1、1 羟脯氨酸含量测定2 羟脯氨酸标准曲线绘制3试剂的配制 【6-7】6 李秋营,姚汝琳.细胞中羟脯氨酸的测定.山西医科大学学报.2001,32(6):558-5597 David J Etherington, Trevor J Sims. Detection and Estimation of CollagenJ. J Sci Food Agric, 1981,32:539-546柠檬酸缓冲液：柠檬酸钠120g、冰醋酸12mL、柠檬酸46g、氢氧化钠34g 溶解于蒸馏水中，调整pH 值至6.0，然后定容至1000mL。0.05mol/L 氯胺T 溶液：称取氯胺T 7.05g，溶解于100mL
2、蒸馏水中，然后加入乙二醇独甲醚150mL，再加入250mL 柠檬酸缓冲液混合均匀。对二甲基氨基苯甲醛: 试剂 A：取无水乙醇20mL，慢慢加入浓硫酸2.74mL；试剂B：取对二甲基氨基苯甲醛12.0g，慢慢加入无水乙醇40mL，水浴加热使其完全溶解并冷却至室温，然后将A 液慢慢加入B，混合均匀。3.5mol/L 高氯酸溶液：取27mL 高氯酸，以蒸馏水定容到100mL。羟脯氨酸标准曲线的绘制羟脯氨酸标准储存液：准确称取L-羟基脯氨酸标准品50mg，加入 0.01mol/L 盐酸中溶解，稀释并定容到100mL，在冰箱中保存。羟脯氨酸标准工作液：吸取羟脯氨酸标准储存液10mL到50mL 容量瓶中，
3、用蒸馏水定容到50mL(临用前配) ，浓度为100g/mL。4标准曲线绘制分别吸取羟脯氨酸标准工作液1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5mL，用蒸馏水定容到50mL容量瓶中。以蒸馏水为空白，分别吸取上述标准液1mL，加入1mL 柠檬酸缓冲液和1mL 0.05mol/L 氯胺T 溶液，室温 (25 ) 氧化10min 后， 加入高氯酸1mL(3.5mol/L)，放置10min，加入对二甲基氨基苯甲醛试剂1mL，在65 水浴显色10min ，冷却后在560nm处测吸光度。以羟脯氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求出回归方程。浓度 g/mL 0.50 1.00 1.25
4、 1,50 1,75 2.00 2.25吸光度A560 0.134 0.284 0.347 0.409 0.477 0.55 0.612羟 脯 氨 酸 吸 光 度 -浓 度 标 准 曲 线y = 0.2713x + 0.0047R2 = 0.999100.10.20.30.40.50.60.70 0.5 1 1.5 2 2.5浓 度 g/ml吸光度A561nm5 羟脯氨酸含量测定 中华人民共和国国家标准 肉与肉制品 L(-) - 羟脯氨酸含量测定 GB 9695.23-906 样品水解 将样品反复绞碎，充分混合。称取 5.000g 样品放入 250ml 三角瓶中，加入 6M 盐酸（SnCl 2 0.75%）100ml，置于电热鼓风干燥箱中 105下水解 16h，分两天进行。7 样品转化和测定将水解完的水解液过滤？ml 容量瓶中，蒸馏水定容到刻度。混合均匀后，吸取 5ml滤液于烧杯中，用 10M 和 1M 的氢氧化钠调滤液的 pH 值为 8.00.2。将调好的滤液用滤纸过滤于 250ml 容量瓶中，蒸馏水定容到刻度。准确吸取此溶液 1ml 于 20ml 的比色管中，以下操作同标准曲线绘制。按标准曲线和稀释倍数计算羟脯氨酸含量。
