葡萄糖的一般杂质检查.doc

1、实验二 葡萄糖的一般杂质检查一、目的要求1掌握一般杂质检查的原理、操作方法及限量计算方法。2熟悉药物中一般杂质检查的目的和意义。二、基本原理葡萄糖是用淀粉以无机酸水解或在酶催化下经过水解得稀葡萄糖液，再经脱色、浓缩结晶制得。1国内生产方法有以下几种：酸水解法：以无机酸将淀粉水解为葡萄糖。 (C6H10O5)n +H2OClnC6H12O6双酶水解法：以生物酶为催化剂将淀粉水解为葡萄糖。 (C6H10O5)n +H2O生 物 酶 nC6H12O6酸酶水解法：以盐酸为液化剂，糖化酶为催化剂，将淀粉水解为葡萄糖。 (C6H10O5)n +H2OHCl 糖 化 酶 nC6H12O6根据葡萄糖生产工艺特

2、点，应进行氯化物、重金属、砷盐等一般杂质检查，进行蛋白质、可溶性淀粉等特殊杂质检查。2各种杂质检查原理如下：氯化物检查法 氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下处理生成的氯化银浑浊相比较，测定供试品中氯化物的限量。C1- + Ag+ AgCl硫酸盐检查法 药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡微粒而显白色浑浊液，同一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在同样条件下，用同法处理生成的浑浊比较，判断药物中含硫酸盐的限量。SO4 2- 十 Ba2+ BaS04铁盐检查法 三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性硫氰酸铁络离子

3、，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。Fe3+6SCN- Fe(SCN)63- 红色进行葡萄糖的铁盐检查时，需在显色前加硝酸 3 滴，煮沸 5min，使 Fe2+氧化为 Fe3+。由于硝酸中可能含有亚硝酸，亚硝酸也能与硫氰酸根离子反应生成红色的亚硝酰硫氰化物，影响比色，因此加入显色剂之前加热煮沸有助于除去氧化氮，以消除氧化氮生产的亚硝酸干扰。重金属检查法 重金属是指在实验条件下，能与 S2-作用生成硫化物而显色的金属杂质，如，银、铅、汞、铜、镉、铋、砷、锑、锡、锌、钻、镍等。在药品生产过程中遇到铅的机会较多，且铅在体内易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。硫代乙酰胺(thioacetamide)

4、在弱酸性(pH 约 3.5)溶液中水解，产生硫化氢，可与重金属离子结合生成有色硫化物的均匀沉淀，可与对照标准液同法处理比较。本方法的适宜目视比色范围为 27mL 溶液中含铅 1020g，相当于标准铅溶液 12mL，检查中根据规定含重金属的限量确定供试品的取用量。CH3CSNH2+H2O CH 3CONH2+H2SPb2+H2S PbS + 2H +砷盐检查法 中国药典主要采用古蔡氏(Gutzeit)法检查砷盐。其原理是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中的微量砷盐作用生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞(或氯化汞)试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，可判定药物中含砷盐

5、的限量。其反应如下：AsO3 3- + 3Zn + 9H+AsH 3 + 3Zn2+ + 3H2OAsH3 + 2HgBr22HBr + AsH(HgBr)2(黄色)AsH3 + 3 HgBr23HBr + As(HgBr) 3(棕色)五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成砷化氢的速度较三价砷慢，故在反应液中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，碘化钾被氧化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离子。 AsO43- + 2I-+ 2H+AsO 33- + I2 + H2OAsO43- + Sn2+ 2H+AsO 33- + Sn4+ H2OI2 + Sn2+2I - + Sn4+溶

6、液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能形成配合物，使生成砷化氢的反应不断进行。4I- + Zn2+ ZnI 42-氯化亚锡与碘化钾存在，可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑，在实验条件下 l00g 锑存在不会干扰测定。氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地发生。干燥失重测定法 干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，根据所减失的重量和取样量计算供试品干燥失重的百分率。干燥失重检查法主要控制药物中的水分，也包括其他挥发性物质如乙醇等。炽灼残渣检查法 炽灼残渣系指有机药物经加热炭化后再被硫酸破坏，于高温(700 800) 炽灼，

7、有机物质被破坏分解为挥发性物质逸出，残留的非挥发性无机杂质(多为金属的氧化物或盐类)成为硫酸盐，称为炽灼残渣。如炽灼残渣需留作重金属检查，则控制炽灼温度在 500600。三、仪器与试剂电热恒温干燥箱，高温电炉(马福炉)，普通电炉，水浴锅，50mL 比色管，量筒，50mL 烧杯；葡萄糖，硝酸银，硝酸，硫酸，氯化钡，硫氰酸铵，硫代乙酰胺，甘油，氢氧化钠，溴化钾，碘化钾，20 目无砷锌粒，氯化亚锡，醋酸铅，溴化汞，磺基水杨酸。四、实验方法1. 酸度取本品 2.0g，加水 20mL 溶解后，加酚酞指示液（取酚酞 1g，加乙醇100mL 使溶解,即得。 ）3 滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.

