1、血凝试验常见问题小结,陈永玲,常见问题小结,病人结果异常 质控出控 定标失败 其它问题,出现病人结果异常怎么办？,查看质控结果 检查定标情况（定标项目） 问题性质：偏高？偏低？ 区分问题原因： 样本问题 系统问题 试剂问题 仪器问题,病人结果异常,病人结果异常,质控在控：则可能是样品本身的原因 质控出控：参见质控失控处理,样本问题,如果重复测定一个样本，并在测定之前及之后都运行了质控，并且质控结果良好，那么毋庸置疑，结果异常的原因是由样本引起的。,样本问题,样本是否有凝块？ 样本放置了多长时间？ 样本的离心是否到位？ 抗凝剂种类是否正确？比例是否正确？（推荐使用106mmol/L或109mmo
2、l/L的枸橼酸钠1:9比例抗凝） 采血过程是否顺利？ 是否正确加入试管？ 加入样本杯的样本量是否足够？,样本问题,取血时患者是否在输液？是否从输液管同侧取血？ 样本是否有黄疸、溶血、脂血？ 患者使用过什么药物？特别是抗凝药物，比如华法令、肝素。 患者所患何种疾病？ 如果是外院送来的样本，确定是血浆还是血清？ 加入样本杯时是否混入气泡？,乏血小板血浆,何为乏血小板血浆？PLT10,000/uL 为什么要使用乏血小板血浆？ 血小板的膜磷脂可以直接参与凝血过程 活化的血小板释放能够结合肝素的血小板因子4（PF4） 血小板的膜磷脂会抑制狼疮抗凝物的活性，影响LAC的检测,血小板对测试项目的影响,PT、
3、APTT：时间缩短？ LAC：可以被血小板释放的磷脂结合，导致假阴性 Heparin:被血小板结合，结果假性偏低 Factor V：假性偏高,样本离心,离心力：RCF=1500g, 15minRCF(g)=1118 x r(rpm/1000)2RCF: Relative Centrifuge Force 相对离心力rpm: rotations per minute 每分钟转速r: radius (cm) 离心机半径 一般离心机约3000转，离心15分钟,样本保存,IL推荐样本保存温度和时间 闭盖 室温或者2-4（PT）：24小时 闭盖 室温或者2-4（APTT）：4小时 其它测试： 闭盖 室温
4、或者2-4：4小时 闭盖 室温或者-20：两周 闭盖 室温或者-70：六个月,*闭盖，离心或未离心的全血。,温度带来的问题,要迅速冷冻/迅速复溶 因子降解 寒冷会激活Factor VII,缩短PT时间 温度低于-70，VIII降解迅速 不能使用除霜冰箱：自动除霜会使样本变质,抗凝剂的使用,临床常用106mmol/L（3.02%）或者109mmol/L（3.2%）的枸橼酸钠作为凝血试验的抗凝剂 ICSH推荐使用109mmol/L（3.2%）的枸橼酸钠 109mmol/L的抗凝剂，PT、APTT的结果略长于106mmol/L 含有肝素的样本受影响更大 INR会有明显的区别,抗凝剂的使用,抗凝管内血
5、抽少了（55%） 必须调节和校准抗凝剂的用量 C=1.85 X 10-3(100-H) x VC=抗凝剂的体积(ml) V=全血的体积(ml) H=HCT(%) 比如：HCT=60% C=1.85 X 10-3(100-60) x 1.8C=0.13ml,APTT时间偏长可能原因（样本）,患者使用过肝素治疗 未加盖的标本导致CO2丢失，血浆pH值升高，引起Factor V活性减低 样本HCT过高，未进行抗凝剂用量校准，致使抗凝比例过高 已经发生部分凝固的样本 不恰当的样本保存 有狼疮抗凝物LAC 因子缺乏或者有因子抑制物,APTT时间偏短的可能原因（样本）,使用玻璃管抽血，激活了血浆XII 穿
6、刺针位置不对,PT时间偏短的可能原因（样本）,抽血穿刺不顺，释放组织因子，触发外源性凝血途径 不恰当的冷冻和复溶血浆，引起F:VII冷激活 混入气泡导致溶血 不恰当的抗凝比例，HCT偏低的病人未进行抗凝剂用量的校准,PT时间偏长的可能原因（样本）,部分凝固的样本导致凝血因子的消耗 不恰当的冷冻和复溶样本导致因子的失活 HCT高（55%）的病人未进行抗凝剂用量的校准,质控问题,偶然误差 系统误差,质控结果突然变化（偶然误差）,质控品问题 试剂问题 是否更换新批号试剂？ 输入的靶值是否正确（ISI，定标靶值）？ 是否是新的发货？ 有些在不同时间运输过来的试剂也可能会产生问题 试剂配置是否正确？ 定
