从全血中分离白细胞 操作过程 : 1 用抗凝管收集全血,抗凝管需EDTA材质或者柠檬酸钠材质,不能用肝素钠材质。 2 全血白细胞分离:下列以 3ml 抗凝血为例说明。 a 向一只 15ml 离心管中加入 3ml 抗凝血,而后加入 9ml 红细胞裂解液。盖紧管 盖,温柔的颠倒混匀数下。请不要剧烈振荡。 b 将离心管至于室温放置 10 min(5-10 min,不要超过 10 min)。 c 将离心管以 250 转离心5 min。 d 弃上清,尽可能将上清吸净,勿吸到管底白色班块细胞。 e 弃去上清后在管底出现可见的白色班块,此白色班块为富集的白细胞。如果裂解不完全(白色班块里还有红色细胞),加入 1ml PBS 缓冲液重悬,然后重复 ad 步骤 。 f 充分裂解后,可用 1ml PBS缓冲液清洗一次,250 转离心5 min。 g 弃上清, 可获得血液样品中全部白细胞的 80以上。而后可加入适量 Trizol (根 据细胞数量而定 5X106加1ml Trizol)后,用移液器充分吹打,混匀,直至出现清亮不粘稠的液体,表示细胞充分裂解 。 h 而后可以把以上的 Trizol 试剂保存在生物冰中-70 ,最后用干冰运输寄于我们。