1、Powerful PCR Cloning Tools Topo TA 克隆方法（Topo TA Cloning Kit） Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T4连接酶把PCR片断连接到T 载体上，而Topo TA Cloning用的是DNA Topoisomerase。 Topoisomerase 的用途一般使用在复制 DNA 前把超螺旋 DNA 切割使之解旋后，再连接成线性 DNA。 Topo TA克隆即使用Topoisomerase高效连接的特性把含3A端的PCR扩增片断快速连接到3T 端载体上，整个反应只需五分钟！一般 T4 连接酶需过夜才能高效连接。Top
2、o TA 克隆系统提供 Topoisomerase I载体，感受态细胞，SOC培养基等。 Topo 平端克隆方法和长PCR 片断克隆法（Zero Blunt Topo PCR Cloning Kit）（Topo XL PCR Cloning Kit） 因为越来越多高确限度热稳定酶如 Pfx、Pfu 被用于 PCR 扩增，使到 PCR 后都只是平端产物。这种 平端克隆往往效率低，并且有非特异性背景菌落产生，造成筛选困难。 Topo 平端克隆主要改良载体设计，把 ccdB （Control of cell death）基因并入到 mcs 中， 如果没有DNA片断插入，ccdB基因则会表达，ccdB
3、基因的表达蛋白，会破坏细菌的DNA gyrase， 造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断，则 ccdB 基因表达受到阻碍，所以细胞可 生长。这样可以把高背景的缺点改善，节省筛选的时间。Topo 平端克隆与 Topo TA 方法一样，操 作简单快速。 TOPO PCR 表达克隆法 传统限制酶切法必须把目标片段切下来再连接至表达载体上，这会导致一些非原始蛋白的其他 氨基酸也混在其中，从而影响蛋白表达和蛋白的功能。利用TOPO克隆技术把PCR产物直接克隆至 表达载体，则可避免这种情况。 TOPO PCR表达克隆法仍利用特异引物把目标基因PCR扩增后，再利用高效的Topoisomerase 酶 把产物快速连接到T表达载体上，这是到载体上的目标基因不含非编码区，Invitrogen提供了原 核细胞、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞的各种PCR克隆表达系统。
