化 生 产 。 A k i t a 等在 P E G 、 D S 、 S D 或 乙 醇 沉 淀 等 方 法 基 础 上 建 立 了水 稀 释 法 。 即 以 9 份 水 稀 释 1 份 卵 黄 , 离 心 去 除 颗粒 , 再 用 硫 酸 盐 沉 淀 法 浓 缩 , 并 经 超 滤 或 乙 醇 沉 淀或 盐 沉 淀 进 一 步 纯 化 、 浓 缩 , 再 经
21、 凝 胶 过 滤 提 纯 , 产量 达 9 . 8 m g I g Y / m l 卵 黄 , 纯 度 9 4 % 。 此 法 中 若 以P E G 代 替 硫 酸 盐 沉 淀 , 可 进 一 步 提 高 产 量 。2 应 用I g Y 的 应 用 与 其 生 物 学 特 性 密 切 相 关 。2 . 1 在 医 学 方 面 的 应 用2 . 1 . 1 免 疫 诊 断 与 哺 乳 动 物 抗 体 相 比 , I g Y 的 一个 优 点 是 不 激 活 补 体 系 统 。 补 体 系 统 激 活 后 会 减 少抗 原 与 抗 体 的 结 合 , 从 而 导 致 假 阴 性 结 果 的 产 生
22、 。此 外 , 在 免 疫 学 试 验 中 , 抗 原 - 抗 体 复 合 物 能 激 活F c 受 体 , 引 起 蛋 白 表 面 发 生 改 变 , 进 而 可 能 对 试 验结 果 产 生 干 扰 作 用 。 由 于 I g Y 不 与 人 血 清 中 抗 哺 乳动 物 抗 体 的 抗 体 反 应 , 如 类 风 湿 因 子 和 人 的 抗 I g G抗 体 ; 同 时 I g Y 也 不 能 与 人 或 细 菌 F c 受 体 结 合 , 如综 述4 2P o u l t r y S c i e n c e葡 萄 球 菌 蛋 白 A 或 葡 萄 球 菌 蛋 白 G , 故 使 用 I
23、g Y 可以 避 免 由 抗 哺 乳 动 物 I g G 抗 体 引 起 的 干 扰 作 用 。 用I g Y 作 为 免 疫 学 检 测 工 具 , 测 定 循 环 复 合 物 、 类 风湿 因 子 和 补 体 等 , 可 减 少 假 阳 性 结 果 。2 . 1 . 2 免 疫 治 疗 因 鸡 抗 体 耐 酸 、 耐 热 且 性 能 稳定 , 可 经 口 服 用 于 预 防 或 治 疗 年 幼 动 物 或 人 类 的 肠道 传 染 病 , 如 婴 儿 防 病 食 品 、 龋 齿 预 防 、 新 生 乳 猪 致死 性 大 肠 杆 菌 感 染 的 预 防 以 及 鱼 病 治 疗 等 。 特 别
24、 是抗 生 素 或 其 它 药 物 的 使 用 存 在 问 题 时 , I g Y 成 为 首选 。 在 非 典 流 行 期 间 , 鸡 卵 黄 抗 体 还 被 研 制 用 于 抑制 S A R S 病 毒 。2 . 2 取 代 哺 乳 动 物 抗 体 禽 类 是 潜 在 的 抗 体 提 供者 , 其 免 疫 应 答 类 似 于 哺 乳 动 物 。 禽 类 可 以 作 为 任何 抗 体 的 供 体 动 物 。 如 抗 人 肌 原 蛋 白 的 抗 体 作为 试 剂 用 于 自 动 免 疫 诊 断 系 统 中 ; 过 氧 化 物 酶 标记 的 抗 马 免 疫 球 蛋 白 的 I g Y 已 制 成
25、 试 剂 盒 , 用 于 马性 病 的 诊 断 中 ; 抗 新 城 疫 I g Y 、 抗 传 支 I g Y 、 抗 传染 性 法 氏 囊 病 I g Y 经 荧 光 素 异 硫 氰 酸 盐 标 记 后 , 用荧 光 抗 体 技 术 诊 断 这 些 禽 类 病 毒 病 。2 . 3 在 兽 医 临 床 上 的 应 用 从 高 免 动 物 ( 如 兔 、鸡 、 牛 、 羊 等 ) 的 血 清 或 初 乳 中 分 离 I g G , 在 被 动 免疫 治 疗 中 有 很 重 要 的 意 义 和 价 值 。 但 这 些 来 源 提 供的 I g G 产 量 低 , 成 本 高 , 通 常 只 能
26、局 限 于 实 验 室 的免 疫 学 诊 断 和 基 础 研 究 。 近 年 来 , 国 内 外 学 者 就 卵黄 抗 体 的 研 究 和 开 发 作 了 许 多 工 作 , 证 明 免 疫 鸡 的鸡 蛋 是 提 供 特 异 性 I g G 的 最 方 便 、 最 廉 价 的 来 源 。目 前 , 高 免 I g Y 已 广 泛 地 应 用 于 鸡 传 染 性 法 氏 囊 病( I B D ) 、 新 城 疫 ( N D ) 、 鸭 肝 炎 、 小 鹅 瘟 、 犊 牛 腹 泻 、 仔猪 大 肠 杆 菌 病 、 羔 羊 和 小 白 鼠 轮 状 病 毒 腹 泻 等 动 物传 染 病 的 防 治 ,
27、 并 取 得 了 显 著 的 效 果 。2 . 4 在 人 类 保 健 上 的 应 用 大 量 研 究 结 果 显 示 , 鸡I g Y 对 病 原 体 感 染 的 防 御 无 动 物 的 种 属 差 异 , 故 应用 鸡 高 免 I g Y 防 治 婴 幼 儿 疾 病 是 完 全 可 行 的 。 随 着S P F 鸡 群 的 使 用 , 用 卵 黄 研 制 安 全 可 靠 的 人 用 抗 病( 尤 其 是 肠 道 疾 病 ) 生 物 制 品 必 将 获 得 广 泛 的 应 用 。2 . 5 用 作 饲 料 添 加 剂 用 抗 特 定 抗 原 并 可 直 接 饲喂 的 鸡 卵 黄 抗 体 作
28、为 替 代 抗 生 素 的 新 型 饲 料 添 加剂 正 在 引 起 人 们 的 关 注 。 鸡 卵 黄 抗 体 是 产 蛋 母 鸡 被免 疫 1 5 d 左 右 产 生 的 I g Y , 且 较 快 达 到 高 峰 , 可 产生 较 长 时 间 的 免 疫 应 答 , 效 价 可 维 持 数 月 至 一 年 以上 , 其 浓 度 活 性 及 功 能 可 通 过 对 母 鸡 进 行 高 免 而 加以 调 节 。 鸡 抗 体 可 取 代 抗 生 素 用 作 生 长 促 进 剂 , 且不 会 产 生 药 物 残 留 。参 考 文 献 :1 L o e k e n M R , R o t h T
29、F . A n a l y s i s o f m a t e r n a l I g G s u b -p o p u l a t i o n s w h i c h a r e t r a n s p o r t e d i n t o t h e c h i c k e no o c y t e . I m m u n o l o g y , 1 9 8 3 , 4 9 ( 1 ) : 2 1 - 2 8 .2 S o n g C S , Y u J H , B a i D H , e t a l . A n t i b o d i e s t o t h e a l -p h a -
