1、第二讲 食用菌液体菌种生产,食用菌专题,传统菌种生产工艺，一般是由试管母种扩繁成二级种、三级种，生产周期长、污染率高、成本高、需大量人工、管理困难。液体菌种生产具有纯度高、活力强、繁殖快的特点，接种到培养料内有流动性好、萌发点多，发菌迅速等特种点。,1、工艺更简便 固体菌种的生产工艺为一级试管种二级原种三级栽培种，而液体菌种则没有级的分别，也就是说液体菌种既可以做为母种接原种，也可以做为原种或栽培种直接接栽培袋，简化了生产工艺。,一、液体菌种八大优势,生产固体菌种频繁扩接转代，生产中烟薰火烧，使菌丝活力大大降低，极易造成污染。而液体菌种生产需经过筛选、提纯，属纯菌种；在生产过程中设备封闭运行，
2、属纯培养。这样高纯度的菌种，固体菌种怎能与之相比呢？,2、菌种更纯,采用固体菌种，从制种到出菇一个周期下来至少需要45个月，甚至半年多。而采用液体菌种从制种到菌丝长满栽培袋只需15天左右的时间，从制种到出菇大部分品种只需1个月，整个生产周期一般也就是两个月。,3、周期更短,以前采用固体菌种的栽培户都知道，无论使用二级种还是三级栽培种生产栽培袋，菌种所占的成本都在1角钱以上，而用液体菌种无论是生产栽培种还是栽培袋，其菌种成本就23分钱，您说哪个更划算？,4、成本更低,采用固体菌种进行食用菌生产，栽培袋的污染率大都在810。而采用液体菌种接种后6小时萌发，24小时菌丝布满培养料面，菌种萌发速度超过
3、杂菌生长速度，没有杂菌污染。,5、污染更少,固体菌种生产需重复备料、拌料、装瓶（袋）、灭菌、接种、养菌，而液体菌种整个生产过程都是在一个罐体内完成，按键操作，既成倍降低了生产、管理费用，又节省人工，轻松制种。,6、操作更简便,采用液体菌种的产品可以比采用固体菌种的早上市2个月以上，早上市与晚上市在效益上差的可就大了。此外，采用液体菌种的栽培袋菌龄短，出菇整齐一致，适合出口要求，在价格上占优势。,7、出菇整齐上市早,采用固体菌种袋内菌丝菌龄不一致，加之受自然条件的制约，需多潮出菇多茬管理，有的没出完菇还要越夏或越冬管理。而采用液体菌种养菌时间短，出菇集中，适合工厂化、标准化全年候生产，代表产业发
4、展方向。,8、适宜工厂化标准化全年候生产,任何一种食用菌自身的生长必须满足其对温度、湿度、需氧量、养分等的需要，同时必须避免杂菌感染。在深层发酵技术上称之为选择性发酵技术，如啤酒生产技术当属此例，而白酒生产则是生物菌群发酵技术。 液体菌种发酵设备包括四大系统，温控系统由控制器、电热管等组成；供气系统由空气压缩机、输送管道、空气过滤器等组成；冷却系统由热交换器、进出水管道组成；搅拌系统由射流器、提升管等组成。,二、液体菌种设备基本原理,1、溶氧量 液体菌种生产中最关键的是培养液中氧的溶解量，因为在菌丝生长过程中，必须不断的吸收溶解其中的氧气来维持自身的新陈代谢，氧气在液体（水）中的溶解量与压力、
5、温度有关，同时与培养液的接触面积、渗透压有很大的关系。 因此我们设计发酵设备时有效地解决了这些问题，如安装射流器使气泡细碎度增加等。,三、液体菌种生产的关键技术,技术的关键就是保证进入的空气无菌度高，因此必须选择孔径小、材料先进的过滤膜。一般细菌直径在0.5-5um,酵母菌在1-10um，病毒一般在20-400mu，所以选择过滤膜时应综合考虑以上因素。当然如果选的太小，成本将大幅度提高。另外环境对于空气影响很大,在空气压缩机房、制种车间必须保持环境清洁。,2、空气过滤,培养液是菌丝生长发育的营养源，要求营养全面均衡。不同的菌种对营养要求偏重不同。配制原料有糖、麸皮、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素、
