1、高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离实验材料：培养基成分：可溶性淀粉、KNO3、 NaCl、 K2HPO43H2O、MgSO 47H2O、FeSO 47H2O、琼脂。实验内容：高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为 KNO3 、NaCl 、K 2HPO43H2O 、MgSO 47H2O 作为无机盐，FeSO 47H2O 作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成。放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中，其数量仅次于细菌，一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。由于土壤中
2、的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。分离放线菌常用稀释倒平板法。根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120热处理 1h） ，或加入某种抑制剂（如加数滴 10%酚等） ，都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。实验步骤：1.高氏一号合成培养基的制备先将可溶性淀粉称好，在小烧杯内用 50100ml 水调成糊状，再在另一容器内加入900950ml 热水，将小
3、烧杯内淀粉倒入混匀。再分别称取其它药品，并加热搅拌使之溶解后，调 pH 至 7.27.4，分装， 0.1Mpa（15lb/in 2）1530min 高压蒸汽灭菌。2. 土壤中放线菌的分离（1）取 9 套无菌平皿，在皿底贴上标签，注明土壤稀释液的稀释度（10 -3、10 -4、10 -5） 、组别、姓名、操作日期等。每个稀释度做三个培养皿。然后在每皿中倒入已溶化并冷至50左右的高氏一号培养基 1520ml 左右，待冷凝成平板。（2）将土样放入用酒精擦拭过的乳钵中，除去石块、草根、研磨压碎后，称取 5g，放入盛有 45ml 无菌水的三角瓶中。振荡 10min，即 10-1 的土壤悬液，静置 30s
4、。（3）另取装有 9ml 无菌水的试管 4 支，编号 10-2、10 -3、10 -4、10 -5。用无菌吸管无菌操作取 10-1 浓度的土壤悬液 1ml 并加入编号 10-2 的无菌试管中，并吹吸吸管 23 次，使与 9ml水混匀，即为 10-2 浓度的土壤稀释液。依此类推，直到稀释至 10-5 的试管中（每个稀释度换 1 支无菌吸管） 。（4）用无菌吸管从浓度最小稀释液开始，每次吸取 0.5ml 加到一组相应编号（10 -5）的高氏一号平板上（每次吸取前，吸管要在液体内吹吸几次） ，再依次将 10-4、10 -3 的土壤稀释液加到相应平板上。用无菌刮棒（从浓度小的稀释液开始）将加入平板培养基上的土壤稀释液在整个平板表面涂匀。（5）接种完毕，将平皿放入 28恒温箱培养 7 天，观察平皿上放线菌（主要是链霉菌）菌落。（6）挑 4 株菌划线接种在高氏一号合成培养基斜面上，28培养 7 天，作拮抗试验用。准备实验内容：【培养基/组：200ml（制备 6 个平皿（本次实验用，10 支试管） 】
