1、1、缓冲溶液作用原理和 pH 值当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时，有阻碍溶液 pH 变化的作用，称为缓冲作用，这样的溶液叫做缓冲溶液。弱酸及其盐的混合溶液（如 HAc 与 NaAc） ，弱碱及其盐的混合溶液（如 NH3H2O与 NH4Cl）等都是缓冲溶液。 由弱酸 HA 及其盐 NaA 所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用，是由于溶液中存在足够量的碱 A-的缘故。当向这种溶液中加入一定量的强酸时，H+离子基本上被 A-离子消耗： 所以溶液的 pH 值几乎不变；当加入一定量强碱时，溶液中存在的弱酸 HA 消耗 OH-离子而阻碍 pH的变化。 2、缓冲溶液的缓冲能力在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱，其溶
2、液 pH 值变化不大，但若加入酸，碱的量多时，缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。 缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。0.1molL-1HAc 和 0.1mol L-1NaAc 组成的缓冲溶液，比 0.01molL-1HAc 和 0.01molL-1NaAc 的缓冲溶液缓冲能力大。关于这一点通过计算便可证实。但缓冲溶液组分的浓度不能太大，否则，不能忽视离子间的作用。 组成缓冲溶液的两组分的比值不为 11 时，缓冲作用减小，缓冲能力降低，当 c（盐）/c （酸）为11 时pH 最小，缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的 pH 值可用下
3、式计算： 此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离 11 愈远，缓冲能力愈小，甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系，存在有效缓冲范围，这个范围大致在 pKa（或 pKb）两侧各一个 pH 单位之内。 弱酸及其盐（弱酸及其共轭碱）体系 pH=pKa 1 弱碱及其盐（弱碱及其共轭酸）体系 pOH=pKb1 例如 HAc 的 pKa 为 4.76，所以用 HAc 和 NaAc 适宜于配制 pH 为 3.765.76 的缓冲溶液，在这个范围内有较大的缓冲作用。配制 pH=4.76 的缓冲溶液时缓冲能力最大，此时（ c（HAc ）/c（NaAc）=1。PBS磷酸盐缓冲液（简称 PBS）的是常用的用于生物学研究的
4、一个缓冲溶液。它是一种水基盐溶液中含有氯化钠，磷酸盐，以及（在某些配方） 氯化钾和磷酸钾。缓冲液有助于保持恒定的 pH 值。解决方案的渗透压和离子浓度通常与人体 pH 相近（等渗） 。Elisa 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M KH2PO4 0.2 克 Na2HPO12H2O 2.9 克 NaCl 8.0 克 KCl 0.2 克 Tween-20 0.05 0.5ml 加蒸馏水至 1000mlTBSTBS 即 Tris 缓冲盐水，是 Tris-HCl 缓冲盐溶液，为等渗盐溶液加 Tris-HCl 缓冲液 ，在做 Western Blot 时用到。配制方法如下： 1 mol/L T
5、risHCl（pH7.5） 10ml NaCl 8.8g 蒸馏水至 1000mlTBST (TTBS)TBST 中含有 Tris-Hcl， NaCl，tween20 这三种物质，是做 WESTERN BLOT 中常用的一种缓冲溶液。Tween 是一种离子表面活性剂，它可加速抗体非特异性结合的分离。Tween20 含量 0.05%。告诉大家一个免调 pH 值的 10TBST 配方，相信可以解决你的问题，同时也能让广大战友省力不少！体积 1000ml 包括：Tris:30.28gNaCl:87.66gHCl:17mlTween 20:5ml使用之前稀释 10 倍即可！CBS(ELISA 抗原包被缓
6、冲液)包被缓冲液(pH9.6， 0.05M 碳酸盐缓冲液):NaHCO3 1.59 克NaHCO3 2.93 克加蒸馏水至 1000mlstripping1、stripping buffer 含有适量的 SDS，在低 ph 值或适当的温度下，可以使膜上的大多数抗原抗体复合物分开。使用 stripping buffer 可以去除一抗和二抗，然后可以重新利用膜。2、完全可以用同一种抗体再杂交一次。我的经验是同一张膜 stipping3 次就差不多了，而且用同一种一抗，信号强度是一次比一次递减的。strip 的配方有多种，不同的配方，strip 的原理都不太相同。但是目的都只有一个，那就是使膜上的抗
7、原抗体复合物分开。 （洗脱一抗二抗）Stripping Buffer 配方:-mercaptoethanol 342 l；20% SDS 5 ml；1M Tris-Cl pH 6.7 3.125 ml；加 ddH2O 至 50 ml。方法：将用过的膜浸入 stripping buffer 中，置 50水浴箱中 30min，间断振摇。之后用 TTBS 洗3*5min 就好。此时你已经可以按新的转移好的膜来再次使用了。CAPS现在蛋白质的 PVDF 转膜已经不用 Tris-gly、SDS、20%甲醇缓冲液:，因为缓冲液中有甘氨酸，所以测序的时候很难区分甘氨酸是 BUFFER 带进去还是蛋白质本身的