6、蛋白胨、土豆汁、酵母浸膏等。配置培养液时，先将土豆片、麸皮一起煮熟，将汁液滤出，后加入其它辅料混匀即可。,3、培养液,培养器上端有接种口，也是装料口，将母种并瓶后加入抑菌剂，而后必须在火焰圈的保护下倒入罐体内，要求动作快、操作准确。,4、接种,如前所述，环境对菌种生产影响很大，过滤器本身不可能把杂菌百分之百地滤掉，减少环境中的杂菌基数是非常重要的，液体菌种母种接入到经灭菌的培养液中只要能形成对杂菌的生长优势就可以抑制杂菌感染，也就是说，液体菌种培养不是建立在绝对无菌的前提下相反是建立在相对无菌的前提下。就此意义上说，保持环境清洁，减少空气中杂菌基数，对于提高菌种培养成功率意义较大。,5、环境,
7、工艺流程图： 空气压缩过滤 配料装罐灭菌冷却接种培养液体种 试管斜面种 三角瓶颗粒种,四、 液体菌种生产流程,液体菌种培养基的主要原料是土豆、麦麸、玉米粉、黄豆粉等,液体菌种没有“级”的分别，制种时间平均3天左右,液体菌种的接种采用接种枪，两人配合每小时可接800袋以上,接种后6小时萌发，24小时菌丝布满培养料面，菌种萌发速度比杂菌快，因此没有杂菌污染机会,采用液体菌种，栽培袋养菌时间仅为15天左右,采用液体菌种菌龄短，出菇整齐，比采用固体菌种的上市早,用液体菌种制做菌种，菌丝洁白粗壮，同样获得好效益,液体菌种为工厂化标准化全年候生产食用菌打下了良好的基础,配料时先将土豆去皮切片，与麸皮混合后
8、用不锈钢锅煮熟并取汁，在将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入，混匀后装入罐中加热，至121.3并维持40分钟左右进行灭菌，灭菌结束后用冷水冷却至培养温度，而后将并瓶后的三角瓶种接上进行培养，培养时根据不同的菌种，设定适宜的温度。,培养期间应注意观察，并做好记录。包括温度、压力、气流量、排出气体的气味等。如遇到停电，排气阀自动关闭或人工关闭来保持罐中处于正压状态。来电后重新启动，并打开排气阀继续培养。培养过程中，可随时无菌操作采样分析，几天后待菌球密度合适（从视镜观察）即可接种。,液体菌种的摇瓶培养，其主要设备是摇床(摇瓶机)，有往复式和旋转式两种。将液体培养基装入500毫升三角瓶内，每瓶装量为
9、100毫升，加入15粒左右的小玻璃珠或小块的玻璃碎片，用棉塞封口后置1.5千克压力下灭菌30分钟，取出冷至30时接种。每瓶接入1.52平方厘米的斜面菌种一块，让其悬浮于液体培养基表面且使菌丝朝上，在适温下静置培养48小时。当菌丝长至液体培养基中时，置摇床上进行振荡培养。往复式摇床振荡频率为80100次分，振幅610厘米；旋转式摇床偏心距为4毫米，振荡频率为150220转分。旋转式摇床因旋转速度过快，菌丝球一般较大，且菌丝球表面绒毛状菌丝少，一般不能用作菌种。,五、液体菌种的摇瓶培养,液体菌种接种的培养液的培养温度一般控制在2426，培养时间7296小时。培养结束后，因菌种不同，培养液出现不同色
10、泽。 平菇、金针菇的培养液呈浅黄色；香菇、猴头的培养液呈棕色； 而蜜环菌则会有荧光现象； 木耳的培养液呈青褐色、粘稠、有香甜味。 若出现培养液混浊，并伴有腐败及酸味，多为细菌性污染所致。 液体菌种需镜检后方可应用于生产。,摇床培养的液体菌种数量较少，一般只适用于固体菌种的接种。也可作为发酵罐种源，或接种于三角瓶内，每瓶接种菌液10毫升，继续进行摇瓶培养。因菌丝球正处于旺盛生长状态，菌丝球分散性好，能缩短摇瓶培养时间，快者2天即可终止培养。 液体菌种在4左右温度下可保存12个月，在1520室温下可保存710天，使用时对接种成功率、产量均无不良影响。,1. 用于原种或栽培种生产 液体菌种可以作为母
11、种和原种使用。就目前国内现有水平来说，用深层发酵方法大规模生产液体菌种还有困难，大多用摇瓶培养或小型通气发酵方法生产，以液体菌种代替母种较为理想。用液体菌种制出的原种，生活力强，上下菌龄一致，用于接种栽培种，定植快，污染率低。用摇瓶方法培养液体菌种，周期短，可连续多次扩大培养(一般不超过5代)，对生长速度、菌种质量均无不良影响。,六、液体菌种使用方法,2. 用于砖状菌种生产 在棉籽BFQ壳等培养料内，按50%100%的量加入液体菌种，拌匀后，装入消毒的纸盒、木箱、塑料箱内，用塑料薄膜包好，37天菌丝充分发育连接成菌块，作为栽培种使用。可用于平菇、凤尾菇、金顶蘑生产，不适用于香菇、黑木耳。,3.
