1、槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（一）一、 实验目的 1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。二、实验原理芦丁：浅黄色针状结晶，mp174-178。溶解度：1：8000；热水1:200；冷乙醇 1:300；热乙醇 1:30；冷甲醇 1:100；热甲醇 1:10.槲皮素：黄色结晶，mp313-314（2 分子结晶水） ，能溶解于冷乙醇（1:650） ，易溶于沸乙醇（1:60） ，可溶于甲醇、乙酸乙酯等；难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸
2、化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛 PH 试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取：取槐米 20g 置 500ml 烧杯中，加入沸水 400ml 及 1g 硼砂，搅拌下加入石灰乳调至 PH8-9,保持微沸 30 分钟（注意保持PH8-9） ，并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用 200ml 水按同样的操作再提取 20 分钟，合并两次滤液。浓缩至 1/2 体积，滤液在 60-70 再用盐酸调至 PH4-5，静置一周，析出芦丁。五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉
3、法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。PH 应严格控制 8-9，不得超过 10,。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。酸沉淀时 PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。2、提取过程中加入硼砂作用：保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（二）一、实验目的1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。2、熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。二实验原理
4、芦丁粗品可利用芦丁对冷、热水 的溶解度相差悬殊的特性进行精制。芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通过纸层析鉴定。芦丁及槲皮素还可以通过化学反应及紫外光谱鉴定。三、药品材料芦丁粗品、 硫酸、 盐酸、 氢氧化钠、 镁粉、 -萘酚、 三氯化铝、 葡萄糖溶液、 鼠李糖溶液、 95%乙醇、 碳酸钡、 广泛 PH试纸、 层析滤纸等。四、实验操作（一） 芦丁的提取和精制1、芦丁的提取：取前次操作芦丁沉淀液，慢慢倾去上清液后，抽滤，沉淀用少量冷水洗涤 2-3 次，抽干，得到芦丁的粗产物。2、重结晶：称定粗品芦丁的重量，按约 1:200 的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸 10 分钟使芦丁全部溶解，趁热
5、抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置于空气中晾干或 60-70 干燥，得精制芦丁，称重，计算收率。3、芦丁的水解：取芦丁 1g，置于 250ml 圆底烧瓶中，加入 2%硫酸溶液 80ml 直火微沸回流 1 小时，至析出的黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约 15ml）重结晶即得精制槲皮素。取水解后的母液 20ml，加入碳酸钡细粉中和至 PH7，滤除生成的碳酸钡沉淀。滤液置水浴上浓缩至 1-2ml ，供纸色谱用。（二） 鉴定1、 性质实验（1）盐酸-镁粉反应：取芦丁少量置于试管中，加 1ml 乙醇使溶解，加
6、 5 滴浓盐酸，再加少许镁粉，注意观察颜色变化的情况。（2）Molisch 反应：取芦丁和槲皮素少量，分别置试管中各加 1ml乙醇使溶解，加几滴 -萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁加浓硫酸 10滴，注意观察两液面间产生的颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。2、 色谱鉴定（1）芦丁及槲皮素的纸色谱检识点样：取新华 1 号滤纸；距下端 3cm 处用铅笔划线，为起始线，隔1.5cm 处点样品。将点好的样品的滤纸挂在层析杠中饱和半个小时，再上行展开。支持剂：层析滤液（5cm*10cm）展开剂：正丁醇-醋酸 -水（4:1:5 ）上层样品：自制槲皮素的乙醇溶液自制芦丁的乙醇溶液对照品：芦丁标准的乙醇溶液显色剂：
7、a、可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点b、 喷雾三氯化铝乙醇溶液，紫外灯下观察荧光斑点（2）糖的纸色谱检识支持剂：层析滤纸（5cm*10cm）展开剂：正丁醇-醋酸 -水（4:1:5 ）上层样品：水溶液对照品：1% 葡萄糖标准品醇溶液及 1%鼠李糖标准品溶液显色剂：喷以邻苯二甲酸苯胺溶液，105烘焙 5 分钟至斑点显色清晰（3） 芦丁及槲皮素的薄层色谱鉴定吸附剂：硅胶 G 板，105-110活化 1 小时展开剂：氯仿-甲醇- 甲酸（ 15:5:1）样品：自制槲皮素的乙醇溶液自制芦丁的乙醇溶液对照品芦丁标准品的乙醇溶液显色剂：a、可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点b、喷雾三氯化铝乙醇溶液，紫外灯下观察荧光斑点五、实验说明及注意事项芦丁的提取方法较多，如碱提取酸沉法，是利用其具有酸性易溶于碱性水，加酸酸化后又析出沉淀的性质进行的。
