1、14 选择性头部亚低温治疗新生儿 HIE 多中心协作组 亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑病临床床多中心研究阶段性疗效分析 中国循证儿科杂志 ， 2006， 2: 99-10515 刘玲 ， 杨于嘉 ， 文秋生 ， 等 高压氧治疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的保护作用 实用儿科临床杂志 ， 2005， 20: 531-53216 史源 ， 李华强 高压氧治疗新生儿缺氧缺血性脑病国内外研究进展 实用儿科临床杂志 ， 2006， 21: 951-95217 杨于嘉 高压氧治疗 HIE 的机制及存在问题 临床儿科杂志 ， 2008，26: 16518 Satoshi OS， James EG Multi
2、ple cell populations in the early postnatal-subventricular zone take distinctmigratory pathways: a dynamic study ofglial and neuronal progenitor migration J Neurosci， 2003， 23: 4240-425019 栾佐 ， 尹国才 ， 胡晓红 ， 等 人神经干细胞移植治疗重度新生儿缺氧缺血性脑病 1 例 中华儿科杂志 ， 2005， 43: 580-583( 收稿日期 : 2011 09 12)doi: 103969/j issn1
3、002 7386201208073 综述与讲座 化学发光法检测人绒毛膜促性腺激素的影响因素王玉新 张文霞作者单位 : 053000 河北省衡水市第四人民医院检验科【关键词 】 人绒毛膜促性腺激素 ; 化学发光法 ; 假阳性 ; 假阴性【中图分类号 】 R 4461 【文献标识码 】 A 【文章编号 】 1002 7386( 2012) 08 1239 02人体绒毛膜促性腺激素 ( HCG) 是滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素 ， 一旦妊娠产生绒毛即可从血循环中测出 。HCG 的分泌与滋养细胞的数量密切相关 。HCG 测定临床上用于正常妊娠和病理性妊娠如异位妊娠 、先兆流产 、葡萄胎及绒毛膜癌的监测
4、 ， 而且在治疗后的随访及预后中成为重要指标 ， 对其他疾病如卵巢生殖细胞肿瘤 、男性睾丸肿瘤 、非滋养细胞疾病 、非生殖细胞肿瘤也有辅助诊断意义 1。随着近代医学科学技术的发展 ， 化学发光法以其用量少 ， 检测范围宽 、无环境污染等优势 ， 得到了大力推广及应用 ， 并逐渐取代了酶标法 、放免法 ， 成为大多数实验室常用的检测方法 。但每种分析方法都有其局限性 ， 化学发光法也不例外 。现就化学发光法检测 HCG 临床应用中出现的问题作一综述 ， 以期引起实验人员的重视 ， 为临床和科研提供正确的检测结果 ; 同时 ， 也希望对临床医生正确判断检测结果 、及时对患者作出诊疗有所帮助 。1
5、化学发光法检测 HCG 的假阴性问题11 HCG 分子的多样性 HCG 分子在人的血液中有多种存在形式 ， 除包括同时含有一分子 亚基和一分子 亚基的完整的 HCG 分子 ( 称为全分子 HCG 又称为整分子 HCG、规则HCG) 外 ， 还有其他几种不同形式的 HCG 分子 ， 如糖基化 HCG、缺刻 HCG、-亚基 C 末端肽缺失 HCG、游离 - 亚单位 、游离 -亚单位等 。全分子 HCG 是具有生物活性的 HCG 分子 2。HCG 主要由胎盘滋养细胞产生 ， 成熟的滋养细胞主要产生完整的 HCG 分子 ， 而游离 HCG( F-HCG) 及高糖化 HCG 在妊娠滋养细胞疾病 ( GT
6、N) 中明显高于正常妊娠 ， 可作为判断正常妊娠或 GTN 的一项指标 ， 并可判断 GTN 的恶性程度 3。非滋养细胞也能产生 HCG 分子 。主要为一些分化不良的恶性肿瘤细胞 ， 包括生殖细胞肿瘤 、及一些非生殖细胞肿瘤 ， 如上皮性卵巢癌 、子宫内膜癌 、胃癌 、膀胱癌 、肾癌和多种肉瘤等 。在这些肿瘤中以分泌游离亚单位分子 、异常的缺口 HCG 为主 。此外 ， 尚存在无妊娠 、癌症和疾病证据的垂体来源的 HCG 4。12 不同的检测试剂盒识别能力不同 目前已知在 HCG 分子上有 16 个抗原决定簇 ， 5 个在 亚单位上 ， 7 个在 亚单位上 ， 4 个抗原决定簇是结合依赖性的
