1、（1）酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 （2）酵母菌子囊孢子的观察,实验八,一、目的要求,1. 观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。 2.学习掌握区分酵母菌死、活细胞的实验方法。 3. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 4.学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。,二、基本原理酵母菌形态,酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。,二、基本原理美蓝染色液 美蓝为无毒性染料，其氧化型为
2、蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。,美蓝（氧化型） 蓝色,美蓝（还原型） 无色,还原剂,氧化剂,二、基本原理死活细胞鉴别原理,美蓝（氧化型） 蓝色,美蓝（还原型） 无色,酵母活细胞,新陈代谢,还原能力,子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌
3、形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏 (McClary) 培养基 ( 葡萄糖醋酸钠培养基 ) 有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。,二、基本原理子囊孢子观察,三、实验器材,1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae) 2.溶液与试剂：0.1% 吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，0.5%沙黄、95%乙醇 3. 培养基：麦芽汁琼脂斜面，麦氏琼脂斜面。 4. 仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片酒精灯、接种环等。,四、操作步骤美兰染色,在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔，混合均匀；（注：染液不宜过多或过少）
4、,用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；（注：盖玻片不宜平着放下）,将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。,染色30min后再次观察，注意死活细胞数量的变化；,用其它浓度的吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。,四、操作步骤子囊孢子观察,1.菌种活化：将酿酒酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上，2528 度培养24h左右，然后再转种23次。（注：麦芽汁斜面培养基需用新配制、表面湿润的。） 2. 产孢培养：将经活化的菌种转接到麦氏琼脂斜面上，2528度培养约一周。 3. 制片：取经产孢培养的酵母斜面培养物，在洁净载玻片上
5、按常规涂片、干燥、固定。 4. 染色：滴加孔雀绿染液染色 1min。 5. 脱色：用 95% 的乙醇脱色 30s，水洗。 6. 复染：用番红复染 30s，水洗，用吸水纸吸干。 7. 镜检：干后用油镜观察子囊孢子呈绿色、菌体和子囊孢子呈粉红色。,五、实验报告,1. 结果 （1） 绘图说明你所观察到的酵母菌的细胞结构及出芽生殖方式。 （2）绘图说明酿酒酵母的营养细胞、子囊和子囊孢的形态特征。2. 思考题 （1）吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量 有何影响试分析其原因。 （2）在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌 （3）如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子 （4）酵母菌在实际应用中有什么作用？,酵母菌图片（1）,酵母菌图片（2）,酵母菌图片（3）,酵母菌子囊孢子的形成过程 1、2、3、4：两个细胞结合；5：接合子； 6、7、8、9：核分裂；10、11：核形成孢子,
