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类型油镜使用及革兰氏染色.ppt

  • 上传人:weiwoduzun
  • 文档编号:5710593
  • 上传时间:2019-03-14
  • 格式:PPT
  • 页数:16
  • 大小:696.04KB
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    油镜使用及革兰氏染色.ppt
    资源描述:

    1、显微镜的使用,教学目标 掌握油浸镜的使用原理,二染色原理和油镜的工作原理,1油镜工作原理油镜的放大倍数最大(100),故镜头焦距短,直径小,但所需光照强度却最大。从标本片透过的光线是从玻片进入空 气,再进入镜头。由于玻璃和空气的介质密度不同,有些光会因折射或反射而 不能进入镜头。物象就显 现不清。为了不使通过的 光线有所损失,须在油镜与玻片之间加入折射率和玻璃(n=1.52)相仿的香柏油(n=1.515)。故而称之为“油镜”。,转换器:其上装置各种不同放大倍数的物镜,用以转换物镜至使用位置上。,聚光镜:位于载物台的下方,可以上下移动,以使光线集中于检查的标本上光圈:位于聚光镜之下,可以放大和缩

    2、小;用以调节进入聚光镜的光量。,四、显微镜的使用1、取显微镜:右手握镜臂,左手托住镜座。 2、打开电源(调节反光镜)使射入镜头光线最强。 3、上提集光器。 4、打开光圈。 5、将标本片放在载物台上,用片夹固定。,6、调节转换器,先使低倍镜对准中央,寻找适宜的视野。7、于标本片的欲检部位滴加香柏油。8、然后转换油镜镜头,使其对准中央。9、两眼对准目镜,向上转动粗调节器,直至见到模糊物像为止。10、转动细调节器,直至物像完全清晰为止。,()将载物台降至最低,取下标本片。 ()将光量调至最小,关上电源。 ()擦试镜头:先用干擦镜纸擦掉香柏油;再用滴加少量乙醚的擦镜纸擦试;最后再用干擦镜纸擦拭。 (4

    3、)低倍镜对准中央 (5)将显微镜放入镜箱,还原。,显微镜的维护,3-3,革兰氏染色法:革兰氏染色法将细菌分为G和G- ,这由两类细菌细胞壁的结构和组成的不同而决定。用结晶紫初染后,所有的细菌都染上蓝紫色。碘作为媒染剂能与结晶紫结合形成结晶紫-碘的复合物,增强了染料与菌体的结合力。用乙醇脱色处理时,两类细菌的脱色效果是不同的。G细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成,且壁厚、类脂含量低,用乙醇脱色时使细胞壁脱水、网状结构孔径缩小,通透性降低,使得结晶紫碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内。虽经洗脱和复染仍然保持初染剂的蓝紫色。G-细菌则不同,由于其细胞壁肽聚糖层较薄,脂含量高,所以在脱色处理时

    4、,类脂被乙醇溶解,细胞壁的通透性增大,使结晶紫碘的复合物比较容易被洗脱出来,用复染剂复染后,细胞被染上复染剂的颜色。,3-4,实验器材1显微镜、香柏油、接种环、酒精灯等。2结晶紫染液(I)、碘液(II)、95%乙醇 (III)、稀释的石碳酸复红染液(IV)。3菌种:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。,方法与步骤:,涂片 干燥 固定 染色 洗涤干燥 镜检,3-5,实验步骤,1涂片 取一块载玻片,用记号笔划分出两区域并做上记号,在两区域中央各滴半滴生理盐水,用接种环以无菌操作法分别取两种菌种在左右两滴盐水中,和匀后涂成薄膜。2干燥 室温自然干燥或吹干。3固定 涂面朝上,通过火焰23次。4染色 在涂片薄膜上

    5、滴加结晶紫染液,使之覆盖2分钟。5水洗 傾倒去染液,斜置载玻片,用洗瓶小水流沿玻片边缘冲洗,直至水呈无色为止。,3-6,6. 媒染 加媒染剂碘液使之覆盖1分钟,水洗。 7. 脱色 滴加95% 乙醇数滴,立即水洗,。8. 复染 复红液复染 30s-1分钟,水洗,吸干。,注意事项:,(1)涂片不宜过厚,否则难以干燥。 (2)涂片时滴加无菌水不宜多,否则难以干燥。 (3)固定时,通过火焰速度宜适度,过快达不到固定目的,过慢易使菌体变形,绝不能在火焰上烤,招致原形毁坏。 (4)标本必须干燥,才能置于油镜下观察。,3-7,实验结果 观察两种细菌的形态和颜色,绘出油镜下细菌形态图,说明革兰氏染色的结果。 思考题,1.通过实验,你认为革兰氏染色成功关键是那一步?为了避免假阳性或假阴性出现,在对未知菌种做革兰氏染色鉴定时,你认为应该怎样做?2.使用油浸镜时为什么要用香柏油?请写出实验报告。,复习题: 使用油浸镜时为什么要用香柏油? 请写出实验报告。,

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