7、， 只有 、 亚单位结合时才能测定 ， 其中的 2 个在缺刻 HCG 时不能被检出 。另外还有 4个抗原决定簇只有在游离 亚单位上才能检出 。因此 ， 不同的试剂盒因其设计的结合位点不同 ， 因而具有不同的识别能力 5。有的可检测血清中所有的 HCG 分子 ; 有的只是检测血清中的全分子 HCG; 有的可特异性地检测某一个相关分子 ， 如游离 亚单位的检测等 。若使用的试剂不能检测糖化 HCG、缺刻 HCG 或游离 -亚单位等这些相关分子 ， 就可能使测定结果呈现假阴性 。因为在滋养细胞疾病或恶性非滋养细胞疾病中 ， 许多相关分子形式中的任何一种都可能成为血清或尿样本中HCG 的唯一形式 6。
8、13 HOOK 效应的影响 化学发光免疫分析技术 ( CLIA) 是以发光物作为标记物 ， 通过抗原抗体的免疫结合过程 ， 测定发光量对检测物进行分析 。因此 ， 当检测物的浓度大大超出试剂中标记物浓度时 ， 同样会受 HOOK 效应影响 ， 使得测定结果偏低 ，甚至出现假阴性 7。要消除此干扰 ， 只有对样本进行适当稀释后重新测定 。笔者曾遇到过一位初次就诊怀疑为子宫内膜癌的患者 ， 其血清用化学发光法和胶体金试纸检测全分子 HCG均显示为正常 。但稀释 100 倍的血清 ， 化学发光光量子计数值却比原倍未稀释血清还高 ， 但结果仍显示为正常 。遂对其血清作 500 及 1 000 倍稀释
9、， 1 000 倍稀释后 ， 结果显示为无穷大 。因此 ， 在实际工作中需要我们实验人员一定要加强责任心 ， 同时 ， 可联合胶体金试纸法 ， 用胶体金试纸作原倍及不同稀释度的初筛 ， 杜绝因 HOOK 效应产生的假阴性 。2 化学发光法检测 HCG 的假阳性问题21 血清中嗜异性抗体的存在 人嗜异性抗体是指源于其他种类动物的蛋白产生反应的人类抗体 。据报道经常与动物密切接触的人群 ， 其血中存在嗜异性抗体的可能性比较大 6。另外 ， 由于牛奶 、肉类的食用 ， 医疗中动物蛋白的注射 ， 都可能使人产生动物抗体 。这些动物抗体可以是针对某一特异物种的9321河北医药 2012 年 4 月 第
10、34 卷 第 8 期 Hebei Medical Journal， 2012， Vol 34 Apr No. 8特异性抗体 ， 也可以是非特异的动物抗体 。嗜异性抗体通过与试剂中的抗体结合而干扰检测结果 ， 造成分析物浓度错误性升高 ， 样本结果呈假阳性 8。但嗜异性抗体在人血清中的含量大都比较低 ， 目前所报道假阳性结果都小于 1 000 mU/ml， 而且大多小于 150 mU/ml， 且分子量多在 160 000 De 左右 ， 因而不能通过肾屏障而出现在尿中 。因此 ， 对于血清中 HCG 持续阳性 ，但检测值又不是很高 ， 且在治疗后也无明显波动 ， 而尿液一直阴性的标本 ， 可考虑
11、是否为嗜异性抗体引起的假阳性 。嗜异性抗体可通过事先加入试剂盒中抗体所来源的动物血清中和的办法来加以消除 。同样由于嗜异性抗体的存在 ， 患者的其他标志物或激素 ( 如 CA125、前列腺特异抗原 、甲状腺激素等 ) 也会呈现假性升高 9。22 交叉污染造成的假阳性 在测定高浓度标本时 ， 交叉污染是导致假阳性的潜在问题 8。因此 ， 对于手工加样的检测方法 ， 操作中一定要更换加样吸头 ; 对于全自动检测系统 ， 若紧随在高浓度标本后的标本 ， 出现偏高结果应进行复查 ， 排除交叉污染的可能 。3 各实验室间检测结果缺乏可比性正是基于各检测试剂盒所采用的结合抗体不同 ， 及使用的标准物分子不
12、同 ， 同一份血清标本 ， 在不同的实验室 ， 用不同的检测方法 ， HCG 的检测结果可能会有很大不同 。而患有 GTN的患者 ， 其诊疗过程可长达几年 ， 期间需经历几十次的 HCG 动态检测 ， 很可能会在不同的实验室用不同的检测方法检测 。因此 ， 临床医生在诊疗过程中 ， 对于不同的检测结果 ， 应加以分析 ， 以免引起误诊 。4 稀释液及稀释倍数问题在使用化学发光检测 HCG 时 ， 高浓度 HCG 标本血清常需稀释后检测 ， 稀释液不同 ， 则检测结果存在不同程度的偏差 10。有的试剂盒提供零标准稀释液 ， 有的试剂盒并未提供 ，需实验人员自己选择稀释液 。推荐使用零血清 ( 实