8、20mL，应显粉红色。2溶液的澄清度与颜色取本品 5.0g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至 10mL，溶液应澄清无色；如显浑浊，与 1 号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液 3.0mL、比色用铬酸钾液 3.0mL 与比色用硫酸铜液 6.0mL，加水稀释成 50mL）1.0mL 加水稀释至 10mL 比较，不得更深。浊度标准贮备液的制备 称取于 105干燥至恒重的硫酸肼 1.00g，置100mL 量瓶中，加水适量使溶解，必要时可在 40的水浴中温热溶解，并用水稀释至刻度，摇匀，放置 46h；取此溶液与等容量的 10%乌洛托品溶液混合，摇匀，于 25避光静置 24h，即得

9、。本液置冷处避光保存，可在两个月内使用，用前摇匀。浊度标准原液的制备 取浊度标准贮备液 15.0mL，置 1000mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取适量，置 1cm 吸收池中，照紫外-可见分光光度法，在 550nm 的波长处测定，其吸光度应在 0.120.15 范围内。本液应在 48h 内使用，用前摇匀。浊度标准液的制备（1 号） 取浊度标准原液 5.0mL 加水 95.0mL ，摇匀，即得。3. 乙醇溶液的澄清度取本品 1.0g，加 90%乙醇 30mL，置水浴上加热回流约 10min，溶液应澄清。4. 氯化物取本品 0.60g，加水溶解使成 25mL(如溶液呈碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试

10、纸显中性反应) ，再加稀硝酸（取 105mL 硫酸加水稀释至 1000mL，即得。 ）10mL，溶液如不澄清，应滤过；置 50mL 纳氏比色管中，加水使成约 40mL，摇匀，即得供试液。另取标准氯化钠溶液 6.0mL 置 50mL 纳氏比色管中，加稀硝酸 10mL，用水稀释使成约 40mL，摇匀，即得对照液。向供试液与对照液中分别加硝酸银试液(0.1mol/L)1.0mL，用水稀释使成 50mL，摇匀，暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，如发生浑浊，样品管不得比对照管更浓(0.01) 。标准氯化钠溶液的制备：称取氯化钠 0.165g，置 1000mL 量瓶中，加水适量使溶解

11、并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量贮备液 10mL，置 100mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每 1mL 相当于 10g）5硫酸盐取本品 2.0g，加水溶解使成约 40mL(如溶液显碱性，可滴加盐酸使遇石蕊试纸显中性反应) ；溶液如不澄清，应滤过；置 50mL 纳氏比色管中，加稀盐酸（取 234mL 硫酸加水稀释至 1000mL，即得。 ）2mL，25氯化钡溶液 5mL，加水稀释使成 50mL，摇匀，放置 10min，如发生浑浊，与标准硫酸钾溶液 2.0mL同法制成的对照液比较，不得更浓(0.01)。标准硫酸钾溶液的制备：称取硫酸钾 0.181g，置 1000mL 量瓶中

12、，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每 1mL 相当于 100g 的 SO4）6. 亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品 1.0g，加水 10mL 溶解后，加碘试液(0.05mol/L)1 滴，应即显黄色。7干燥失重取本品约 1.0g，然后在 105干燥至恒重，减失重量不得过 9.5。8. 炽灼残渣取本品 1.02.0g 置已炽灼至恒重的瓷坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸 0.51mL 润湿，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700800炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷，精密称定后，再在700800炽灼至恒重，所得炽灼残渣不得超过 0.1。9. 蛋白质 取本品 1.0g，加水 10mL

13、 溶解后，加磺基水杨酸溶液（15）3mL，不得发生沉淀。10铁盐取本品 2.0g，加水 20mL 溶解后，加硝酸 3 滴，缓缓煮沸 5min，放冷，加水稀释使成 45mL，加硫氰酸铵溶液(30100)3mL，摇匀，如显色，与标准铁溶液 2.0mL 用同一方法制成的对照液比较，不得更深(0.001)。标准铁溶液的制备：称取硫酸铁铵（FeNH 4(SO4)212H2O）0.863g，置1000mL 量瓶中，加水溶解后，加硫酸 2.5mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液 10mL，置 100mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每 1mL 相当于 10g 的 Fe）11