8、。现在测序用的转膜缓冲液是：10mM/l CAPS,10%的甲醇。CAPS 电印迹缓冲液中的甲醇浓度范围是 020%，一般甲醇浓度高的缓冲液对低分子量蛋白质的转移效果好，而甲醇浓度低甚至不含甲醇的缓冲液则有利于高分子量蛋白的转移。配制 CAPS 电印迹缓冲液。方法如下：10CAPS（100mmol/L）CAPS 22.3g加去离子水至 900ml用 2mol/L NaOH（约 20ml）将 pH 值调至 11.0，然后定容至 1L，贮存于 4。CAPS 电印迹缓冲液（含 10%甲醇的 1CAPS）10CAPS 200ml甲醇 200ml去离子水 1600mlTris 中文品名: 三羟甲基氨基甲
9、烷; 氨基丁三醇; 缓血酸胺 英文品名: Tris; Tris(Hydroxymethyl)aminomethane 英文别名: 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol THAM; Tris base; Trometamol通用 CAS : 77-86-1 产品纯度: 100%(USP 药典级 ) / 99.9%(实验室技术级) 产品级别: USP 药典级,符合 USP/EP/cGMP 对药物赋形剂的要求 分子式: NH2C(CH2OH)3 分子量: 121.14 使用用途: 生物制药,体外诊断,个人护理及化妆品原料等 保存温度: 常温密封避光保存
10、TRIS 是一种最常用的生物缓冲液，常配成 PH 值为 6.8，7.4，8.0，8.8。其 PH 值随温度变化很大。一般来说，温度每升高一度，PH 值下降 0.03。 1M TRIS-HCl 6.8 和 1.5M TRIS-HCl 8.8 是 SDS-PAGE 最常用的试剂。 而由 TRIS 配成的 TAE，TBE 等是 DNA 电泳最常用的试剂， TE（PH8.0 ）主要用于溶解 DNA。TE 为 Tris 加 EDTA 合称。 缓冲特性：Tris 为弱碱，在室温（25）下，它的 pKa 为 8.1；根据缓冲理论，Tris 缓冲液的有效缓冲范围在 pH7.0 到 9.2 之间。Tris 碱的
11、水溶液 pH 在 10.5 左右，一般加入盐酸以调节 pH 值至所需值，即可获得该 pH 值的缓冲液。但同时应注意温度对于 Tris 的 pKa 的影响。衍生缓冲液： 由于 Tris 缓冲液为弱碱性溶液，DNA 在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在 Tris 盐酸缓冲液中加入 EDTA 制成“TE 缓冲液” ，TE 缓冲液被用于 DNA 的稳定和储存。如果将调节 pH 值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE 缓冲液” （Tris/Acetate/EDTA） ，而换成硼酸则获得“TBE缓冲液” （Tris/Borate/EDTA ） 。这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。 制备：
12、Tris 可以由两步反应生成：先由硝基甲烷生成中间体三羟甲基硝基甲烷（(HOCH2)3CNO2） ，然后再由该中间体还原得到 Tris。 用途：Tris 缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris 被用于不同 pH 条件下的蛋白质晶体生长。Tris 缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans）核纤层蛋白（lamin）的中间纤维的形成。Tris 也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外，Tris 还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris 也被用作滴定标准物。TAE 缓冲液TAE 是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对
13、分子质量（TBE 中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量） ，且双链线状 DNA 在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约 10%，电泳大于 13kb 的片段时用 TAE 缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收 DNA 片段时也易用 TAE 缓冲系统进行电泳。TAE 的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 50TAE Buffer 配制方法： 1。称量 Tris 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g 于 1L 烧杯中； 2。向烧杯中加入约 800ml 去离子水，充分搅拌均匀； 3。加入 57.1ml 的冰乙酸，充分溶解； 4。用 NaOH 调 pH 至 8.3，加去离子水定容至 1L 后，室温保存。 使用时稀释 50 倍 即 1TAE BufferTBE 缓冲液名称：TBE（Tris 硼酸） ，是一种 PCR 技术中用到的缓冲液。 成分及终浓度（5） 配制 1L 溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris 碱： 54g 445 mmol/L 硼酸盐：27.5g 硼酸 10 mmol/L EDTA： 20 ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 水： 补足 1LTE 缓冲液TE（PH8.0）主要用于溶解 DNA, TE 缓冲液被用于 DNA 的稳定和储存。