13、测 HCG 为0) 作为稀释液 ， 因其蛋白质 、pH 值 、离子强度和其他血清成分与标准品和标本血清基本相近 ， 所测误差最小 。另外 ， 到底稀释多少倍 ， 才能达到最佳检测结果 ， 也是我们在日常工作中常常迷惑的问题 。可采用胶体金试纸联合检测的方法 。在化学发光法检测之前 ， 先用胶体金试纸对患者血清作原倍及 1 100倍稀释的平行测定 ， 根据金标试纸条显色程度的深浅和对照线进行比较 ， 来决定是否需要稀释及大致需要稀释多少倍 ， 再用化学发光法进行检测 ， 以减少用化学发光法重复检测的次数 ，既节省了试剂 ， 又减少了检测时间 ， 是一种值得推广的经验 。另外 ， 还有一种表现为真
14、性低水平绒毛膜促性腺激素的妊娠滋养细胞肿瘤综合症的患者 。患者血清 HCG 持续呈低水平升高 ( HCG 水平一般低于 250 U/L) ， 但身体检查及影像学检查未发现病灶 ， 而治疗 ( 包括化疗及手术 ) 不能使血清 HCG 水平降低 。这类患者又可以分为 2 类 : ( 1) 静止期滋养细胞疾病和无法解释的 HCG 升高 ; ( 2) 垂体来源的真性低水平 HCG 升高 。若 HCG 水平很低或患者是围绝经期女性 ， 给予雌 、孕激素序贯治疗 ， 若 HCG 水平下降应考虑为垂体来源的可能 。对于静止期滋养细胞疾病或无法解释的 HCG 升高的患者 ， 应密切关注 HCG 的变化 ， 必
15、要时辅以其它的影像学检查 ， 不宜化疗或手术 。有学者曾监测恶变患者血清中糖化 HCG 占血清各种亚型 HCG 的比例 ， 结果发现 ， 糖化 HCG 占各种亚型 HCG 的比例均 80%。提示 ， 糖基化 HCG 可用于监测静止期滋养细胞疾病或无法解释的 HCG 升高患者的恶变情况 9。同时 ， 有研究发现 : 标本溶血 、细菌污染 、标本保存不当 、试剂使用及保存不当 、洗板不规范等因素都会影响 HCG 的检测 11。因此 ， 在用化学发光法检测 HCG 时 ， 实验人员一定要掌握 HCG 分子的多样性及所用试剂盒的局限性 ， 排除各种引起误差的因素 ; 同时 ， 加强与临床医生的沟通 ，
16、 为临床和科研提供正确的检测结果 。参考文献1 凌庆枝 ， 张纪原 磁性分离酶联免疫技术检测人类绒毛膜促性腺激素及其临床意义分析 生物学杂志 ， 2000， 17: 322 徐晓姹 ， 吕时铭 人绒毛膜促性腺激素在体内的存在形式及其临床应用 国外医学临床生物化学与检验学分册 ， 2005， 26: 815-8183 向阳 恶性滋养细胞肿瘤面临的临床问题 现代妇产科进展 ， 2008，17: 1-34 傅君 ， 楼海亚 ， 叶大风 HCG 试验在妊娠滋养细胞疾病诊疗中的困惑 中国妇幼健康研究 ， 2006， 17: 131-1345 朱亚飞 ， 刘丝荪 ， 易为民 ， 等 血清 HCG 假阳性的
17、问题 中国妇产科临床杂志 ， 2005， 6: 76-776 林敏 人绒毛膜促性腺激素检测及临床应用 检验医学与临床 ，2009， 6: 281-2827 王兰兰主编 临床免疫学和免疫检验 第 3 版 北京 : 人民卫生出版社 ， 2004168 吴健民 影响肿瘤标志物检测的因素 中华检验医学杂志 ， 2005， 28:352-3549 侯进琳 ， 万希润 持续性低水平人绒毛膜促性腺激素升高的临床意义 中华妇产科杂志 ， 2006， 41: 785-78610 杨景瑞 ， 张润玲 电化学发光免疫分析仪检测 -HCG 的性能验证 中华检验医学 ， 2007， 30: 939-94111 林爱华
18、， 胡亚远 化学发光检测人绒毛膜促性腺激素影响因素及应对措施探讨 实用医技杂志 ， 2009， 16: 1020-1021( 收稿日期 : 2011 09 25)消 息 医学论文中有关实验动物描述的要求在医学论文的描述中 ， 凡涉及到实验动物者 ， 在描述中应符合以下要求 : ( 1) 品种 、品系描述清楚 ; ( 2) 强调来源交待 ; ( 3) 遗传背景 ; ( 4) 微生物学质量 ; ( 5) 明确体质量 ; ( 6) 明确等级 ; ( 7) 明确饲养环境和实验环境 ; ( 8) 明确性别 ; ( 9) 有无质量合格证 ; ( 10) 有对饲养的描述 ( 如饲料类型 、营养水平 、照明方式 、温度要求 、湿度要求 ) ; ( 11) 所有动物数量准确 ; ( 12) 详细描述动物的健康状况 ;( 13) 对动物实验的处理方式有单独清楚的交代 ; ( 14) 全部有对照 ， 部分可采用双因素方差分析 。本刊编辑部0421 河北医药 2012 年 4 月 第 34 卷 第 8 期 Hebei Medical Journal， 2012， Vol 34 Apr No. 8
