1、绪 论,问题并不可怕，有问题说明还有很多地方，我们没有注意。提示我们加快改变，防止更大的问题出现。,以前事故列表,问题的区分,种母室问题总的可以分为三类：1.污染类：由于污染菌接触发酵液所致；2.菌种质量类：没有按照标准操作导致菌种质量受到影响；3.制度规范类：没有按照制度办事；,污染类问题发生原因,steam,steam,steam,CW,CW,steam,另外，JAR有5个直接开口： 1.空气系统；2.取样口系统；3.排气系统；4.上盖系统；5.测量系统,JAR本身的密闭性能：如JACKET、视窗、视镜等,steam,steam,steam,CW,CW,steam,在接种和杀菌过程中，不出
2、现问题的话。加上上面所说的完美完成的话，没有污染发生。,steam,steam,CW,CW,JACKET主要用于温度控制，内部流动的介质为动力部门提供的冷却水或者冷冻水。冷却水和冷冻水在动力部门只是通过冷却塔或者冷冻机将自然界中常温水降温到1025左右。可以看出其中含有大量的污染细菌。一旦JACKET泄露，污染菌会通过JAR壁进入罐中污染。污染菌为球菌杆菌，颜色发暗；,泄露原因：1）生产厂家制作过程中问题；2）蒸汽反复杀菌并进行冷却导致；3）反复检查操作机械性损伤；,检查方式：1）JACKET通蒸汽升温，通入冷却水，3KG/CM2空气加压，检查有无水珠；2）JAR中加水，JACKET通3KG/
3、CM2空气，检查有无气泡产生；,视窗视镜是为了在培养过程中观察方便而增加的附属装置。在带来方便的同时也同样带来很多问题。一不小心便会污染。,根据以往经验，由于视窗视镜导致污染很少或者几乎没有，但是需要注意以下事情：1）材质为钢化玻璃，不要骤冷骤热；2）安装要平衡用力，否则可能受力不均匀而折断； 3）时常检查螺帽有无松动，防止泄露；,steam,steam,空气系统问题产生原因分析： 1）浑浊气体没有过滤充分：过滤器本身问题、安装问题、杀菌问题； 2）空气过滤充分以后再次污染：设备（管道、法兰、阀门）本身问题、操作失误、外部非人为因素变动情况； 3）NH3管理不善； 4）清洗以及杀菌；,排气系统
4、问题产生原因分析： 1）外部气体进入； 2）由于发酵液回流将污染菌带入； 3）管道本身存在泄露； 4）清洗以及杀菌； 5）操作失误；,取样口系统问题产生原因分析： 1）操作失误； 2）阀门、管道等设备本身问题； 3）移送管道问题； 4）移送问题； 5）移送管道杀菌问题,由于上盖而产生的问题好象几乎没有，个人认为出现问题时，比较隐蔽。即使有问题发生也很少注意到是由于上盖的密封性能、操作失误等原因引起的。,上盖产生问题原因分析： 1）本身问题：0-RING、垫片问题； 2）杀菌不充分，与发酵液接触；,测量系统包含：PH电极、DO电极以及预留口（盲塞）等等；由于结构比较复杂，又于发酵液直接接触，在安
5、装杀菌日常维护等过程中应当特别小心。防止出现问题。,PH电极、DO电极通过0-RING与螺帽与JAR连接在一起。他们的状态直接关系到污染：因此注意检查，保持本身的清洁。注意对其进行维护防止在培养过程中因功能失效从而导致培养失败。,菌种质量类问题,菌种在培养过程中受到培养基成分、培养条件、条件控制等方面的影响。假若影响不十分剧烈，外观无法判断。因此只能从开始源头捉起，防止此类事故发生。,1）培养基： 培养基成分是菌种生存的基础。在好的培养基中菌种才能正常生长，从而提高产品的质量和数量。 调制培养基的过程中注意成分的分子式、含量，防止多加、少加、漏加、错加。 溶液长时间的放置会出现沉淀，添加之前注
6、意溶解。 MIX由于对于热不稳定，在调制或者溶解的过程中防止成分破坏；溶解温度控制在60以内，加热时间不要太长。假若MIX中沉淀多的话，重新调制使用。 按照培养基成分表进行调制的过程中，注意将实际称量值进行记录。一旦发生问题有记录可以参考。不要称量完毕之后重新进行记录，有可能导致漏加或者量有问题。 由于A/F直接影响到装液系数，假若忘记加可能导致FOAM多，培养过程生长很慢或者增加污染机会；,2）培养条件： 培养条件：PH、温度、RPM、VVM、内压等 PH：由于PH受到温度的影响较大，因此校正过程中首先保证温度的恒定；PH过高过低对于菌种的影响最大。 以前PH出现的问题最多：包括接种之前PH
7、的调整，培养过程中PH变化甚至PH电极毁坏等等。 PH是非常重要的测量和控制参数，因此在校正或者调整的过程中都要小心缓慢进行，不可匆忙操作； PH电极反应迟钝，不准确的情况需要及时进行更换； 注意PH电极的维护，维持PH电极的清洁；使用完毕之后将电极放入保护液中进行储存保管； PH电极线要保持干燥，否则可能导致测量数据不准或者不能进行校正的情况；,温度：所有的温度事故都是温度升高； 温度升高的原因； a.蒸汽管道管理不善：蒸汽通入正在培养的罐中或者夹套使培养终止； b.冷却水停止或供应不足；发酵热影响使温度升高； c.冷却水停止蒸汽回流： JAR由于没有冷却水的回流管道,利用PURGE管道进行
8、排水往往出现此中问题:注意管理好PURGE管道中的V/V防止出现事故,通常阀门处于关闭状态,在杀菌之前进行打开PURGE; JAR由于冷凝水多的缘故也将蒸汽的PURGE管道与空气的PURGE管道连接到一起,因此在对空气进行PURGE的过程中注意不要使蒸汽回流;,VVM：由于通气量相对比较稳定，注意维持流量计洁净，特别是FOAM比较多的时候，一定要进行清洗； RPM：由于JAR的转速是可以调整的，目前由于转速达不到，只能维持尽可能大的速度。但是要定期进行校正； 内压；对于JAR来说，只要加入A/F，压力维持没有问题；,制度规范类,菌种安全管理 工厂内部规章制度 作业标准 卫生操作标准等等,制度类只要大家在工作中注意，很容易避免。往往由于麻烦、不愿意、懒惰等导致问题的发生。,其他,除上面涉及到的问题之外，还有设备事故，比如INCUBATOR 温度升高、SHAKER忘记启动等等。,
