1、北京雷根生物技术有限公司 BCA 蛋白定量试剂盒简介：目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA 蛋白定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和 Bradford 蛋白定量试剂盒 (Bradford Protein Assay Kit)。BCA 法与传统方法相比，更简单、更稳定、更灵敏度。BCA 法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，对于 5%以内的 SDS、Triton X-100、Tween 20、 Tween 80 具有很好的兼容性。BCA 法测定蛋白浓度易受螯合剂、高浓度的还原剂影响。在 BCA 法测定蛋白浓度前，应尽量使 EDTA 浓度m10M
2、; DTT 浓度1mM， 2-ME0.01%。Leagene BCA Protein Assay Kit 在 501000g/ml 浓度范围内有较好的线性关系，其最小检出量为 25g/ml。组成：自备材料：1、 酶标仪或分光光度计2、 96 孔板或离心管3、 恒温箱操作步骤(仅供参考) ：1、 取蛋白标准配制液加入到蛋白标准(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20保存。2、 取适量蛋白标准，稀释至终浓度为 500g/ml或所需浓度。如取 25l 20mg/ml 蛋白标准，加入 975l稀释液，充分混匀，即配制 500g/ml蛋白标准
3、。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取 20mg/ml 蛋白标准溶解于蔗糖中。一般也可以用 0.9%NaCl或 PBS 作为溶解 BSA 稀释液。稀释后的 500g/ml蛋白标准也应-20长期保存。3、 根据样品数量，试剂(A):试剂(B 配制 BCA 工作液，即取 BCA 试剂 A 和 BCA 试剂 B， 充分混匀，即获得 BCA 工作液。例如取 BCA 试剂 A 和 BCA 试剂 B，配制成 BCA 工编号 名称PT0001250TPT0001500TStorage试剂(A): BCA 试剂 A 50ml 100ml
4、RT 避光试剂(B): BCA 试剂 B 1.5ml 3ml RT 避光试剂(C): 蛋白标准(BSA) 20mg 20mg RT试剂(D): 蛋白标准配制液 5ml 10ml RT使用说明书 1 份北京雷根生物技术有限公司 作液。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。4、 将标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20l加到 96 孔板的标准品孔，加稀释液补足。5、 加适当体积待测蛋白样本到 96 孔板的样品孔中。如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液不同，应在待测蛋白样本孔中加入稀释液；如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同，无需在待测蛋白样本孔中加入 l 稀释液。
5、6、 各孔加入 200l 配制好的 BCA 工作液, 放置。7、 测定 562nm 波长处的吸光度(OD 值)，如无 562nm，540 595nm 之间的波长也可。8、 各孔 OD 值减去用未加标准品的孔的 OD 值，作出标准曲线，根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。注意事项：1、 蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20长期保存。2、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。3、 待测蛋白和蛋白标准加入 BCA 工作
6、液后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置 2h或 60放置 30min，颜色会随着时间的延长不断加深。显色反应也会随温度升高而加快。如果浓度较低，可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。4、 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有严重干扰 BCA 法测定蛋白浓度的物质。5、 建议每次测定时都做标准曲线。因为 BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。6、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大 BCA 工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。7、 为了加快 BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当加热，但是切勿过热，否则易失效。8、 BCA 法检测中样本中不应含有 EGTA，否则影响检测结果。9、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期： 12 个月有效。蛋白标准配制成溶液后应-20冻存。