7、标问题（详见定标失败问题分析）,质控结果突然变化（偶然误差）,如果有可能，试用另一盒试剂，另一批号运输的试剂或另一批号的试剂 运输问题-热应力（heat stress） 通常受影响的试剂，反应性能降低 是否使用冻过的试剂? 试剂配置的问题？ 水的问题 吸液不准的问题 污染问题,质控结果突然变化（偶然误差）,反应杯Rotor/Cuvette问题 批号改变 清洗过或者反复使用 仪器原因 是否进行过系统保养或维修,质控结果有持续性变化（系统误差）,系统污染 瓶子（用来稀释试剂的）污染 配置试剂用水 吸管（清洗时残留清洁剂） 试剂池污染 开盖的试剂，试剂蒸发浓缩 冲洗站污染,质控结果有持续性变化（系统
8、误差）,吸样针组件的问题：脏、有蛋白或纤维沉积 稀释系统问题-漏液 试剂保存 试剂接近效期,质控出控问题分析流程,重新复溶一瓶新的质控品重新测试 干粉质控品在使用之前必须确保充分溶解 开瓶有效期内使用 质控品保存多长时间了？质控品不用时应当冷冻保存 质控品肉眼状态如何？有无明显的凝块等？ 是否更换过新购买的质控？ 是否重新定标了？,定标失败？,定标问题分析,是否定标完就出现问题？ 检查定标时所用的耗材 定标品的溶解、保存、效期 因子稀释液是否新鲜？ 定标靶值输入是否正确,定标问题分析,检查定标曲线的Y轴，确定起始点的值和以前的定标曲线的起始点的值是否接近（应该是接近的），同时检查定标点的连续性
9、。如果本次定标结果和以往定标结果有明显漂移，则可能是试剂系统有问题（试剂和定标液）。如果各点之间连续性差，则应当检查仪器（流路系统） 试剂问题 检查设置是否正确，如果试验不是IL锁定试验，检查其它参数设置是否正确,试剂准备注意事项,将试剂、质控、校准品从冰箱取出 仅仅取出你所需要的 立即将整盒包装放回冰箱 复溶试剂时将日期标注在试剂瓶上已备查看 将需要的质控品和校准品倒入小杯子 将瓶内剩余物立即放回冰箱 质控品和校准品在室温中放置时间越长，降解越快 不要将已经使用过的质控品和校准品倒回原瓶,试剂准备注意事项,复溶试剂时应当使用干净的吸管 如果使用清洗过的移液管，要保证不要残留清洗剂 不要将移液
10、管保存在盛有水的烧杯中，每次溶解试剂时要使用一根新的移液管 注意盛装稀释试剂用水的容器 将剩水弃去，在加入新水 定期清洗容器，防止污染 保持水温恒定，不要有时用过冷的水，有时用温水来复溶试剂 如果怀疑有细菌污染，可以将容器及水源作细菌培养鉴定,试剂准备注意事项,复溶试剂时不要盖错试剂瓶的盖子 不要将用过的剩余试剂倒入新试剂瓶内混用，否则有可能会污染整瓶试剂 当收到一批新近运来的试剂时： 在试剂盒上标注日期，并记录保存温度 需冷藏的试剂在运输时也需要保持适当的温度，如果你收到试剂时，发现没有按要求保存，可以记录温度标注在该盒试剂上，当使用这盒试剂时，如果出现问题，便于查找原因,仪器问题分析,仪器
11、精密度差：管路堵塞，管道被压紧，管道连接不好，针堵了或者有沉积物 放错试剂 仪器污染 分析区脏 光路问题 针的位置不对 需要系统保养,系统问题,三、特殊问题,如果总是发现第一个样本出问题，则可能是吸样或流路问题。按下列流程检查： 检查试剂瓶有无气泡 检查管路有无气泡 冲洗，去除气泡 执行针清洗程序Cleaning Procedure/Prime 确定针位，必要时调整 在第一、第二个位置做质控 如果问题依然存在，请维修工程师检查流路,三、特殊问题,如果偶见或经常发现样本或质控重复性不好，则可能的原因有： 试剂瓶有无气泡 检查管路组件有无气泡? 针位是否正确，反应池是否有污迹 反应杯有无重复使用 请工程师维修,问题分析小结,质控品问题 多项目质控结果均出现问题，则可能是质控品问题 定标问题 要求定标的项目出现问题，而其它项目质控结果良好 试剂问题 试剂准备、试剂保存 仪器问题 在同一仪器上，对于一个或者多个测试，所有患者/所有水平的质控都受影响，可能是仪器问题,谢谢！,