30、s u b u n i t o f i n s u l i n r e c e p t o r f r o m e g g s o f i m m u n i z e dh e n s . J I m m u n o l , 1 9 8 5 , 1 3 5 ( 5 ) : 3 3 5 4 - 3 3 5 9 .3 H a t t a H , S i m J S , N a k a i S . S e p a r a t i o n o f p h o s p h o l i p i d sf r o m e g g y o l k a n d r e c o v e r y o f w a t
31、 e r - s o l u b l e p r o t e i n s .J o u r n a l o f F o o d S c i e n c e , 1 9 8 8 , 5 3 ( 2 ) : 4 2 5 - 4 2 7 .4 P o l s o n A , C o e t z e r T , K r u g e r J , e t a l . I m p r o v e m e n t s i n t h ei s o l a t i o n o f I g Y f r o m t h e y o l k s o f e g g s l a i d b y i m m u -n i
32、 z e d h e n s . I m m u n o l o g i c a l I n v e s t i g a t i o n s , 1 9 8 5 , 1 4 ( 4 ) : 3 2 3 -3 2 7 .5 H a t t a H , K i m M , Y a m a m o t o T . A n o v e l m e t h o d f o r h e n e g gy o l k a n t i b o d y , “ I g Y ” . A g r i c B i o l C h e m , 1 9 9 0 , 5 4 ( 1 0 ) :2 5 3 1 - 2 5 3
33、 5 .6 J e n s e n i u s J C , A n d e r s e n I , H a u J , e t a l . E g g s : c o n v e n i e n t l yp a c k e d a n t i b o d i e s . M e t h o d s f o r p u r i f i c a t i o n o f y o l k I g G .J o u r n a l o f I m m u n o l o g i c a l M e t h o d s , 1 9 8 1 , 4 6 : 6 3 - 6 8 .7 H a s s l A
34、 , A s p o c k H . P u r i f i c a t i o n o f e g g y o l k i m m u n o g l o b u -l i n s : a t w o - s t e p p r o c e d u r e u s i n g h y d r o p h o b i c i n t e r a c t i o nc h r o m a t o g r a p h y a n d g e l f i l t r a t i o n . J o u r n a l o f I m m u n o l o g i -c a l M e t h o
35、d s , 1 9 8 8 , 1 1 0 ( 2 ) : 2 2 5 - 2 2 8 .8 H a n s e n P , S c o b l e J A , H a n s o n B , e t a l . I s o l a t i o n a n d p u r i f i -c a t i o n o f i m m u n o g l o b u l i n s f r o m c h i c k e n e g g s u s i n g t h i o -p h i l i c i n t e r a c t i o n c h r o m a t o g r a p h y
36、 . J I m m u n o l M e t h o d s ,1 9 9 8 , 2 1 5 ( 1 - 2 ) : 1 - 7 .9 M c L a r e n R D , P r o s s e r C G , G r i e v e R C , e t a l . T h e u s e o fc a p r y l i c a c i d f o r t h e e x t r a c t i o n o f t h e i m m u n o g l o b u l i n f r a c -t i o n f r o m e g g y o l k o f c h i c k
37、 e n s i m m u n i s e d w i t h o v i n e a l -p h a - l a c t a l b u m i n . J I m m u n o l M e t h o d s , 1 9 9 4 , 1 7 7 ( 1 - 2 ) : 1 7 5 - 1 8 4 .1 0 K u r o n e n I , K o k k o H , M o n o n e n I , e t a l . H e n e g g y o l k a n t i b o d -i e s p u r i f i e d b y a n t i g e n a f f i n i t y u n d e r h i g h l y a l k a l i n e c o n d i -t i o n s p r o v i d e n e w t o o l s f o r d i a g n o s t i c s . H u m a n i n t a c tp a r a t h y r i n a s a m o d e l a n t i g e n . E u r J C l i n C h e m C l i nB i o c h e m , 1 9 9 7 , 3 5 ( 6 ) : 4 3 5 - 4 4 0 . 综 述4 3