12、 用于菌床播种 床栽：适用于平菇、凤尾菇、香菇栽培，每平方米用菌液3001000毫升，常用量为500毫升，以穴播法最好，条播次之，撒播最差，将穴播与撒播结合效果最好。栽培平菇、凤尾菇20天菌丝满床，2025天可以出菇，香菇压块栽培，在播种后40天出菇。 袋栽：将液体菌种由袋口注入或用混播法拌料。液体菌种用量为30%50%，播种后一般2635天出菇。 瓶栽：每千克干料用100毫升液体菌种，栽培平菇、凤尾菇、草菇、猴头、木耳等，1525天菌丝满瓶。,1.液体菌种的科研、生产、制种和工厂化的大规模生产单位； 2.用于多种微生物的培养; 3.含食用菌活性成分的保健食品生产； 4.各种奶制品的活性因子生
13、产; 5.生产菌丝体,提取生物活性成分来生产各种食品添加剂; 6.微生物发酵工程来制取农药、医药、激素等； 7.适用于科研单位、菌业公司、工业企业和从事食用菌栽培人员的菌类生产。,七、 应用领域,用液体菌种培养器生产一批菌种仅需3天，是使用固体菌种周期的1/10。由于液体菌种具有流动性，因而接入的菌种可流散在不同的部位萌发生长。接种后6小时左右即可看到菌种萌发变白，24小时就可吃料生长，使杂菌没有浸染机会。在25的条件下，养菌18天-20天即可长满袋，生长期是使用固体菌种的50%。,八、用液体菌种栽培杏鲍菇,杏鲍菇需要较丰富的碳源和氮源，特别是氮源越丰富菌丝生长越好，产量也越高。 配方是：木屑
14、65%、棉籽壳10%、麦麸23%、石膏1%、石灰1%。,水分：在栽培杏鲍菇菌丝生长阶段，要求空气相对湿度60%左右，子实体形成和发育阶段要求相对湿度在85%-90%。子实体发育和生长阶段，水分管理极为重要。初期菇房相对湿度要保持在90%左右，而当子实体发育期间和接近采收时，湿度可控制在85%左右，这样有利于延长子实体的保质期。不要把水喷到菇体上，特别在气温升高时，容易使子实体发黄，严重时还会感染杂菌，造成腐烂，影响产量和质量。,温度：杏鲍菇菌丝生长最适宜的温度25左右，原基形成的最适温度是10-15。子实体发育的温度因不同菌种而异，一般适温为15-21。 光线：杏鲍菇菌丝生长阶段不需光线，子实
15、体形成和发育需要散射光。 通风：杏鲍菇菌丝生长和子实体发育都需要新鲜的空气，但在菌丝生长阶段，瓶（袋）中积累的二氧化碳对菌丝生长有促进作用。随着菌丝的生长，培养料中的菌丝排出的二氧化碳逐渐增多，使培养料中二氧化碳浓度上升，能明显地刺激菌丝的生长。雨天时，子实体生长阶段还要求加大通风量。当气温上升到18以上时，在增加喷水降低温度的同时必须增加通风，避免高温高湿，造成子实体腐烂。,用液体菌种生产杏鲍菇生物学效益可达80%-100%，头潮菇产量可提高17%，总产量提高4.25%，由于产菇集中，利于市场销售。 此外，液体菌种的应用，使栽培周期缩短，因而可增加栽培批次，提高菇房的利用率，其效益是使用固体菌种所无法比拟的。,