14、重金属取本品 4.0g 置于 25mL 纳氏比色管中，加 23mL 水溶解后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5) 2mL，加硫代乙酰胺试液 2mL，放置 2min 后，与标准铅溶液(10g/mL Pb2+)2mL 用同一方法制成的对照液同置白纸上自上向下比较，不得更深(百万分之五) 。醋酸盐缓冲液(pH3.5) ：取醋酸铵 25g,加水 25mL 溶解后,加 7mol/L 盐酸溶液 38mL,用 2mol/L 盐酸溶液或 5mol/L 氨溶液准确调节 pH 至 3.5(电位法指示),用水稀释至 100mL,即得。硫代乙酰胺试液配制：取硫代乙酰胺 4g，加水使溶解成 100mL，置于冰箱中保存。临用前

15、取混合液由氢氧化钠液(1mol/L)15mL，水 5.0mL 及甘油 20mL组成5.0mL，加上述硫代乙酰胺溶液 1.0mL，置水浴上加热 20s，冷却，立即使用。标准铅溶液的制备：称取硝酸铅 0.160g，置 1000mL 量瓶中，加硝酸 5mL与水 50mL 溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液 10mL，置 100mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每 1mL 相当于 10g 的 Pb） 。配制与贮存的玻璃容器均不得含铅。12砷盐取本品 2.0g，置检砷瓶中，加水 5mL 溶解后，加稀硫酸 5mL 与溴化钾-溴试液（取溴 30g，与溴化钾 30g，加水

16、使溶解成 100mL）0.5mL，置水浴上加热约 20min，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸发的水分，放冷，加盐酸 5mL 与水适量使成 28mL，加碘化钾试液5mL 及酸性氯化亚锡试液(取氯化亚锡 1.5g，加水 10mL 与少量的盐酸使溶解，即得。本液应临用新配)5 滴，在室温放置 10min 后，加锌粒 2g，迅速将瓶塞塞紧(瓶塞上已安放好装有醋酸铅棉及溴化汞试纸的导气管)，保持反应温度在2540（视反应快慢而定，但不应超过 40） ，反应 45min 后，取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与标准砷溶液一定量制成的标准砷斑比较，颜色不得更深（0.0001%）

17、 。标准砷溶液的制备：称取三氧化二砷 0.132g，置 1000mL 量瓶中，加 20%氢氧化钠溶液 5mL 溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸 10mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液 10mL，置 1000mL 量瓶中，加稀硫酸 10mL，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每 1mL 相当于 1g 的 As） 。标准砷斑的制备：精密吸取标准砷溶液 2mL 置另一检砷瓶中，加盐酸 5mL与水 21mL，自“再加碘化钾试液 5mL 及”起，依法操作即可。五、操作注意事项1纳氏比色管的选择与洗涤比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，因此在选用比色管时，必须注意使样品与

18、标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上的刻度均匀，如有差别，不得大于 2mm。纳氏比色管用后应立即冲洗，比色管洗涤时避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁划出条痕影响比色或比浊。2平行操作原则进行比色、比浊、砷盐检查时，样品液与对照液的实验条件应尽可能一致，严格按照操作步骤平行操作，按规定顺序加入试剂。比色、比浊前可利用手腕转动 360 的旋摇使比色管内试剂充分混匀。比色方法一般是将两管同置于白色背景上，从侧面观察；比浊方法是将两管同置于黑色或白色背景上，自上而下地观察。3实验中应准确选用量具，杂质检查中允许的误差为10，量筒的绝对误差为 1mL，刻度吸管的绝对误差为 0.010.

19、1mL，在实验中，应根据样品、标准液的取用量正确选用量器。例如，取标准液 2mL 应选择刻度吸管或移液管吸取标准液。取样品 2g，允许的误差为 0.2g，可选用称量精度为 0.1g 的普通天平。4进行铁盐检查时，采用硝酸将 Fe2+氧化为 Fe3+，标准液应与样品液同法操作。样品液加硝酸煮沸时，应注意防止暴沸，必要时补充适量水。5砷盐检查时采用湿法破坏葡萄糖，在酸性溶液中用溴进行有机破坏使砷游离。有机破坏可在检砷瓶中进行，20min 内要保持过量的溴存在，随时补充消耗的溴化钾溴试液和水分，使溶液呈黄色，20min 后必须将多余的溴除尽，使溶液五色，否则溴将氧化碘化钾生成 I2，干扰检查。加砷粒前安装好醋酸铅棉花和溴化汞试纸，醋酸铅棉花的填塞松紧度应适宜，溴化汞试纸应盖住检砷管孔，并盖紧盖子，勿漏气。加砷粒后必须立即塞紧检砷管，在规定温度下反应 1h。砷盐检查中所用锌粒应无砷，并能通过 20 目筛。如所用锌粒较大时，用量可酌量增加或应适当延长反应时间。6酸碱度检查用水必须是新煮沸放冷的水，应用刻度吸管量取酸碱滴定液。7重金属检查中，应根据杂质限量计算公式，计算出标准铅溶液的取用量。六、思考题1比色、比浊操作中应注意什么原则?2是否所有药物都要对各种一般杂质进行检查?3砷盐的检查中加入各种试剂起什么作用?