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类型中和试验步骤.doc

  • 上传人:hskm5268
  • 文档编号:5811995
  • 上传时间:2019-03-18
  • 格式:DOC
  • 页数:2
  • 大小:23.50KB
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    中和试验步骤.doc
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    1、中和试验步骤1、测定病毒 TCID50/100l2、制备细胞悬液,使细胞浓度约为 1105 个/mL,加到 96 孔细胞培养板中,每孔 100l。置 37 CO2 培养箱中,直至细胞长至单层。3、血清灭活:将待检测的血清放到 56水浴 30min(此时血清中的病原菌都已被灭活) 。4、100TCID50/50l 病毒液或者 200TCID50/25l 病毒液的制备, 这两者是等价的。100TCID50/50l 病毒液制备方法:计算已测定了 TCID50/100l的病毒原液稀释至 100TCID50/50l 的稀释倍数:lg100TCID50/50l=-log100-log(100/50)=-2

    2、.30103得 100TCID50/50l=10-2.30103,假设病毒 TCID50/100l=10-6.3,则稀释倍数=(100TCID50/50l)(TCID50/100l)=10 6.3102.301039976 倍。5、取一块新的 96 孔板,1-10 列每孔加 50l 待检血清原液,再用 8道孔排枪加每孔 100TCID50/50l 病毒液 50l,稍微吹打使血清与病毒液混均。11 列先每孔加 50l 维持液,再于 11 列的第一孔加 50l标准阳性血清,将标准阳性血清往下作 1:2、1:2 2 至 1:28 倍稀释。12列第 1 孔加标准阴性血清原液 50l,再加 100TCI

    3、D50/50l 病毒液50l。用维持液将 100TCID50/50l 的病毒液作 4 次连续 10 倍稀释,稀释成 10TCID50/50l、1TCID50/50l、0.1TCID50/50l,依次加到第12 列的 3 到 6 孔,每孔加 50l,再每孔加 50l 维持液。将培养板置37 CO2 培养箱中和 1h。6、将细胞长至单层的培养板中的维持液倒掉,然后将上一步已中和1h 的血清病毒液转移到长了单层细胞的培养板中,转移的时候要小心,以免加的液体把细胞吹掉了。7、再每孔加 150l 维持液,微量振荡器上震荡 30s,混均。将培养板置 37 CO2 培养箱中,96h 后开始观察记录结果。 (注:在第 5 步中,加血清和抗原的时候,加的体积最好大于 50l,不然第 6 步将中和的血清病毒液转移到单层细胞上的总体肯定是小于 100l 的。加了维持液后,最后的总体积是 250l。)

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